Resultado da pesquisa (23)

Termo utilizado na pesquisa Alfieri A.A

#1 - Pseudomonas spp. and other psychrotrophic microorganisms in inspected and non-inspected Brazilian Minas Frescal cheese: proteolytic, lipolytic and AprX production potential

Abstract in English:

The most consumed cheese in Brazil, Minas Frescal cheese (MFC) is highly susceptible to microbial contamination and clandestine production and commercialization can pose a risk to consumer health. The storage of this fresh product under refrigeration, although more appropriate, may favor the growth of spoilage psychrotrophic bacteria. The objective of this study was to quantify and compare Pseudomonas spp. and other psychrotrophic bacteria in inspected and non-inspected MFC samples, evaluate their lipolytic and proteolytic activities and their metalloprotease production potentials. Twenty MFC samples were evaluated: 10 inspected and 10 non-inspected. Counts of psychrotrophic bacteria and Pseudomonas spp., evaluation of the proteolytic and lipolytic potential of the isolates, and identification of potential producers of alkaline metalloprotease (AprX) were assessed. The mean total psychrotrophic counts were 1.07 (±2.18) × 109CFU/g in the inspected samples and 4.5 (±5.86) × 108CFU/g in the non-inspected, with no significant difference (p=0.37). The average score of Pseudomonas spp. was 6.86 (±18.6) × 105 and 2.08 (±3.65) × 106 CFU/g for the inspected and non-inspected MFC samples, respectively, with no significant difference (p=0.1). Pseudomonas spp. represented 0.06% and 0.004% of psychrotrophic bacteria found in inspected and non-inspected MFC samples, respectively. Collectively, 694 psychrotrophic strains and 47 Pseudomonas spp. were isolated, of which 59.9% and 68.1% were simultaneously proteolytic and lipolytic, respectively. Of the 470 psychrotrophs isolated from inspected and 224 from non-inspected cheese samples, 5.74% and 2.23% contained aprX, respectively, while 100 and 86.96% of the Pseudomonas spp. isolates in inspected and non-inspected cheese samples contained the gene. The production potential of AprX did not, however, determine the proteolytic activity on plates of these isolates under the conditions evaluated in this study. Of total, 65.63% of the psychrotrophs that contained aprX gene were confirmed as Pseudomonas spp., using genus-specific PCR. Phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene of the other psychrotrophs that were potential producers of AprX identified them as Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1), and Acinetobacter schindleri (n=1) in the inspected samples and Psychrobacter sanguinis (n=1) and Leuconostoc mesenteroides (n=1) in the non-inspected samples. The production conditions of Brazilian MFC of these samples, while meeting the legal determinations, are not sufficient to control Pseudomonas and other spoilage-related psychrotrophs. Thus, stricter hygienic measures are required during the formal production of this type of cheese.

Abstract in Portuguese:

O mais consumido no Brasil, o queijo Minas Frescal (QMF) é altamente suscetível à contaminação microbiana e a produção e comercialização clandestina podem representar um risco para a saúde do consumidor. O armazenamento deste produto fresco sob refrigeração, embora mais apropriado, pode favorecer a multiplicação de bactérias psicrotróficas deteriorantes. O objetivo deste estudo foi quantificar e comparar Pseudomonas spp. e outras bactérias psicrotróficas em amostras de QMF inspecionadas e não inspecionadas, avaliar o potencial lipolítico, proteolítico e de produção de metaloprotease alcalina. Vinte amostras de QMF foram avaliadas: 10 inspecionadas e 10 não inspecionadas. Foram avaliadas as contagens de bactérias psicrotróficas e Pseudomonas spp., o potencial proteolítico e lipolítico dos isolados e a identificação de potenciais produtores de metaloprotease alcalina (AprX). A média total das contagens de bactérias psicrotróficas foi de 1,07 (±2,18) × 109UFC/g nas amostras inspecionadas e 4,5 (±5,86) × 108UFC/g nas não inspecionadas, sem diferença significativa (p=0,37). A média de Pseudomonas spp. foi de 6,86 (±18,6) × 105 e 2,08 (±3,65) × 106UFC/g para as amostras QMF inspecionadas e não‑inspecionadas, respectivamente, sem diferença significativa (p=0,1). Pseudomonas spp. representaram 0,06% e 0,004% de bactérias psicrotróficas encontradas em amostras QMF inspecionadas e não‑inspecionadas, respectivamente. Das amostras inspecionadas e não inspecionadas, foram isoladas 694 colônias psicrotróficas e 47 Pseudomonas spp., dos quais 59,9% e 68,1% foram simultaneamente proteolíticos e lipolíticos, respectivamente. Dos 470 isolados de psicrotróficos das amostras de queijo inspecionados e dos 224 isolados das não inspecionadas, 5,74% e 2,23% continham o gene aprX, respectivamente, enquanto 100 e 86,96% das Pseudomonas spp. isoladas em amostras de queijo inspecionadas e não inspecionadas continham o potencial de expressão de AprX. Esse potencial, no entanto, não determinou a atividade proteolítica em placas desses isolados nas condições avaliadas neste estudo. Do total, 65,63% dos psicrotróficos que continham o gene aprX foram confirmados como Pseudomonas spp., utilizando PCR gênero-específico. A análise filogenética do gene 16S rRNA dos outros psicrotróficos que foram produtores potenciais de AprX os identificou como Serratia spp. (n=7), Raoultella ornithinolytica (n=1) e Acinetobacter schindleri (n=1) nas amostras inspecionadas e Psychrobacter sanguinis (n=1) e Leuconostoc mesenteroides (n=1) nas amostras não inspecionadas. As condições de produção do QMF dessas amostras, atendendo às determinações legais, não são suficientes para controlar a Pseudomonas e outros psicrotróficos relacionados à deterioração. Assim, medidas higiênicas mais rígidas são necessárias durante a produção formal deste tipo de queijo.


#2 - Mammary gland health of Santa Inês ewes at the drying and puerperium and evaluation of a dry-off terapy with gentamicin

Abstract in English:

Mastitis represents an important health problem for Santa Inês breed, causing losses to the producer, due to loss of ewes or the decrease in weight gain of lambs. The aim of this work was to assess the health of the mammary gland of Santa Inês ewes at the drying and puerperium and to investigate the efficacy of a dry-off therapy with gentamicin. In this study, 64 ewes were divided in a control group (GC) and treatment group (GT), and the health of the mammary gland was assessed at the drying and puerperium. The GT ewes received 250mg of gentamicin (Gentocin® DryCow/Schering-Plough, product indicated for use in dairy cows) in each mammary half. For diagnosis, clinical examination, California Mastitis Test, somatic cell count and milk culture was performed. In the GC, of the 45 (70.3%) healthy mammary halves at the drying, 12 developed subclinical mastitis and nine clinical mastitis at the puerperium. In the GT, among 51 (79.7%) healthy mammary halves at the drying, six developed subclinical mastitis and 11 clinical mastitis at the puerperium. No association was observed between treatment and the occurrence of mastitis at puerperium. Of the 19 (29.7%) mammary halves of the GC that presented subclinical mastitis at the drying, three remained with subclinical mastitis and five developed clinical mastitis at the puerperium. In the GT, of the 13 (20.3%) mammary halves that had subclinical mastitis at the drying, four remained with subclinical mastitis and four developed clinical mastitis. No association was observed between treatment and cure or persistence of mastitis at the puerperium. The main microorganisms isolated, at the drying and puerperium, from animals with subclinical or clinical mastitis were Staphylococcus spp., predominantly coagulase negative Staphylococcus (CSN). At the puerperium, 29 cases of clinical mastitis occurred, 19 with isolation, where 10 were CNS and six S. aureus. Mannheimia haemolytica was isolated in one case of subclinical mastitis and other of clinical mastitis. News protocols and different ways of handling at drying and at puerperium must be investigated.

Abstract in Portuguese:

A mastite é um problema sanitário importante em ovelhas da raça Santa Inês, ocasionando prejuízo ao produtor em virtude do descarte de matrizes e da queda no ganho de peso dos cordeiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a saúde da glândula mamária de ovelhas da raça Santa Inês na secagem e no puerpério e pesquisar a eficácia da terapia intramamária com gentamicina na secagem. Sessenta e quatro ovelhas foram divididas em grupos controle (GC) e tratamento (GT), cada um contendo 32 animais, e a saúde da glândula mamária avaliada na secagem e no puerpério. As ovelhas do GT receberam 250mg de gentamicina (Gentocin® Mastite Vaca Seca/ Schering-Plough Veterinária, produto indicado pela empresa para utilização em vacas de leite) em cada metade mamária. Para o diagnóstico, foram realizados exame físico da glândula mamária, California Mastitis Test, contagem de células somáticas e cultura do leite. No GC, das 45 (70,3%) metades mamárias sadias na secagem, 12 desenvolveram mastite subclínica e nove mastite clínica no puerpério. No GT, das 51 (79,7%) metades mamárias sadias na secagem, seis desenvolveram mastite subclínica e 11 mastite clínica no puerpério. Não houve associação entre o tratamento e a ocorrência de mastite no puerpério. Das 19 (29,7%) metades mamárias do GC que apresentaram mastite subclínica na secagem, três permaneceram com mastite subclínica e cinco desenvolveram mastite clínica no puerpério. No GT, das 13 (20,3%) metades mamárias com mastite subclínica na secagem, quatro permaneceram com mastite subclínica e quatro desenvolveram mastite clínica. Não houve associação entre o tratamento e a cura ou persistência da mastite no puerpério. Os principais micro-organismos isolados, na secagem e puerpério, de animais com mastite subclínica ou clínica foram Staphylococcus spp., com predominância de Staphylococcus Coagulase Negativa (SCN). No puerpério, ocorreram 29 casos de mastite clínica, sendo 19 com isolamento, 10 com SCN e seis com S. aureus. Mannheimia haemolytica foi isolado em um caso de mastite subclínica e um caso de mastite clínica. Novos protocolos e diferentes formas de manejo na secagem e no puerpério devem ser pesquisados


#3 - Outbreak of neonatal diarrhea caused by multiple genotypes of rotavirus A in a beef calves herd, 38(10):1890-1895

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rondelli A.L.H., Rondelli L.A.S., Monteiro B.R.G., Lorenzetti E., Tineli T.R., Dutra V., Alfieri A.A & Pescador C.A. 2018. Outbreak of neonatal diarrhea caused by multiple genotypes of rotavirus A in a beef calves herd. [Surto de diarreia neonatal por múltiplos genótipos de rotavírus A em um rebanho de bovinos de corte.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(10):1890-1895. Laboratório de Patologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2367, Cuiabá, MT 78060‑900, Brazil. E-mail: carolpescador@yahoo.com.br Calf diarrhea causes substantial economic losses to beef cattle production worldwide. It is a complex multifactorial pathological condition influenced by infectious, nutritional and environmental factors. The present study focused on analyzing the pathological and molecular characterization of bovine rotavirus A (BoRVA) during a diarrhea outbreak in a beef cattle herd located in the state of Mato Grosso, central-western region, Brazil. The outbreak caused high morbidity (80%) and mortality (12%) among 1,100 calves up to 30 days of age. The BoRVA was identified in 53.3% (16/30) of the diarrheic fecal samples analyzed using the silver-stained polyacrylamide gel electrophoresis (ss-PAGE) technique. The nucleotide sequence analysis of VP7 (G genotype) and VP4 (P genotype) via RT-PCR from eight BoRVA-positive fecal samples showed the genotypes G6P[5] (n = 6), G6P[11] (n = 1) and G6P[X] (n = 1). Three calves were necropsied and the gross findings included edema and thickened, wrinkled bowel mucosa in the small intestine. Microscopic lesions were confined to the villi of the small intestine, characterized mainly by villus fusion and moderate multifocal lymphoplasmacytic enteritis. Immunohistochemical examination of three cases was positive for BoRVA. The 53.3% of the diarrheic fecal samples that were positive for BoRVA in this study suggested that RV was the etiological agent involved in this neonatal calf diarrhea outbreak.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rondelli A.L.H., Rondelli L.A.S., Monteiro B.R.G., Lorenzetti E., Tineli T.R., Dutra V., Alfieri A.A & Pescador C.A. 2018. Outbreak of neonatal diarrhea caused by multiple genotypes of rotavirus A in a beef calves herd. [Surto de diarreia neonatal por múltiplos genótipos de rotavírus A em um rebanho de bovinos de corte.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(10):1890-1895. Laboratório de Patologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2367, Cuiabá, MT 78060‑900, Brazil. E-mail: carolpescador@yahoo.com.br A diarreia neonatal provoca perdas econômicas substanciais na produção de bovinos em todo o mundo. É uma condição patológica multifatorial complexa influenciada por fatores infecciosos, nutricionais e ambientais. O presente estudo teve por objetivo caracterizar o rotavírus tipo A (BoRVA) através da análise patológica e molecular durante um surto de diarreia em um rebanho bovino localizado no estado de Mato Grosso, região centro-oeste, no Brasil. O surto causou alta morbidade (80%) e letalidade (12%) em um rebanho composto 1.100 bezerros até 30 dias de idade. O BoRVA foi identificado em 53,3% (16/30) das amostras fecais diarreicas analisadas usando a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida corada com prata (ss-PAGE). A análise da sequência nucleotídica de VP7 (genótipo G) e VP4 (genótipo P) via RT-PCR a partir de oito amostras fecais BoRVA-positivas mostrou os genótipos G6P [5] (n = 6), G6P [11] (n = 1) e G6P [X] (n = 1). Três bezerros foram submetidos à necropsia e os achados macroscópicos incluíram edema e espessamento da mucosa do intestino delgado. As lesões microscópicas foram observadas nas vilosidades do intestino delgado, sendo caracterizadas principalmente por fusiosamento de vilosidades e enterite linfoplasmocitária multifocal moderada. O exame imunohistoquímico dos três casos foram positivos para o BoRVA. As 53,3% das amostras fecais diarreicas positivas para o BoRVA sugeriram que o rotavírus é o agente etiológico envolvido neste surto de diarreia neonatal em bezerros.


#4 - Antibodies against canine distemper virus, parvovirus and Ehrlichia spp. in wild captive carnivores in midwestern Brazil, 38(8):1681-1684

Abstract in English:

ABSTRACT.- Taques I.I.G.G., Morgado T.O., Braga I.A., Paz R.C.R., Corrêa S.H.R., Fritzen J.T.T., Alfieri A.A. & Aguiar D.M. 2018. Antibodies against canine distemper virus, parvovirus and Ehrlichia spp. in wild captive carnivores in midwestern Brazil. [Anticorpos contra o vírus da cinomose canina, parvovírus e Ehrlichia spp. em carnívoros selvagens cativos no centro-oeste do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1681-1684. Laboratório de Virologia e Rickettsioses, Hospital Veterinário, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Correa da Costa 2637, Boa Esperança, Cuiabá, Mato Grosso, MT 78090-900, Brazil. E-mail: danmoura@ufmt.br The occurrence of antibodies against canine distemper virus (CDV), parvovirus and Ehrlichia spp. in wild captive carnivores was evaluated in a zoological park in midwestern Brazil. Serum samples were collected between 2007 and 2014 from 45 carnivores. Antibodies were evaluated by virus neutralization assay for CDV, hemagglutination inhibition test for parvovirus, indirect immunofluorescent and Enzyme-linked immunosorbent assay for Ehrlichia spp. Antibodies against CDV and parvovirus were detected in 75% of Canidae and Felidae. Procyonidae were negative for CDV, although one Mustelidae was positive. Two Canidae presented antibodies reactive to E. canis antigens. The high antibodies rates to CDV and parvovirus suggest the contact with both pathogens, however since no clinical history of disease are registered in the Zoo-UFMT, we can presume that carnivores have responded satisfactorily against the antigens. The low serological rates observed against Ehrlichia spp. may be resulted to the low occurrence of ticks among carnivores.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Taques I.I.G.G., Morgado T.O., Braga I.A., Paz R.C.R., Corrêa S.H.R., Fritzen J.T.T., Alfieri A.A. & Aguiar D.M. 2018. Antibodies against canine distemper virus, parvovirus and Ehrlichia spp. in wild captive carnivores in midwestern Brazil. [Anticorpos contra o vírus da cinomose canina, parvovírus e Ehrlichia spp. em carnívoros selvagens cativos no centro-oeste do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1681-1684. Laboratório de Virologia e Rickettsioses, Hospital Veterinário, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Correa da Costa 2637, Boa Esperança, Cuiabá, Mato Grosso, MT 78090-900, Brazil. E-mail: danmoura@ufmt.br A ocorrência de anticorpos contra o vírus da cinomose canina (CDV), parvovírus e Ehrlichia spp. em carnívoros selvagens em cativeiro foi avaliada em um parque zoológico do centro oeste do Brasil. As amostras de soro foram coletadas entre 2007 e 2014 de 45 carnívoros. Os anticorpos foram avaliados por ensaio de neutralização de vírus para CDV, teste de inibição de hemaglutinação para parvovírus, imunofluorescência indireta e ensaio imunoenzimático ligado à enzima para Ehrlichia spp. Anticorpos contra CDV e parvovírus foram detectados em 75% de canídeos e felídeos. Procionídeos foram negativos para CDV, embora um mustelídeo fora positivo. Dois canídeos apresentaram anticorpos reativos aos antígenos de E. canis. As altas taxas de anticorpos para CDV e parvovírus sugerem o contato com ambos os patógenos, entretanto desde que nenhuma história clínica de doença está registrada no Zoo‑UFMT, podemos presumir que os carnívoros têm respondido satisfatoriamente contra os antígenos. As baixas taxas serológicas observadas contra Ehrlichia spp. pode ser resultado da baixa ocorrência de carrapatos entre os carnívoros.


#5 - Differential diagnosis of neurologic diseases of cattle in the state of Paraná, 38(7):1264-1277

Abstract in English:

ABSTRACT.- Queiroz G.R., Oliveira R.A.M., Flaiban K.K.M.C., Di Santis G.W., Bracarense A.P.F.R.L., Headley S.A., Alfieri A.A. & Lisbôa J.A.N. 2018. [Differential diagnosis of neurologic diseases of cattle in the state of Paraná.] Diagnóstico diferencial das doenças neurológicas dos bovinos no estado do Paraná. Pesquisa Veterinária Brasileira 38(7):1264-1277. Departamento de Clínicas Veterinárias, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Estadual de Londrina, Campus Universitário, Cx. Postal 6001, Londrina, PR 86051-990, Brazil. E-mail: janlisboa@uel.br The aim of this study was to identify the neurological diseases that affected cattle in Paraná state between the years 2009 and 2015. The investigation took place, preferably, in the farms where cases occurred. Information on the evolution of the diseases in the affected cattle of the herd was recorded, and the probable risk factors were identified. All general and neurological examination procedures were performed systematically for the characterization of the neurological syndrome in each case. Samples of blood and CSF for laboratory exams were also collected. According to the evolution features and the severity of the observed clinical signs, the diseased cattle were kept alive to follow the progress of the disease, or were submitted to euthanasia followed by necropsy. Fragments of tissues from nervous system and other organs were collected for histopathological examination. Direct immunofluorescence test and biological test were performed on all the cattle that died, in order to confirm or rule out the diagnosis of rabies. Specific virology, bacteriology and toxicology laboratory methods were used as complementary exams in order to establish differential diagnosis. A total of 236 cattle with neurological disease were investigated, 85 cases of individual occurrence and 151 cases distributed by outbreaks that occurred in 79 herds. Encephalopathies (180/236, 76.2%) predominated over mielopathies (27/236, 11.4%). Inflammatory diseases caused by infections (98/236, 41.5%) and the toxic diseases (91/236, 38.6%) were the main causes, while degenerative (10/236, 4.2%), metabolic (9/236; 3.8%), physical (9/236, 3.8%), neoplastic (4/236, 1.7%), and congenital defects (1/236, 0.4%) occurred less often. The inconclusive cases were 5.9% (14/236). BoHV-5 meningoencephalitis and rabies were diseases of higher frequency and may be considered the most important. Among the toxic causes, plant poisonings were highlighted (63/91, 69.2%) and were responsible for 26.6% of all cases. Polioencephalomalacia, thrombotic meningoencephalitis caused by Histophilus somni and botulism were also highlighted. This information helps veterinarians to adopt more effective diagnostic and preventive approaches and is valuable to the state’s official epidemiological surveillance system.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Queiroz G.R., Oliveira R.A.M., Flaiban K.K.M.C., Di Santis G.W., Bracarense A.P.F.R.L., Headley S.A., Alfieri A.A. & Lisbôa J.A.N. 2018. [Differential diagnosis of neurologic diseases of cattle in the state of Paraná.] Diagnóstico diferencial das doenças neurológicas dos bovinos no estado do Paraná. Pesquisa Veterinária Brasileira 38(7):1264-1277. Departamento de Clínicas Veterinárias, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Estadual de Londrina, Campus Universitário, Cx. Postal 6001, Londrina, PR 86051-990, Brazil. E-mail: janlisboa@uel.br O objetivo deste trabalho foi identificar as doenças neurológicas que acometeram bovinos no estado do Paraná entre os anos de 2009 e 2015. A investigação aconteceu, preferencialmente, nas propriedades rurais onde os casos ocorreram. Foram registradas as informações sobre a evolução das doenças nos bovinos afetados do rebanho, e os prováveis fatores de risco foram identificados. Todos os procedimentos de exame físico geral e neurológico foram realizados sistematicamente para a caracterização da síndrome neurológica presente. Amostras de sangue e de líquor foram colhidas para a realização de exames laboratoriais. De acordo com o tempo de evolução e com a gravidade dos sinais clínicos observados, os bovinos doentes eram mantidos vivos para acompanhamento da evolução ou da resposta ao tratamento, ou eram submetidos à eutanásia seguida de necropsia. Fragmentos do sistema nervoso e dos demais órgãos foram colhidos para exame histopatológico. O exame de imunofluorescência direta e a prova biológica em camundongos foram realizados em todos os bovinos que morreram, com a finalidade de confirmar ou descartar o diagnóstico de raiva. Métodos laboratoriais específicos das rotinas de virologia, bacteriologia e toxicologia foram empregados, como complementares, para o estabelecimento do diagnóstico diferencial. Foram investigados 236 bovinos com doença neurológica, sendo 85 casos de ocorrência individual e 151 casos distribuídos por surtos que ocorreram em 79 rebanhos. As encefalopatias (180/236; 76,2%) predominaram sobre as mielopatias (27/236; 11,4%). As doenças inflamatórias determinadas por infecções (98/236; 41,5%) e as doenças tóxicas (91/236; 38,6%) foram as principais, enquanto as causas degenerativas (10/236; 4,2%), metabólicas (9/236; 3,8%), físicas (9/236; 3,8%), neoplásicas (4/236; 1,7%), e os defeitos congênitos (1/236; 0,4%) ocorreram menos frequentemente. Os casos inconclusivos somaram 5,9% (14/236). A meningoencefalite por BoHV-5 e a raiva foram as doenças de frequência maior e podem ser consideradas as mais importantes. Dentre as causas tóxicas, as intoxicações por plantas se destacaram (63/91; 69,2%) e foram responsáveis por 26,6% de todos os casos. Destacaram-se ainda a polioencefalomalácia, a meningoencefalite trombótica por Histophilus somni e o botulismo. Essas informações contribuem para que os médicos veterinários adotem condutas mais efetivas de diagnóstico e de prevenção, e são valiosas para o sistema oficial de vigilância epidemiológica do estado.


#6 - Molecular survey of porcine teschovirus, porcine sapelovirus, and enterovirus G in captive wild boars (Sus scrofa scrofa) of Paraná state, Brazil, 35(5):403-408

Abstract in English:

ABSTRACT.- Donin D.G., Leme R.A., Alfieri A.F., Alberton G.C. & Alfieri A.A. 2015. Molecular survey of porcine teschovirus, porcine sapelovirus, and enterovirus G in captive wild boars (Sus scrofa scrofa) of Paraná state, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):403-408. Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Porcine teschovirus (PTV), porcine sapelovirus (PSV), and enterovirus G (EV-G) are infectious agents specific to pig host species that are endemically spread worldwide. This study aimed to investigate the natural infection by these porcine enteric picornaviruses in wild boars (Sus scrofa scrofa) of Paraná state, Brazil, and to evaluate peccaries (Pecari tajacu and Tayassu pecari) as alternative host species for these viruses. Fecal samples (n=36) from asymptomatic wild boars (n=22) with ages ranging from 2 to 7 months old (young, n=14) and 2 to 4 years old (adult, n=8) and from peccaries (6 to 8 months old, n=14) were collected from a farm and a zoo, respectively, both located in Paraná state. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and nested-PCR (n-PCR) assays targeting the 5’non-translated region of the virus genome were used for screening the viruses. Porcine enteric picornaviruses were detected in 12 out of the 22 wild boar fecal samples. According to each of the viruses, EV-G was most frequently (11/22, 50%) detected, followed by PTV (10/22, 45.5%) and PSV (4/22, 18.2%). Regarding the age groups, young wild boars were more frequently (9/14, 64.3%) infected with PTV, PSV, and EV-G than adult animals (3/8, 37.4%). One n-PCR amplified product for each of the viruses was submitted to sequencing analysis and the nucleotide sequences were compared with the related viruses, which showed similarities varying from 97.7% to 100% for PTV, 92.4% to 96.2% for PSV, and 87.1% to 100% for EV-G. Peccaries tested negative for the viruses and in this study they did not represent infection reservoirs. This study is the first to report the molecular detection of PTV, PSV, and EV-G from captive wild boars in a South American country and the first to screen peccaries as alternative host species for porcine enteric picornavirus.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Donin D.G., Leme R.A., Alfieri A.F., Alberton G.C. & Alfieri A.A. 2015. Molecular survey of porcine teschovirus, porcine sapelovirus, and enterovirus G in captive wild boars (Sus scrofa scrofa) of Paraná state, Brazil. [Estudo molecular de teschovírus suíno, sapelovírus suíno e enterovírus G em javalis (Sus scrofa scrofa) de cativeiro no Paraná.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):403-408. Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Teschovírus suíno (PTV), sapelovírus suíno (PSV) e enterovírus G (EV-G) são agentes infecciosos específicos da espécie suína que estão endemicamente disseminados em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi investigar a infecção natural por estes picornavírus entéricos suínos em javalis (Sus scrofa scrofa) do estado do Paraná, Brasil e avaliar pecaris (Pecari tajacu e Tayassu pecari) como hospedeiros alternativos para estes vírus. Amostras fecais (n=36) de javalis assintomáticos (n=22) com idades de 2 a 7 meses (jovens, n=14) e 2 a 4 anos (adultos, n=8) e de pecaris (6 a 8 meses de idade, n=14) foram coletadas em um cativeiro e zoológico, respectivamente, ambos localizados no estado do Paraná. A transcrição reversa seguida por reações da polimerase em cadeia (RT-PCR) e nested-PCR com alvo na região 5’-não traduzida do genoma viral foram utilizadas para a identificação dos vírus. Picornavírus entéricos suínos foram detectados em 12 das 22 amostras fecais de javalis. De acordo com cada um dos vírus, EV-G foi mais frequentemente (11/22, 50%) detectado, seguido pelo PTV (10/22; 45,5%) e PSV (4/22; 18,2%). Considerando os grupos de idade, javalis jovens foram mais frequentemente (9/14; 64,3%) infectados com PTV, PSV e EV-G do que os javalis adultos (3/8; 37,4%). Um produto amplificado na nested-PCR para cada um dos vírus foi submetido à análise de sequenciamento e as sequências de nucleotídeos foram comparadas com vírus relacionados, o que mostrou que as similaridades variaram entre 97,7% a 100% para o PTV, 92,4% a 96,2% para o PSV e 87,1% a 100% para o EV-G. Os pecaris foram negativos para as viroses investigadas e neste estudo não se apresentaram como hospedeiros alternativos para as infecções. Este estudo é o primeiro a relatar a detecção molecular de PTV, PSV e EV-G em javalis de cativeiro de um país da América Latina e o primeiro a avaliar pecaris como espécie hospedeira alternativa para picornavírus entéricos suínos.


#7 - Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids, 35(5):431-436

Abstract in English:

ABSTRACT.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Headley S.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M. & Alfieri A.F. 2015. Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):431-436. Laboratory of Animal Virology, Department of Veterinary Preventive Medicine, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Sarcoids are fibroblastic lesions, which are considered as the most common skin tumors of horses; spontaneous regression rarely occurs. The bovine papillomavirus (BPV) types 1 and 2 may be involved in the pathogenesis of sarcoids, and probably the recently described BPV type (BPV13) might be associated with the pathogenesis of this lesion. This study characterized the DNA of BPVs in sarcoids from 15 horses from Brazil by analyzing 20 cutaneous lesions (12 recently collected; 8 from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues). Histopathology confirmed the proliferative lesions as sarcoids. Three PCRs were performed to amplify papillomavirus (PV) DNA. For screening, the primers IFNR2/IDNT2 were used to amplify a fragment of the PV L1 ORF. The second primer set was complementary to a common sequence of the E5L2 genomic region of BPV1, 2, and 13. The third primer pair (FAP59/FAP64) targeted a fragment of the PVs L1 ORF. The screening and E5L2 PCRs yielded amplicons in all samples evaluated. The FAP amplicons identified BPV1, 2, and 13 only from fresh tissue samples. The phylogenetic analyses of E5L2 resulted in the identification of BPV1, 2, and 13 in 14 (70%), 2 (10%), and 4 (20%) sarcoids, respectively. Two horses demonstrated multiple lesions: the sarcoids of one of these contained only BPV1 DNA and those of the other contained three types of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13). This study confirmed the presence of BPV1, 2, and 13 DNA in equine sarcoids. Moreover, these findings represent the first description of three types of BPV diagnosed in the same horse, as well as the first confirmation of BPV1 and 2 in horses from Brazil.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Headley S.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M. & Alfieri A.F. 2015. Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids. [Caracterização molecular de DNA de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em sarcoides equinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):431-436. Laboratory of Animal Virology, Department of Veterinary Preventive Medicine, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Sarcoides são tumores fibroblásticos, considerados os tumores de pele mais comuns em pele de equinos e que raramente apresentam regressão espontânea. Papilomavírus bovino (BPV) tipos 1 e 2 são relacionados com a patogenia do sarcoide e, provavelmente, o BPV tipo 13 (BPV13), recentemente descrito, também pode estar associado com a formação dessa lesão. Neste estudo, 20 amostras de lesões cutâneas, sendo 12 constituídas por tecidos frescos e 8 amostras de tecido fixado em formalina e embebido em parafina, provenientes de 15 cavalos foram utilizadas para a identificação do DNA de BPV. A análise histopatológica (HE) confirmou todas as lesões como sarcoide. Para a amplificação do DNA de papilomavírus (PV) foram realizadas três reações de PCR. Como triagem, os primers IFNR2/IDNT2 foram utilizados para amplificar um fragmento da ORF L1 do PV. O segundo par de primers utilizado é complementar a sequência dos genes E5 e L2 de BPVs 1, 2 e 13. O terceiro par de primers (FAP59/FAP64) utilizado tem o gene L1 como alvo. A primeira e a segunda PCRs permitiram amplificar produtos em todas as amostras avaliadas. Entretanto, na terceira reação, na qual foram utilizados os primers FAP, foi possível amplificar produtos com tamanho molecular esperado somente nas amostras constituídas por tecidos frescos. O sequenciamento de nucleotídeos e as análises filogenéticas realizadas nos fragmentos E5L2 resultaram na identificação de BPV1, 2 e 13 em 14 (70%), 2 (10%) e em 4 (20%) amostras de sarcoides, respectivamente. As amostras de sarcoides de um dos animais continha somente o DNA de BPV1. Entretanto, nas amostras provenientes do segundo cavalo foi possível identificar o DNA de três tipos de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em lesões distintas. Este estudo ratifica a presença do DNA de BPV1, 2 e 13 em lesões de sarcoides em equinos, além de identificar três tipos de BPVs em um mesmo animal e descrever pela primeira vez no Brasil a presença de BPV1 e 2 nesse tipo de lesão.


#8 - Histophilus somni-induced thrombotic meningoencephalitis in cattle from northern Paraná, Brazil, 35(4):329-336

Abstract in English:

ABSTRACT.- Headley S.A., Bracarense A.P.F.R.L., Oliveira V.H.S., Queiroz G.R., Okano W., Alfieri A.F., Flaiban K.K.M.C., Lisbôa J.A.N. & Alfieri A.A. 2015. Histophilus somni-induced thrombotic meningoencephalitis in cattle from northern Paraná, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):329-336. Laboratório de Patologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, PR-445 Km 380, Cx. Postal 10.011, Londrina, PR 860571-970, Brazil. E-mail: selwyn.headley@uel.br Thrombotic meningoencephalitis (TME) is a fatal neurological disease of cattle, predominantly from North America, that is caused by Histophilus somni with sporadic descriptions from other countries. This manuscript describes the occurrence of spontaneous TME in cattle from northern Paraná, Brazil. Most cattle had acute neurological manifestations characteristic of brain dysfunction. Hematological and cerebrospinal fluid analyses were not suggestive of bacterial infections of the brain. Histopathology revealed meningoencephalitis with vasculitis and thrombosis of small vessels that contained discrete neutrophilic and/or lymphocytic infiltrates admixed with fibrin at the brainstem, cerebral cortex, and trigeminal nerve ganglion of all animals. All tissues from the central nervous system used during this study were previously characterized as negative for rabies virus by the direct immunofluorescence assay. PCR and RT-PCR assays investigated the participation of infectious agents associated with bovine neurological disease by targeting specific genes of H. somni, Listeria monocytogenes, bovine herpesvirus -1 and -5, bovine viral diarrhea virus, and ovine herpesvirus-2. PCR and subsequent sequencing resulted in partial fragments of the 16S rRNA gene of H. somni from brain sections of all animals with histopathological diagnosis of TME; all other PCR/RT-PCR assays were negative. These findings confirmed the participation of H. somni in the neuropathological disease observed in these animals, extend the geographical distribution of this disease, and support previous findings of H. somni from Brazil.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Headley S.A., Bracarense A.P.F.R.L., Oliveira V.H.S., Queiroz G.R., Okano W., Alfieri A.F., Flaiban K.K.M.C., Lisbôa J.A.N. & Alfieri A.A. 2015. Histophilus somni-induced thrombotic meningoencephalitis in cattle from northern Paraná, Brazil. [Meningoencefalite trombótica-induzida por Histophilus somni em bovinos da região norte do Paraná.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):329-336. Laboratório de Patologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, PR-445 Km 380, Cx. Postal 10.011, Londrina, PR 860571-970, Brazil. E-mail: selwyn.headley@uel.br Meningoencefalite trombótica (Thrombotic meningoencephalitis- TME) é uma doença neurológica fatal de bovinos ocasionada por Histophilus somni. A infecção tem sido descrita predominantemente na América do Norte e de forma esporádica em outros países. O objetivo deste estudo é relatar a ocorrência de TME em bovinos da região norte do estado do Paraná, Brasil. A maioria dos animais apresentaram sinais clínicos neurológicos característicos de disfunção cerebral aguda. Análises hematológicas e do fluido cerebrospinal não foram sugestivas de infecção bacteriana do cérebro. A histopatologia revelou meningoencefalite com vasculite e trombose de pequenos vasos com discreto infiltrado neutrofílico e/ou linfocítico mesclada com fibrina no tronco e córtex cerebral e no gânglio do nervo trigêmio de todos os animais. As amostras de sistema nervoso central incluídas nesse estudo foram previamente caracterizadas como negativas para raiva por meio de técnica de imunofluorescência direta. A participação de agentes infecciosos associados à doença neurológica em bovinos foi avaliada por técnicas moleculares como PCR e RT-PCR para amplificação parcial de genes de H. somni, Listeria monocytogenes, herpesvírus bovino 1 e 5, vírus da diarreia viral bovina e herpesvírus ovino 2. As seções do cérebro de todos os animais com diagnóstico histopatológico de TME foram positivas em PCR para a detecção do gene 16S rRNA de H. somni. O sequenciamento dos produtos amplificados confirmou a presença de DNA de H. somni nos fragmentos de cérebro avaliados. As reações de PCR/RT-PCR para todos os outros micro-organismos avaliados resultaram negativas. Os resultados desse estudo confirmaram a participação do H. somni nos episódios de doença neurológica observada nos animais avaliados, amplia a distribuição geográfica da TME e ratifica estudos prévios realizados no Brasil que demonstraram a presença de H. somni em outras formas de manifestação clínica das infecções por essa bactéria.


#9 - Histopathological, immunohistochemi- cal, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves, 35(4):337-343

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cagnini D.Q., Cunha P.H.J., Pantoja J.C.F., Badial P.R., Oliveira-Filho J.P., Araújo-Junior J.P., Alfeiri A.A. & Borges A.S. 2015. Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):337-343. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Unesp-Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: asborges@fmvz.unesp.br Bovine meningoencephalitis caused by BHV-5, a double-stranded DNA enveloped virus that belongs to the family Herpesviridae and subfamily Alphaherpesvirinae, is an important differential diagnosis of central nervous diseases. The aim of this study was to describe the histological changes in the central nervous system of calves experimentally infected with BHV-5 and compare these changes with the PCR and IHC results. Formalin-fixed paraffin-embedded central nervous system samples from calves previously inoculated with BHV-5 were microscopically evaluated and tested using IHC and PCR. All the animals presented with nonsuppurative meningoencephalitis. From 18 evaluated areas of each calf, 32.41% and 35.19% were positive by IHC and PCR, respectively. The telencephalon presented more accentuated lesions and positive areas in the PCR than other encephalic areas and was the best sampling area for diagnostic purposes. Positive areas in the IHC and PCR were more injured than IHC and PCR negative areas. The animal with neurological signs showed more PCR- and IHC-positive areas than the other animals.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cagnini D.Q., Cunha P.H.J., Pantoja J.C.F., Badial P.R., Oliveira-Filho J.P., Araújo-Junior J.P., Alfieri A.A. & Borges A.S. 2015. Histopathological, immunohistochemical, and molecular study of BHV-5 infection in the central nervous system of experimentally infected calves. [Estudo histopatológico, imuno-histoquímico e molecular da infecção por BHV-5 no sistema nervoso central de bovinos experimentalmente infectados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):337-343. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Unesp-Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: asborges@fmvz.unesp.br A meningoencefalite bovina causada pelo BHV-5, um vírus DNA fita dupla envelopado que pertence à família Herpesviridae e subfamília Alphaherpesvirinae, é um importante diagnóstico diferencial das doenças do sistema nervoso central. O objetivo deste estudo foi descrever as alterações histológicas no sistema nervoso central de bovinos experimentalmente infectados com BHV-5 e comparar estas alterações com os resultados de imunoistoquímica (IHQ) e PCR. Amostras do sistema nervoso central de bezerros previamente inoculados com BHV-5 foram microscopicamente avaliadas e submetidas à IHQ e PCR. Todos os animais apresentaram meningoencefalite não-supurativa. Das 18 áreas avaliadas de cada bezerro, 32,41% e 35,13% foram positivas na IHQ e PCR, respectivamente. O telencéfalo apresentou lesões mais acentuadas e foi mais positivo na PCR do que as demais áreas encefálicas e se apresentou como a melhor área para coleta de material para o diagnóstico. As áreas positivas na IHQ e na PCR apresentaram lesões mais acentuadas do que as áreas negativas para as mesmas técnicas. O animal com sinais neurológicos apresentou mais áreas positivas para PCR e IHQ do que os demais animais.


#10 - Identification of canine papillomavirus type 1 (CPV1) DNA in dogs with cutaneous papillomatosis, 34(12):1223-1226

Abstract in English:

ABSTRACT.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M., Headley S.A. & Alfieri A.F. 2014. Identification of canine papillomavirus type 1 (CPV1) DNA in dogs with cutaneous papillomatosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(12):1223-1226. Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina. PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Canine oral papillomavirus (COPV), also known as Canine Papillomavirus type 1 (CPV1), induces papillomas at the mucous membranes of the oral cavity and at the haired skin of dogs. The classification of Papillomavirus (PV) types is based on the L1 capsid protein and nucleotide sequence; so far, 14 CPV types have been described in several countries, but the molecular characterization of CPV in Brazil is lacking. This study investigated the presence of the PV in seven papillomas from four mixed breed dogs from Londrina/PR, Southern Brazil, by partial sequencing of the L1 gene. Seven exophytic cutaneous lesions were surgically removed and processed for histopathological and molecular characterization. Histopathology confirmed the lesions as viral papillomas due to typical histological features. Polymerase Chain Reaction (PCR) assay using the FAP59 and FAP64 primers targeted the L1 gene followed by sequence analysis of the amplicons identified CPV1 in all evaluated papilloma samples. This study represents the first description of CPV1 DNA associated with canine papillomatosis in Brazil.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M., Headley S.A. & Alfieri A.F. 2014. Identification of canine papillomavirus type 1 (CPV1) DNA in dogs with cutaneous papillomatosis. [Identificação do DNA de Papillomavirus canino tipo 1 em cães com papilomas cutâneos no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(12):1223-1226. Laboratório de Virologia Animal, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina. PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br O papilomavírus oral canino (COPV), também denominado Papillomavirus canino tipo 1 (CPV1), tem a capacidade de induzir papilomas na mucosa da cavidade oral e também em pele de cães. A classificação dos tipos de papilomavírus (PV) é baseada na proteína L1 do capsídeo e na sequência de nucleotídeos que a codifica. Atualmente são descritos 14 tipos de CPV, no entanto, ainda faltam estudos moleculares relacionados à identificação dos tipos de CPV no Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a presença de PV em fragmentos de papilomas obtidos de quatro cães sem raça definida, provenientes de Londrina/PR, região sul do Brasil, e definir o tipo viral por meio da análise da sequência parcial de nucleotídeos do gene L1. Sete lesões cutâneas foram cirurgicamente removidas e processadas ​​para a caracterização histopatológica e molecular. O exame histopatológico confirmou as lesões como papilomas. Foi realizada reação em cadeia de polimerase (PCR), utilizando os primers FAP59 FAP64 para a amplificação parcial do gene L1, seguida por análise das sequências dos produtos amplificados, que confirmou a presença do CPV1 em todas as amostras avaliadas. Este estudo representa a primeira identificação do DNA de CPV1 associado com papilomatose canina no Brasil.


Colégio Brasileiro de Patologia Animal SciELO Brasil CAPES CNPQ UNB UFRRJ CFMV