Resultado da pesquisa (70)

Termo utilizado na pesquisa coelhos

#1 - Hemostatic evaluation of rabbits envenomed with Bothrops alternatus treated with anti-bothropic serum, desmopressin and tranexamin acid

Abstract in English:

In Brazil, snakes from the Bothrops genus are responsible for thousands of accidents, and their venoms are mainly composed of proteolytic enzymes. Although the antibothropic serum produced by the Brazilian Institutes is remarkably efficient, more studies are necessary, especially in veterinary medicine. The venom contain enzymes and non-enzymatic proteins that interfere with hemostasis leading to hemorrhage or even thrombosis. Possible treatment associations with known bothropic antivenom were the reason for the development of the present study. The aim of this study was to evaluate hemostasis alterations caused by Bothrops alternatus venom in rabbits followed by treatments with anti-bothropic serum, tranexamic acid and desmopressin. Twenty New Zealand rabbits were distributed into five groups (n=4) that were experimentally envenomed with 150mcg/kg of B. alternatus venom via intramuscular injection and treated as follow: Group 1 (G1) was the positive control and received venom and PBS/BSA; Group 2 (G2) was treated with tranexamic acid; Group 3 (G3) with desmopressin; Group 4 (G4) with tranexamic acid and anti-bothropic serum; and Group 5 (G5) with anti-bothropic serum and desmopressin. Blood samples were collected before venom administration, and one, four, eight and 12 hours after, for Partial activated partial thromboplastin time, Prothrombin Time, Thrombin Time and fibrinogen evaluation. Thrombin generation (TG) test was carried out with a pool of samples from final times (8 and 12h). At the end of 12h, all animals were euthanized and necropsy was conducted. Samples from muscle tissue, heart, lungs and kidney were analyzed. Classic coagulation tests showed no significant differences amongst groups and times. However, TG indicated that the venom causes a hypocoagulability state, which was not reversed by proposed treatments. Histology showed muscle inflammation, hemorrhage and necrosis, as well as hemorrhage in other tissues with no differences amongst groups. B. alternatus envenomation causes hypocoagulability detected by TG assay, but not through classical coagulation tests. The use of tranexamic acid and desmopressin for hemostasis stabilization after inoculation of the venom did not show advantage in coagulation restoration.

Abstract in Portuguese:

No Brasil, as serpentes do gênero Bothrops são responsáveis por milhares de acidentes, e seus venenos são compostos principalmente de enzimas proteolíticas. Embora o soro antiofídico produzido pelos institutos brasileiros seja notavelmente eficiente, mais estudos são necessários, especialmente na medicina veterinária. O veneno contem enzimas e proteínas não-enzimáticas que interferem com a hemostasia levando a hemorragias ou trombose. A associação de outros tratamentos ao soro antibotrópico foi a razão para o desenvolvimento do presente estudo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações da hemostasia causadas pelo veneno de Bothrops alternatus em coelhos, após tratamento com soro antibotrópico, ácido tranexâmico e desmopressina. Vinte coelhos da Nova Zelândia foram distribuídos em cinco grupos (n = 4) que foram submetidos a experimentos com 150mcg/kg de veneno de B. alternatus por injeção intramuscular. O Grupo 1 (G1) foi o controle positivo e recebeu veneno e PBS / BSA, enquanto o Grupo 2 (G2) foi tratado com ácido tranexâmico, o Grupo 3 (G3) com desmopressina, o Grupo 4 (G4) com ácido tranexâmico e soro antibotrópico, e o Grupo 5 (G5) com soro antibotrópico e desmopressina. As amostras de sangue foram coletadas antes da administração do veneno, e uma, quatro, oito e 12 horas após os tratamentos para realização de tempo de tromboplastina parcial ativada parcial (TTPa), tempo de protrombina (TP), tempo de trombina (TT) e mensuração de fibrinogênio. Para o ensaio de geração de trombina (TG) foi realizado com um pool de amostras nos tempos finais (8 e 12h). Ao final das 12h, todos os animais foram sacrificados e a necropsia foi realizada. Amostras de tecido muscular, coração, pulmões e rins foram analisadas. Os testes TTPa, TP, TT e fibrinogênio não mostraram diferenças significativas entre os grupos e os tempos. No entanto, o TG indicou que o veneno causa um estado de hipocoagulabilidade, que não foi revertido pelos tratamentos propostos. Na histologia, foram observadas inflamação muscular, hemorragia e necrose, além de hemorragia em outros tecidos, sem diferenças entre os grupos. O envenenamento por B. alternatus causa hipocoagulabilidade detectada mais precocemente pelo teste de geração de trombina. O uso de ácido tranexâmico e desmopressina para estabilização da hemostasia após a inoculação do veneno não mostrou vantagem na restauração da coagulação.


#2 - Effects of canine adipose-derived mesenchymal stem cells on the epithelialization of rabbits’ skin autograft (Oryctolagus cuniculus)

Abstract in English:

The present study aimed to evaluate the effects of mesenchymal stem cells derived from canine adipose tissue in the healing process of full-thickness mesh skin grafts in rabbits. The stem cells were collected from young dogs; and, after characterization, remained in cryopreservation, in independent doses containing 2 x 106 cells. The mesh distal limb graft technique was performed in 60 rabbits, divided into three groups, CG (Control Group), GT1 (Intralesional Stem Cell Treated Group), and GT2 (Intravenous Stem Cell Treated Group), containing 20 animals each. After grafting, each group was randomly divided into four subgroups according to euthanasia time 3, 7, 14, and 30 days, containing five animals in each group. Animals of GT1_14, GT1_30, and GT2_14, GT2_30 subgroups received a second dose of xenogeneic cells on the seventh day. Meanwhile, animals from GT1_30 and GT2_30 received the third dose of xenogeneic cells on day 14. The groups treated with xenogeneic stem cells positively affected type III collagen re-epithelialization and deposition, and possibly GT1 had a controlled inflammatory response. However, no effect on angiogenesis. Thus, it was possible to demonstrate tolerance and therapeutic action of mesenchymal stem cells from canine adipose tissue in skin grafts in rabbits.

Abstract in Portuguese:

O presente estudo teve como principal objetivo avaliar os efeitos das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo de cães no processo de cicatrização de autoenxertos de pele de espessura total em malha em coelhos. As células-tronco foram coletadas de cães jovens, após a caracterização estas permaneceram em criopreservação, em doses individuais contendo 2 x 106 células. A técnica de enxerto em malha na região distal do membro foi realizada em 60 coelhos, divididos em três grupos, GC (Grupo Controle), GT1 (Grupo tratado com células-tronco intralesional) e GT2 (Grupo tratado com células-tronco via endovenosa), contendo 20 animais cada. Imediatamente após a enxertia, cada grupo foi dividido aleatoriamente em quatro subgrupos, de acordo com o tempo de eutanásia 3, 7, 14 e 30 dias contendo cinco animais cada. Animais dos subgrupos GT1_14, GT1_30 e GT2_14, GT2_30 receberam uma segunda dose de células xenógenas no sétimo dia. Ademais, animais do GT1_30 e do GT2_30 receberam a terceira dose de células xenógenas no dia 14. Os grupos tratados com células-tronco xenógenas tiveram um efeito positivo na reepitelização e deposição de colágeno tipo III, e possivelmente, o GT1 teve uma resposta inflamatória controlada, entretanto o efeito na angiogênese não foi observado. Dessa forma, foi possível demonstrar que houve tolerância e ação terapêutica das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo de cães em enxertos de pele em coelhos.


#3 - Ganciclovir attenuates the respiratory disease induced by Equid alphaherpesvirus 1 in rabbits

Abstract in English:

Equid alphaherpesvirus 1 (EHV-1) is an important pathogen of horses, associated with respiratory, neurological disease and abortions. As vaccination is not always effective, anti‑herpetic therapy may represent an alternative to prevent the losses caused by the infection. We herein investigated the activity of ganciclovir (GCV), an anti-herpetic human drug, in rabbits experimentally infected with EHV-1. Thirty-days-old New Zealand rabbits were allocated in three groups (6 animals each) and submitted to different treatments: G1 (non-infected controls), G2 (inoculated with EHV-1) - 107 TCID50 intranasally - IN) and G3 (inoculated IN with EHV-1 and treated with GCV - 5mg/kg/day for 7 days) and monitored thereafter. All animals of G2 developed systemic signs (moderate to severe apathy, anorexia), ocular discharge and respiratory signs (serous to mucopurulent nasal discharge), including mild to severe respiratory distress. Viremia was detected in all rabbits of G2 for up to 11 days (mean duration = 6.5 days). One animal died after severe respiratory distress and neurological signs (bruxism, opistotonus). In addition, these animals gained less weight than the control (G1) and GCV-treated rabbits (G3) from days 4 to 14pi (p<0.05). The clinical score of rabbits of G2 was statistically higher than the other groups from days 3 to 6pi (p<0.05), demonstrating a more severe disease. In contrast, G3 rabbits did not present systemic signs, presented only a mild and transient nasal secretion and gained more weight than G2 animals (p<0.05). In addition, viremia was detected in only 3 rabbits and was transient (average of 2.3 days). Thus, administration of GCV to rabbits inoculated IN with EHV-1 resulted in an important attenuation of the clinical disease as demonstrated by full prevention of systemic signs, maintenance of weight gain and by drastic reduction in viremia and in the magnitude of respiratory signs. These results are promising towards further testing of GCV as a potential drug for anti-herpetic therapy in horses.

Abstract in Portuguese:

O alfaherpesvírus equino 1 (EHV-1) é um importante patógeno de equinos, associado com doença respiratória, neurológica e abortos. Como a vacinação nem sempre é eficaz, a terapia anti-herpética pode representar uma alternativa para prevenir as perdas causadas pela infecção. Para tal, investigou-se a atividade do ganciclovir (GCV), uma droga anti-herpética de uso humano, em coelhos infectados experimentalmente com o EHV-1. Coelhos da raça Nova Zelândia com 30 dias de idade foram alocados em três grupos (6 animais cada) e submetidos a diferentes tratamentos: G1 (controles não infectados), G2 (inoculados com o EHV-1) - 107 TCID50 intranasal - IN) e G3 (inoculados IN com o EHV-1 e tratados com GCV - 5mg/kg/dia por 7 dias), e monitorados posteriormente. Todos os animais do G2 desenvolveram sinais sistêmicos (apatia moderada a grave, anorexia), secreção ocular e sinais respiratórios (secreção nasal serosa a mucopurulenta), incluindo dificuldade respiratória leve a grave. Viremia foi detectada em todos os coelhos do G2 por até 11 dias (duração média = 6,5 dias). Um animal morreu após dificuldade respiratória grave e sinais neurológicos (bruxismo, opistótono). Além disso, esses animais ganharam menos peso que os coelhos controle (G1) e tratados com GCV (G3) entre os dias 4 e 14pi (p<0,05). O escore clínico de coelhos do G2 foi estatisticamente maior que os demais grupos dos dias 3 a 6pi (p<0,05), demonstrando uma doença mais grave. Em contraste, os coelhos do G3 não apresentaram sinais sistêmicos, apresentaram apenas secreção nasal leve e transiente e ganharam mais peso que os animais do G2 (p<0,05). Além disso, a viremia foi detectada em apenas 3 coelhos e foi transitória (média de 2,3 dias). Assim, a administração de GCV a coelhos inoculados com EHV-1 resultou em uma importante atenuação da doença clínica, como demonstrado pela prevenção completa de sinais sistêmicos, manutenção do ganho de peso e pela redução drástica da viremia e da magnitude dos sinais respiratórios. Estes resultados são promissores para testes adicionais com o GCV para potencial terapêutico anti-herpética em equinos.


#4 - Expression patterns of mesenchymal stem cell-specific proteins in adipose tissue-derived cells: possible immunosuppressing agent in partial allograft for restoring the urinary bladder in rabbits

Abstract in English:

Adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) are an attractive source of mesenchymal stem cells (MSCs) for use in tissue engineering and clinical applications. This paper focuses on the characterization of ADSCs used as immunosuppressive agent in rabbits undergoing partial allograft for urine bladder restorage. For this study highlighted the characterization of the ADSCs used as immunosuppressive agents in rabbits submitted to partial allograft for restoration of the urinary vesicle, using 25 animals, six months old, New Zealand. ADSCs at the third peal were characterized by the MSC-specific CD105, CD73 and CD90 expression and by the absence of the hematopoietic marker CD45, as revealed by flow cytometry analysis. Moreover, ADSCs were efficient in preventing allograft rejection from the urinary bladder, as judged by biochemical, clinical and ultrasonography analysis. Together, these results compose characterization of protein expression profiles and immunosuppressive functionality of ADSCs in rabbits, which had undergone partial allografts of the urinary bladder, foreseeing future applications in clinical practice.

Abstract in Portuguese:

As células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) são uma fonte atraente de células-tronco mesenquimais (MSCs) para uso na engenharia de tecidos e suas aplicações clínicas. Este trabalho destacou a caracterização das ADSCs utilizadas como agentes imunossupressores em coelhos submetidos a aloenxerto parcial para restauração da vesícula urinária, sendo utilizados 25 animais, de seis meses de idade, Nova Zelândia. As ADSCs, após o terceiro repique, foram caracterizadas pela expressão específica de MSC CD105, CD73 e CD90 e pela ausência do marcador hematopoiético CD45, tal como revelado por análise de citometria de fluxo. Além disso, os ADSCs foram eficientes na prevenção da rejeição de aloenxertos da vesícula urinária, conforme avaliado por análises clínica, bioquímica e ultrassonográfica. Juntos, esses resultados compõem a caracterização dos perfis de expressão proteica e a funcionalidade imunossupressora de ADSCs em coelhos, que sofreram aloenxertos parciais da bexiga, prevendo futuras aplicações na prática clínica.


#5 - Experimental poisoning by Brachiaria decumbens in rabbits, 38(10):1885-1889

Abstract in English:

ABSTRACT.- Utiumi K.U., Albuquerque A.S., Burque A.S., Souza F.R., Sonne L., Varaschin M.S., Raymundo D.L. & Peconick A.P. 2018. Experimental poisoning by Brachiaria decumbens in rabbits. [Intoxicação experimental por Brachiaria decumbens em coelhos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(10):1885-1889. Setor de Medicina Veterinária Preventiva, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Lavras, Cx. Postal 3037, Lavras, MG 37200-000, Brazil. E-mail: ki_uemura@yahoo.com.br Brachiaria spp. are important sources of forage for ruminants in Brazil, due to the easy cultivation, good resistance to drought, good adaptation to different soils and low maintenance cost. However, the ingestion of this grass has been related to photosensitization outbreaks in cattle and sheep with significant economic losses. The hepatotoxic effects related to the ingestion of grass are the formation of crystals and foamy macrophages due to the accumulation of toxic metabolites. The use of cattle and sheep in experiments involving the plant presents several obstacles in the ethical, economic and animal management. The objective of this study was to evaluate the sensitivity of rabbits as an experimental model for B. decumbens poisoning. Two experiments were carried out. In Experiment 1 four rabbits received the fresh plant in daily doses of 10, 20, 40 and 80g/kg body weight for 120 days. In Experiment 2 three rabbits received the fresh plant in amounts of 500g daily with duration of 210 days. The animals of Experiment 1 showed no clinical signs and no macroscopic and microscopic changes characteristic of B. decumbens poisoning. In Experiment 2 the animals also showed no clinical signs or significant macroscopic alterations. Histological analysis showed isolated foamy macrophages or present in random groups of cells in the liver and mesenteric lymph nodes. Samples of liver and mesenteric lymph nodes of the rabbits of Experiment 2 were submitted to the lectin-histochemistry technique. The WGA, sWGA and RCA lectins showed reactivity in foamy macrophages in both organs. This is the first study of our knowledge that demonstrates histopathological lesions caused expetimentally by Brachiaria spp. in rabbits, demonstrating its potential as an animal model.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Utiumi K.U., Albuquerque A.S., Burque A.S., Souza F.R., Sonne L., Varaschin M.S., Raymundo D.L. & Peconick A.P. 2018. Experimental poisoning by Brachiaria decumbens in rabbits. [Intoxicação experimental por Brachiaria decumbens em coelhos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(10):1885-1889. Setor de Medicina Veterinária Preventiva, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Lavras, Cx. Postal 3037, Lavras, MG 37200-000, Brazil. E-mail: ki_uemura@yahoo.com.br Brachiaria ssp. são importantes fontes de forragem para ruminantes no Brasil, devido ao fácil cultivo, boa resistência a seca, boa adaptação a diferentes solos e baixo custo de manutenção. Entretanto, a ingestão desta gramínea está relacionada a surtos de fotossensibilização, em bovinos e ovinos, principalmente, ocasionando prejuízos econômicos significativos. Os efeitos hepatotóxicos relacionados à ingestão da gramínea são a formação de cristais e macrófagos espumosos causados pelo acúmulo de metabólitos tóxicos. A utilização de bovinos e ovinos em experimentos envolvendo a planta apresenta vários empecilhos, tanto no âmbito ético, econômico e no manejo dos animais. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a sensibilidade de coelhos como modelo experimental para intoxicação por B. decumbens. No presente estudo foram realizados dois experimentos. O Experimento 1 utilizou quatro coelhos que receberam a planta fresca em doses diárias de 10, 20, 40 e 80 g/Kg de peso vivo durante 120 dias. O Experimento 2 utilizou três coelhos recebendo a planta fresca em quantidades de 500g diárias por animal com duração de 210 dias. No Experimento 1, os animais não apresentaram sinais clínicos e nem alterações macroscópicas e microscópicas características de intoxicação por B. decumbens. No Experimento 2 os animais também não apresentaram sinais clínicos e alterações macroscópicas significativas. Na análise histológica observou-se presença de macrófagos espumosos isolados ou em grupos aleatórios de células no fígado e nos linfonodos mesentéricos. Amostras de fígado e linfonodos mesentéricos dos animais do Experimento 2 foram submetidos à técnica de lectino-histoquímica. As lectinas WGA, sWGA e RCA apresentaram reatividade em macrófagos espumosos nos dois órgãos. Este é o primeiro trabalho de nosso conhecimento que demonstra lesões histopatológicas por Brachiaria spp conduzido de forma experimental em coelhos, demonstrando seu potencial como modelo animal nesse campo de estudo.


#6 - Autologous and homologous skin grafts treated with platelet-rich plasma (PRP): experimental study in rabbits, 38(9):1818-1823

Abstract in English:

ABSTRACT.- Kemper B., Brandão C.V.S., Rossetto V.J.V., Gushiken L.F.S., Padovani C.R. & Pellizzon C.H. 2018. Autologous and homologous skin grafts treated with platelet-rich plasma (PRP8): experimental study in rabbits. [Enxertos cutâneos autólogos e homólogos tratados com plasma rico em plaquetas (PRP): estudo experimental em coelhos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1818-1823. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Rua Prof. Dr. Walter Mauricio Correa s/n, Cx. Postal 560, Distrito de Rubião Júnior, Botucatu, SP 18618-681, Brazil. E-mail: valeriasb@fmvz.unesp.br The aim of the present study was to compare tissue repair of skin defects in rabbits submitted to autologous and homologous grafts treated or not with platelet-rich plasma (PRP). We selected nine rabbits and constituted four groups, designated as G1, in which were performed autologous graft treated with PRP; G2, autologous graft only; G3, homologous graft treated with PRP; and G4, homologous graft only. Macroscopic and histomorphometric evaluation was realized. The histomorphometric evaluation was performed by Hematoxylin/Eosin and Masson´s Trichrome staining with quantification of collagen fibers, macrophages, fibroblasts and vessels. The autologous graft treated with PRP showed positive influence on the early stage of the tissue repair process at the macroscopic evaluation, characterized by rosy color and cosmetic appearance. At the histomorphometric evaluation, there was no statistical difference in the number of macrophages and fibroblasts between the treated grafts or not with the PRP, as well as the quantification of vessels and collagen fibers. It can be concluded that PRP promotes a positive influence on the initial phase or “take” of the graft.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Kemper B., Brandão C.V.S., Rossetto V.J.V., Gushiken L.F.S., Padovani C.R. & Pellizzon C.H. 2018. Autologous and homologous skin grafts treated with platelet-rich plasma (PRP8): experimental study in rabbits. [Enxertos cutâneos autólogos e homólogos tratados com plasma rico em plaquetas (PRP): estudo experimental em coelhos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1818-1823. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Rua Prof. Dr. Walter Mauricio Correa s/n, Cx. Postal 560, Distrito de Rubião Júnior, Botucatu, SP 18618-681, Brazil. E-mail: valeriasb@fmvz.unesp.br Objetiva-se com o presente estudo comparar a reparação tecidual de defeitos cutâneos em coelhos, submetidos a enxertos autólogos e homólogos, tratados ou não com plasma rico em plaquetas (PRP). Para isso, foram selecionados nove coelhos e constituídos quatro grupos experimentais, designados como G1, no qual foi realizado enxerto autólogo tratado com PRP; G2, enxerto autólogo; G3, enxerto homólogo tratado com PRP; e G4, enxerto homólogo. Foram realizadas avaliações macroscópica e histomorfométrica, por meio das colorações de Hematoxilina/Eosina e Tricômio de Masson, incluindo quantificação de fibras colágenas, contagem de macrófagos, fibroblastos e vasos. O uso do enxerto autólogo com PRP influenciou positivamente na fase inicial do processo de reparação tecidual à avaliação macroscópica, caracterizada por coloração rósea e de aspecto cosmético. À avaliação histomorfométrica, não houve diferença estatística quanto ao número de macrófagos e fibroblastos entre os enxertos tratados ou não com o PRP, bem como quanto às contagens de vasos e a quantificação das fibras colágenas. Conclui-se que o PRP sob a promoveu influência positiva na fase inicial ou de “pega” do enxerto autólogo.


#7 - Establishment of an experimental model of small intestinal ischemia and reperfusion injuries in New Zealand rabbits, 38(8):1664-1674

Abstract in English:

ABSTRACT.- Oliveira A.P.L., Rangel J.P.P., Riodades L.F.S., Almeida B.L., Mathias C.H.T., Conti L.M.C., Fiorio W.A.B. & Monteiro B.S. 2018. Establishment of an experimental model of small intestinal ischemia and reperfusion injuries in New Zealand rabbits. [Estabelecimento de modelo experimental de indução da lesão de isquemia e reperfusão de intestino delgado em coelhos Nova Zelândia.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1664-1674. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Vila Velha, Rua Comissário José Dantas de Melo 21, Vila Velha, ES 29102-920, Brazil. E-mail: oliveira.medvet@hotmail.com The present study aimed to establish a methodology capable to cause intestinal ischemia and reperfusion injuries, to perform clamping of the jejunal segment of the extramural peri-intestinal marginal artery branch. For this, 37, 10-week-old male New Zealand breed rabbits were used. One rabbit was used to establish the anatomic references for the procedure and was not part of the six experimental groups; the rest were allocated into six experimental groups: Sham group, negative control, subjected only to midline celiotomy; group I1H undergoing vascular occlusion for an hour; group I2H submitted to vascular occlusion for two hours; group I1H/R2H undergoing vascular occlusion for one hour followed by two hours of reperfusion; group I2H/R1H undergoing vascular occlusion for two hours, followed by reperfusion for one hour, and group I2H/R5H undergoing vascular occlusion for two hours followed by reperfusion for five hours. The rabbits were evaluated for the macroscopic aspects (color and peristalsis) of the jejunal segment, as well as the histological aspect, checking for presence or absence of mucosal destruction, edema, hemorrhaging, lymphatic vessel dilatation, and the presence of polymorphonuclear cells. It was observed that the macroscopic and histopathological lesions accentuated in larger employed ischemia and reperfusion times. Rabbits subjected to ischemia for two hours followed by reperfusion for five hours (I2H/R5H) made up the experimental group which was easily reproducible and showed moderate intestinal injury, different from the other groups.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Oliveira A.P.L., Rangel J.P.P., Riodades L.F.S., Almeida B.L., Mathias C.H.T., Conti L.M.C., Fiorio W.A.B. & Monteiro B.S. 2018. Establishment of an experimental model of small intestinal ischemia and reperfusion injuries in New Zealand rabbits. [Estabelecimento de modelo experimental de indução da lesão de isquemia e reperfusão de intestino delgado em coelhos Nova Zelândia.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1664-1674. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Vila Velha, Rua Comissário José Dantas de Melo 21, Vila Velha, ES 29102-920, Brazil. E-mail: oliveira.medvet@hotmail.com O presente estudo objetivou estabelecer uma metodologia capaz de causar lesões de isquemia e reperfusão intestinal, realizando clipagem de um ramo de artéria marginal peri-intestinal extramural em segmento jejunal. Para tal foram utilizados 37 coelhos da raça Nova Zelândia, machos, de 10 semanas de idade, alocados em seis grupos experimentais: grupo Sham, controle negativo, submetido apenas a celiotomia mediana; grupo I1H submetido à oclusão vascular por uma hora; grupo I2H submetido a oclusão vascular por duas horas; grupo I1H/R2H submetido a oclusão vascular por uma hora, seguida de reperfusão por duas horas; grupo I2H/R1H submetido a oclusão vascular por duas horas, seguida de reperfusão por uma hora e grupo I2H/R5H submetido a oclusão vascular por duas horas seguida de reperfusão por cincos horas. Os animais foram avaliados quanto o aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e quanto ao aspecto histopatológico, verificando presença ou ausência de destruição de mucosa, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de polimorfonucleares. Observou-se que as lesões macroscópicas e histopatológicas se acentuaram nos maiores tempos de isquemia e reperfusão empregados. Os animais submetidos à isquemia durante duas horas, seguida de reperfusão por cinco horas (I2H/R5H) compuseram o grupo experimental de fácil reprodução e foram os que apresentaram uma lesão intestinal moderada, diferentes dos demais grupos.


#8 - Allogenic mesenchymal stem cell intravenous infusion in reparation of mild intestinal ischemia/reperfusion injury in New Zealand rabbits

Abstract in English:

The present study aimed to evaluate the efficacy of mesenchymal stem cell (MSC) infusion, derived from adipose tissue, on reduction of local and remote tissue damage caused by the event of experimental intestinal I/R in New Zealand breed rabbits. For obtaining, characterization, and cultivation of MSC derived from adipose tissue (MSC-Adp), 3 juvenile animals (four months old) were used. The cells were considered to be viable for therapy after the fourth passage (in vitro phase). For the in vivo stage, 24 young adult animals (six months old) were used, weighing approximately 3.5 kg, in which were randomly divided into two groups, called: IR treated with MSC (I2H/R5H MSC 3D; I2H/R5H MSC 7D); IR treated with PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). The animals were anesthetized and submitted to pre-retro-umbilical midline celiotomy. The extramural peri-intestinal marginal artery was located and clamped (predetermined and standardized region) with the aid of a vascular clip, promoting a 2 hour blood flow interruption. After this period, blood flow was reestablished, inhalatory anesthesia was suspended, and the animals awaken. After 5 hours of reperfusion, the treatments were performed by intravenous infusion according to the experimental groups. The animals were evaluated 72 hours and seven days after the treatment as for the macroscopic appearance (color and peristaltism) of the jejunal segment, and by histological evaluation of the ischemic segment for the presence or absence of destruction of the intestinal mucosa, edema, bleeding, dilation of lymph vessels, and presence of polymorphonuclear inflammatory cells, both in the mucosa and submucosa. The observed results revealed that the groups treated with MSC-Adp obtained smaller mucosal and submucosal lesions when compared to the groups treated with PBS. Also, MSC-Adp treated groups obtained controlled inflammatory response and higher mitotic rate, outcomes related to the therapeutic potential of MSC. Infusion of stem cells attenuated the lesions caused by intestinal I/R in both MSC groups when compared to the group treated with PBS.

Abstract in Portuguese:

O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a eficácia da infusão células tronco mesenquimais (CTM) derivada de tecido adiposo sobre diminuição das lesões teciduais locais e remotas, causadas pelo evento de I/R intestinal experimental, em coelhos da raça Nova Zelândia. Para obtenção, cultivo e caracterização das CTM provenientes de tecido adiposo (ADCTM) foram utilizados 3 animais jovens. As células foram consideradas viáveis para terapia a partir da quarta passagem (fase in vitro). Para etapa in vivo foram utilizados 24 animais, adulto-jovens, pesando aproximadamente 3,5kg, divididos aleatoriamente em dois grupos experimentais, denominados IR Tratado com CTM (I2H/R5H CTM 3D; I2H/R5H CTM 7D); IR Tratado PBS (I2H/R5H PBS 3D; I2H/R5H PBS 7D). Os animais foram anestesiados e submetidos à celiotomia mediana pré-retroumbilical. A artéria marginal peri-intestinal extramural foi localizada e clampeada (região predeterminada e padronizada) com auxílio de um clipe vascular, promovendo uma interrupção do fluxo sanguíneo durante 2 horas. Após esse período, o fluxo sanguíneo foi restabelecido, a anestesia inalatória suspendida e os animais despertados. Após 5 horas de reperfusão realizou-se os tratamentos por infusão endovenosa, conforme grupos experimentais. Os animais foram avaliados 72 horas e sete dias após o tratamento quanto ao aspecto macroscópico (coloração e peristaltismo) do segmento jejunal e por meio de avaliação histológica do segmento isquemiado quanto à presença ou ausência de destruição de mucosa intestinal, edema, hemorragia, dilatação de vasos linfáticos e presença de células inflamatórias polimorfornucleares, tanto em mucosa quanto submucosa. Os resultados observados revelaram que os grupos tratados com ADCTM obtiveram menores lesões em mucosa e submucosa quando comprados aos grupos tratados com PBS. Ainda os grupos tratados com ADCTM obtiveram resposta inflamatória controlada e maior taxa mitótica, resultados relacionados ao potencial terapêutico das CTM.


#9 - Matrix metalloproteinases 2 and 9 in rabbits with doxorubicin-induced cardiomyopathy

Abstract in English:

Some studies have shown the role played by matrix metalloproteinases and their inhibitors in doxorubicin cardiotoxicity. In this study, we sought to investigate how plasma and myocardial MMP 2 and 9 perform in rabbits with doxorubicin-induced cardiomyopathy, searching for a correlation between the activity of these collagenases and cardiac remodeling. Cardiomyopathy was induced by doxorubicin given intravenously twice a week for six consecutive weeks. Plasma MMP activity and the echocardiogram were assessed at baseline, and at 15 and 45 days after first injection of doxorubicin. The myocardial activity of these enzymes was solely evaluated in nine rabbits at 45 days, and results were compared with nine healthy controls. We only identified the full-length forms of both MMP 2 and 9 throughout the study. The plasma pro-MMP 2 reduced along the deterioration of cardiac function, while the pro-MMP 9 increased significantly at T45 as compared to baseline and T15. A negative significant correlation was found to exist between the plasma activity of pro-MMP 2 and mitral E-to-mitral septal annular early diastolic velocity ratio, which is an estimate of mean left atrial pressure and congestion. Only pro-MMP 2 was found in myocardial samples, and mean activity of such enzyme was statistically lower than that recorded for healthy controls. Although no active form was documented for either collagenase, the duration of the treatment with doxorubicin played a role in the alteration of plasma pro-forms activity. However, these changes could not be associated with most echocardiographic parameters that are supportive of cardiac remodeling.

Abstract in Portuguese:

Alguns estudos já demonstraram o papel exercido pelas metaloproteinases de matriz e seus inibidores na cardiotoxicidade promovida pela doxorrubicina. Assim, este estudo teve como objetivo investigar o comportamento das MMPs 2 e 9 plasmáticas e miocárdicas em coelhos com cardiomiopatia induzida pela doxorrubicina, buscando determinar se há correlação entre a atividade dessas colagenases e o remodelamento cardíaco. A cardiomiopatia foi induzida pela doxorrubicina aplicada por via intravenosa duas vezes por semana ao longo de seis semanas consecutivas. A atividade plasmática das MMPs e o ecocardiograma foram avaliados no momento basal e aos 15 e 45 dias após a primeira aplicação da doxorrubicina. A atividade miocárdica dessas enzimas foi quantificada em apenas nove coelhos aos 45 dias e os resultados comparados com outros nove controles saudáveis. Foram identificadas apenas as formas inativas das MMPs 2 e 9 durante todo o estudo. A pro-MMP 2 plasmática reduziu à medida que a função cardiaca se deteriorou, enquanto a pro-MMP 9 aumentou significativamente em T45 quando comparada aos momentos basal e T15. Houve correlação negativa significativa entre a atividade plasmática da pro-MMP 2 e a relação entre E mitral e a velocidade anular mitral no início da diástole, um parâmetro que permite estimar a pressão atrial esquerda média e a congestão. Apenas a pro-MMP 2 foi documentada nas amostras miocárdicas dos coelhos com cardiomiopatia e atividade media dessa enzima foi estatisticamente menor que aquela observada nos controles saudáveis. Embora a forma ativa de ambas as colagenases não tenha sido identificada, o tempo de tratamento com doxorrubicina interferiu na atividade das formas inativas plasmáticas. Contudo, essas alterações não se associaram com a maioria dos parâmetros ecocardiográficos que indicam remodelamento cardíaco.


#10 - Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma, 37(12):1519-1525

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pazzini J.M., Serafim E.L., Gärtner F., Amorim I., Faria F., Rêma A., Moraes P.C. & De Nardi A.B. 2017. Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1519-1525. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista, Campus Jaboticabal, Via de Acesso Paulo Donatto Castellane s/n, Jaboti­cabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: josipazzini@hotmail.com Histochemical staining consists of a set of specific chemical reactions of structures or tissue-endogenous substances. Immunohistochemistry allows verification of proteins in tissues related to biological and pathological factors. The standardization of methods to assess angiogenesis resulting from formation of new blood vessels in procedures with stimulants is important to facilitate the implementation of research as well as to assist interpretation of data. In rabbits some markers of angiogenesis antibodies in the skin are not standardized because of cross-reactions that may occur because the antibodies are made from such animals.The aim of this study was to analyze the immunohistochemical methods through dyes and immunohistochemical markers angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) having undergone reconstructive surgery with skin grafts associated with plasma angiogenesis stimulator rich in platelets, in order to evaluate which method would be better to visualize the vessels, as well as to evaluate which antibody would promote better immunostaining, and find the differences between the methods and to standardize the methodology to be applied in experiments using rabbits. Sixteen rabbits were used, split into two groups of eight animals: Gprp (plasma rich in platelets) and Gc (control, saline solution, 9%). The same technique of reconstructive surgery using graft mesh was performed on each rabbit. The groups differed only in the application of platelet-rich plasma before the surgical wound synthesis. Samples for evaluation of angiogenesis were collected 15 days after the surgical procedure. The dyes Hematoxylin & Eosin and Masson’s Trichrome were used in the histochemical study to evaluate vascular proliferation. Markers CD31, CD34 and Caveolin-1 was used for the immunohistochemical study. The evaluation between the groups (Gprp and Gc) in regard to the categorical variable (vascular proliferation intensity) used the Kruskal-Wallis test with p values equal to or less than 0.05 being considered significant. The immunohistochemistry was subjected to analysis of variance for a completely randomized design, with two groups and five repetitions (medium) and 5% significance level. Multiple comparison of groups resulted in the Tukey test (p=0.05) used. The amount of vascular proliferation assessed by histochemical method HE and Masson’s Trichrome was found to be a significant variable in Gprp when compared with group Gc. When evaluating the methods used, there was no significant difference. There was no difference in the three markers which were used for correlating microvessels; however, there was more intense staining of vessels when Caveolin-1 Antibody was used. This caused intense marking of the capillaries and small vessels, as well as of larger vessels. When using CD31 and CD34, the same was observed, but it was not as intense as with Caveolin-1; though some cases showed sincere and discreet marking. The results of this study demonstrated that the histochemical methods performed are effective for semi-quantitative assessment of angiogenesis. The immunohistochemical comparison of Caveolin-1, CD31, and CD34 as markers of angiogenesis in rabbits showed that both antibodies could immunostain the newly formed vessels; but the Caveolin-1 showed better immunostaining in small and medium-sized vessels, as well as a minor presence in the background. Although not specific markers for angiogenesis, they can be used as immunohistochemical markers of vascular endothelium in rabbits.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pazzini J.M., Serafim E.L., Gärtner F., Amorim I., Faria F., Rêma A., Moraes P.C. & De Nardi A.B. 2017. Histochemical and immunohistochemical evaluation of angiogenesis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) submitted to skin grafts associated with platelet-rich plasma. [Histoquímica e imunohistoquíca na avaliação da angiogênese em coelhos submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com plasma rico em plaquetas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1519-1525. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista, Campus Jaboticabal, Via de Acesso Paulo Donatto Castellane s/n, Jaboti­cabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: josipazzini@hotmail.com Colorações histoquímicas consistem de um conjunto de reações químicas específicas das estruturas ou substâncias endógenas do tecido. Logo a Imunohistoquímica permite observar proteínas presentes nos tecidos relacionadas com fatores determinantes do comportamento biológico e patológico. A padronização dos métodos que avaliam a angiogênese decorrente de procedimentos que utilizam substâncias estimulantes à formação de novos vasos são importantes, a fim de facilitar a execução das pesquisas, bem como auxiliar na interpretação dos dados, visto que em coelhos alguns anticorpos marcadores de angiogênese na pele ainda não são padronizadas em virtude das reações cruzadas que podem ocorrer devido aos anticorpos serem confeccionados a partir de tais animais. Objetivou-se analisar os métodos histoquímicos por meio das colorações e imunohistoquímicas com marcadores de angiogênese em coelhos (Oryctolagus cuniculus) submetidos ao emprego de enxertos cutâneos associado com estimulador de angiogênese plasma rico em plaquetas, a fim de avaliar qual método seria melhor para visualização dos vasos, bem como avaliar qual anticorpo promoveria melhor imunomarcação, buscando-se assim encontrar a diferenças entre os métodos e padronizar a metodologia a ser aplicada em experimentos que utilizem coelhos. Utilizou-se 16 coelhos, separados em dois grupos com oito animais, compreendendo os grupos Gprp (plasma rico em plaquetas) e Gc (controle, solução fisiológica 0,9%). Em todos os animais foi realizada a mesma técnica de cirurgia reconstrutiva de enxertia do tipo malha, os grupos diferiram apenas a aplicação do plasma rico em plaquetas antes da síntese da ferida cirúrgica. As amostras para avaliação da angiogênese foram coletadas após 15 dias do procedimento cirúrgico. Utilizou-se no estudo histoquímico as colorações Hematoxilina & Eosina e Tricrômico de Masson para avaliação da proliferação vascular, e os anticorpos CD31 e CD34 e Caveolina - 1 para avaliação imunohistoquímica. A comparação entre os grupos (Gprp e Gc) em relação à variável categórica (intensidade de proliferação vascular) foi utilizado o teste de Kruskal-Wallis, com valores de p iguais ou inferiores a 0,05 foram considerados significativos. Os dados imuno-histoquímico foram submetidos à análise de variância para um delineamento inteiramente ao acaso, com 2 grupos e 5 repetições (médias) e nível de significância de 5%. Nas comparações múltiplas das médias dos grupos, utilizou-se o teste de Tukey (a = 0,05). A intensidade de proliferação vascular avaliada pelo método histoquímico HE e Tricômico de Masson encontrou-se que tal variável foi significativa no Gprp, quando comparado com o Gc. Avaliando os métodos utilizados não houve diferença significativa. A contagem microvascular (MVC) realizada com os diferentes marcadores (Caveolina-1, CD31 e CD34) foi significativa no Gprp. Correlacionando a contagem microvascular dos três marcadores utilizados não houve diferença significativa, no entanto observou-se marcação mais intensa dos vasos utilizando o anticorpo Caveolina-1, sendo intensa a marcação dos capilares, vasos de pequeno calibre, bem como em vasos maiores. Nas avaliações de CD31 e CD34 observou que houve imunomarcação dos vasos, porém não foi intensa como a Caveolina-1, alguns casos apresentaram fundo, bem como marcação discreta. Os resultados encontrados neste estudo evidenciaram os métodos histoquímicos são eficazes para avaliação semiquantitativa da angiogênese. A comparação imunohistoquímicas da Caveolina-1, CD31 e CD34 como marcadores de angiogênese em coelhos evidenciaram que ambos os anticorpos são capazes de imunomarcar os vasos neoformados, porém a Caveolina-1 apresentou melhor imunomarcação de vasos de pequeno e médio calibre, bem como menor presença de fundo, embora não seja um marcador específico para angiogênese pode ser utilizada como marcador imunohistoquímico de endotélio vascular em coelhos.


Colégio Brasileiro de Patologia Animal SciELO Brasil CAPES CNPQ UNB UFRRJ CFMV