Abstract in English:
The heat induced micro-complement-fixation test was used for the laboratory diagnosis of botulism in cattle. The following specimens were collected in southeastem and central-westem Brazil: Thirty six samples of blood serum, liver and rumen liquid from 23 bovines with clinical signs of botulism (a condition commonly called "doença da vaca caída" - fallen cow disease) and from 1 bovine inoculated subcutaneously with botulinum type C toxin. Samples of blood serum, liver and rumen liquid collected from healthy bovines were used as negative controls. Sixteen out of 17 serum samples were positive for botulinum toxin in cattle with clinical signs of acute, subacute and chronic botulism. All 9 liver samples were positive including those from chronic cases. Two samples of rumen liquid from bovines with the acute disease gave a positive test, but 2 other chronic cases were negative. All 3 samples collected from the bovine with subacute clinical sigos gave positive results. From 36 samples examined, 31 were positive; of these 2 were of type C, 5 type D and 24 samples had to be grouped within the CD complex. All samples gave negative results with the mouse bioassay, including the material collected from the experimental case. In conclusion at least one sample of each of the 24 cases examined gave a positive result for botulinum toxin; thus this highly sensitive test confirmed the diagnosis that the "doença da vaca caída" is indeed botulism, caused by type C and D toxins.
Abstract in Portuguese:
Foi utilizada a técnica de Microfixação de Complemento Induzida pelo Aquecimento para o diagnóstico laboratorial do botulismo em bovinos. Neste sentido foram colhidas, nas regiões Sudeste e Centro-Oeste do Brasil, 36 amostras constituídas por soro sangüíneo, fígado e líquido ruminal de 23 bovinos com quadro clínico de botulismo, vulgarmente conhecido como “doença da vaca caída”, e de 1 bovino intoxicado experimentalmente pela toxina botulínica tipo C. Como controle negativo foram utilizados soro sangüíneo, fígado e líquido ruminal de bovinos sadios. De 17 soros examinados de bovinos com quadros clínicos agudo, subagudo e crônico, 16 foram positivos para a presença de toxina; todas as 9 amostras de fígado também foram, positivas, mesmo de animais com intoxicação crônica. Duas amostras de líquido ruminal de bovinos com doença aguda foram, positivas no teste, enquanto 2 amostras colhidas de animais com evolução crônica foram negativas. As 3 amostras oriundas do bovino intoxicado experimentalmente e apresentando evolução subaguda, foram positivas na Microfixação. Das 36 amostras examinadas, 31 foram positivas no teste, sendo 2 pertencentes ao tipo C, 5 ao tipo D, e 24 agrupadas dentro do complexo CD. Todas essas amostras foram negativas no Bioensaio em camundongo, inclusive o material colhido do bovino intoxicado experimentalmente. Com base nos resultados, e tendo como referência o Bioensaio em camundongo, a Microfixação de Complemento demonstrou um excelente desempenho, permitindo o diagnóstico laboratorial de botulismo em pelo menos um material de cada um dos 24 casos examinados, confirmando assim o diagnóstico de que a "doença da vaca caída" é de fato botulismo causado pelas toxinas C e D.
Abstract in English:
Enzootic calcinosis was reproduced in sheep by the administration of Nierembergia veitchii mixed with food at a concentration of 50% for 21 days and at 10% level for 49 days. At a concentration of 50% N. veitchii produced loss of body weight, and at 10% lower body weight gains than the control animals. Food consumption was decreased and hypercalcemia and hyperphosphatemia were evident in both groups. Pathological findings included: soft tissue calcification, more severe in those animals that received N. veitchii at 50%; hyperplasia of thyroid C cells; atrophy of the parathyroids and osteopetrosis. Nierembergia veitchii, which contains a calcitriol-like substance, is approximately 78 times less toxic than Solanum malacoxylon.
Abstract in Portuguese:
Calcinose enzoótica foi reproduzida experimentalmente em ovinos mediante a administração de Nierembergia veitchii dessecada, misturada a 50% na ração durante 21 dias, e a 10% durante 49 dias. Os ovinos que ingeriram alimentação com 50% da planta perderam peso e os que foram alimentados com 10% da planta tiveram menores ganhos de peso que os controles. Nos 2 grupos tratados houve diminuição do consumo de ração, hipercalcemia e hiperfosfatemia. As alterações patológicas caracterizaram-se por: calcificação dos tecidos moles, mais marcada no grupo que ingeriu N. veitchii a 50%; hiperplasia das células parafoliculares da tireóide; atrofia das paratireóides e osteopetrose. Nierembergia veitchii, que contém um princípio ativo de ação similar ao calcitriol, é aproximadamente 78 vezes menos tóxica que Solanum malacoxylon.
Abstract in English:
Mille samples from tbree goat breads (Dusk Alpine, Saanem and Toggenburg) with milk production averaging 2.66 kg/day and from crossbred goats were examined during 12 months for physic-chemical features. The results for individual milk and the mixture were respectively: density 1,030.5 and 1,033.5 at 15ºC; acidity 15.67 and 15,84°D; average percentage of fat 4.00 and 4.1 %; total dry extract 12.42 and 12.95%; fatty dry extract 8.83 and 8.73%; cryoscopic indexes -0.569 and -0.585ºC. The average percentage of chlorides was normal (0.21 and 0.19%); lactose 3.27 and 3.42%; caseíne (PTN) 2.68 and 2.52%; total proteine (PTN) 3.59 and 3.43%. The results obtained with milk from goats with mastitis showed the following alterations caused by experimental infection by Staphylococcus aureus: lowered values for density (1,022.5 and 1,023.0 at 15ºC) and acidity (14.50 and 6.1 ºD); increased values for chlorides (0.34 and 0.39%); and reduced values for lactose (1.00 and 1.12%).
Abstract in Portuguese:
Amostras de leite de cabras de três raças selecionadas (Parda Alpina, Saanem e Toggenburg) com produtividade média de 2,66 kg/ dia e amostras de leite de cabras mestiças, foram examinados durante 12 meses, quanto às características físico-químicas, obtendo-se limites para o leite individual e de mistura, respectivamente, relativos à densidade entre 1.030,5 a 1.033,5 a 15ºC; a acidez entre 15,67 e 15,84°D; aos percentuais médios de gordura 4,00 e 4,1 %; ao extrato seco total entre 12,42 e 12,95%; ao extrato seco desengordurado entre 8,83 e 8,73%; aos índices criosc6picos entre -0,569 e -0,585ºC. As médias anuais referentes a porcentagem de cloretos se apresentaram dentro de limites discretamente acima da normalidade (0,21 e 0,19%); a lactose entre 3,27 e 3,42%; a caseína (PTN) entre 2,68 e 2,52% e o PTN total entre 3,33 e 3,43%; O leite proveniente de cabras com mastite, provocada experimentalmente com Staphylococcus aureus, apresentou alterações quanto à densidade (1.022,5 a 1.023,0 a 15ºC) e acidez (6,1º a 14,50°D); cloretos bastante aumentados (0,39 e 0,34%), e a lactose com valores bastante reduzidos (1,00 e 1,12%).
Abstract in English:
The morphological variation of colonies and biochemical characteristics of Clostridium chauvoei, isolated from the metatarsial and metacarpial bones of bovines with a history of blackleg, were investigated. The 59 cultures isolated contained 7 distinct morphological types of C. chauvoei and only 10 (16.95%) showed Type IV growth according to Zeissler (1928). All cultures hydrolized gelatin, had no proteolytic activíty and produced neither lecithinase nor lipase. Only 51 (86.44%) of the 59 cultures showed saccharolytic activity (lactose fermented). The biochemical profile was increased to 29 biochemical tests. The results indicate the morphological heterogenicity and biochemical variations of C. chauvoei in our environment.
Abstract in Portuguese:
A variação morfológica de colônias e do comportamento bioquímico de culturas de Clostridium chauvoei, isoladas de ossos metatarsianos e metacarpianos de bovinos com histórico clínico de carbúnculo sintomático, foi analisada. Das 59 culturas estudadas, observaram-se 7 tipos morfológicos distintos de C. chauvoei e somente 10 (16,95%) apresentaram crescimento do tipo IV. Todas as culturas isoladas hidrolizaram a gelatina, não apresentaram atividade proteolítica e nem produziram lecitinase e lipase. Das 59 culturas testadas 51 (86,44%) fermentaram a lactose (atividade sacarolítica). O perfil bioquímico foi ampliado para 29 provas bioquímicas. Estes resultados demostraram a heterogenicidade morfológica das colônias de C. chauvoei no nosso meio, apresentando variações nos seus parâmetros bioquímicos.
Abstract in English:
The etiology of actinomycotic-like lesions from 254 lymph nodes of cattle from southern Brazil was determined by histochemistry. The diagnosis of these lesions in hematoxylin-eosin (H-E) preparations was based upon the pyogranulomatous inflammatory reaction with centrally located sulphur grains. The lesions stained by the MacCallum-Goodpasture technique showed 60.36% Gram-positive coccoid bacteria (Staphylococcus), 36.62% Gram-negative cocco-bacillus (Actinobacillus lignieresz) and 2.72% Gram-positive filamentous branching elements (Actinomyces bovis). Fite-Faraco stain demonstrated the acid-fast properties and Gomori stain, the morphological features to distinguish between Actinomyces bovis .and Nocardia sp. Gram-positive cocei were diagnosed as botryomycosis which occurred predominantly in prescapular, parotid and femoral lymph nodes. The presence of Gram-negative coccobacillary elements indicated Actinóbacillus sp., whereas the finding of Gram-positive filamentous branching elements indicated Actinomyces sp. These latter two were more frequently found in retropharyngeal and sublingual lymph nodes. Small differences in the morphology of the bacterial colonies may help to establish the etiological diagnosis in H-E preparations. The Gram method, however, allows an accurate distinction between Actinobacillus lignieresi and Actinomyces bovis in cases where fresh material for bacteriological isolation is no longer available. Of 467 other cases originally diagnosed as tuberculosis in gross inspection at the slaughter house, 10.23% were histologically confirmed as actinomycotic-like granulomas. This certainly causes economic losses due to the condemnation of carcasses.
Abstract in Portuguese:
Foi determinada a etiologia dos "granulomas actinomicóides" através da histoquímica em 254 materiais de linfonodos de bovinos do Rio Grande do Sul. O diagnóstico de granuloma actinomicóide foi baseado na inflamação piogranulomatosa, contendo, na porção central, os grânulos de enxofre, observados na coloração pela hematoxilina e eosina (H-E). Ao material com essa lesão foi aplicada a técnica de MacCallum-Ooodpasture que evidenciou uma incidência de 60,36% de bactérias cocoides Gram-positivas (Staphylococcus), 36,62% de coco-bacilos Gram-negativos (Actinobacillus lignieresz) e de 2,72% de elementos filamentosos, ramificados, Gram-positivos (Actinomyces bovis) como constituintes do grão de enxofre. Nos casos de actinomicose aplicaram-se as técnicas de Fite-Faraco e Prata de Gomori para a diferenciação entre Actinomyces bovis e Nocardia sp. Os casos de botriomicose foram vistos principalmente nos linfonodos pré-escapulares, parotídeos e femurais; os de actinobacilose e actinomicose nos retrofaringes e sublinguais. Pequenas diferenças do aspecto das colônias podem auxiliar no diagnóstico etiológico nas preparações coradas pela H-E, mas o emprego das técnicas de Gram permite a diferenciação entre Actinobacillus lignieresi e Actinomyces bovis quando não se dispõe de culturas. Adicionalmente observou-se pelo estudo histológico de outros 467 casos, que 10,23% deles foram diagnosticados como granuloma actinomicóide, porém interpretados macroscopicamente, na inspeção, como tuberculose o que certamente leva a prejuízos econômicos pela condenação das carcaças.
Abstract in English:
Four sheep spontaneously poisoned by Nierembergia veitchii were isolated from the plant-infested pasture and monitored for periods up to 17 months. Monitoring included routine clinical examination and x-rays of the cervical region. An improvement in general condition and significant body weight gains occurred in the 4 animals within the first few weeks of observation. A slight decrease in the radiopacity of carotid arteries was observed on x-ray examinations performed in all sheep after one year observation. Spontaneous death occurred in 3 animals within the 13th and 17th month of study. The fourth animal was euthanatized at the end of the study. All animals were necropsied and several tissues were submitted for histopathology. Necropsy and histopathological findings were those described in the enzootic calcinosis of sheep however evidences of slight decrease in the degree of arterial calcification were observed. There was no evidence of regression either in the arterial intimal proliferation, osseous and cartilagenous metaplasia of arteries and cardiac valves neither in the bone nor the thyroid gland. The spontaneous deaths were attributed to acute pulmonary edema due to left heart congestive failure caused by severe valvular lesions. Clinical and morphological findings suggest that sheep affected with enzootic calcinosis and presenting signs of cardiac failure should be considered of poor prognosis.
Abstract in Portuguese:
Foi feito um controle clínico, radiológico e anatomopatológico de quatro ovinos com calcinose espontânea por Nierembergia veitchii, durante um período de até 17 meses após os animais terem sido afastados das pastagens com a planta. Os quatro ovinos, mostraram, logo nas primeiras semanas, uma acentuada melhora no estado geral e aumento do peso corporal. Os exames radiológicos da região cervical efetuados um ano após o início do controle, mostraram discreta diminuição da radiopacidade das carótidas. Três animais morreram espontaneamente por insuficiência cardíaca e edema agudo do pulmão. O sobrevivente foi sacrificado aos 17 meses após o início do controle. Todos os animais foram necropsiados e diversos tecidos foram encaminhados para estudo histopatol6gico. Os achados de necropsia e histopatológicos foram aqueles já descritos na calcinose enzoótica dos ovinos, no entanto evidências de uma discreta diminuição do grau de calcificação das artérias foi observada. Não foram·encontradas·evidências de reversibilidade nas proliferações da íntima das artérias, nas áreas de metaplasia óssea e cartilaginosas das artérias e válvulas cardíacas, assim como nas alterações dos Óssos e tireóide. Os achados clínicos e anatomopatológicos sugerem que ovinos com calcinose que mostram sinais de insuficiência cardíaca têm mau prognóstico.
Abstract in English:
The macromolecules present in the Boophilus microplus saliva were separated by Electrophoresis on Polyacrylamide Gels and transferred to nitrocellulose paper. Some aspects were studied in both situations. Using Coomassie Brilliant Blue 250R to stain the proteins in the gel, 6 and 11 bands were detected on nondenaturing and denaturing systems respectively. Three glicoprotein and one lipoprotein bands were detected when Beta-mercaptoethanol was used (denaturing system). In this situation, three antigenic bands were observed in nitrocellulose paper after immunoenzymatic procedure when infested bovine or hyperimmune rabbit or mouse sera were used. All of these were glicoproteins.
Abstract in Portuguese:
A saliva (pool) de Boophilus microplus foi submetida a eletroforese em gel de poliacrilamida e logo a seguir procedida a transferência para papel de nitrocelulose, a fim de que a antigenicidade pudesse ser observada. A eletroforese revelou a existência de seis bandas quando em condições de não desnaturação e 11 bandas em condições desnaturantes. Neste último caso, três bandas eram glicoprotefuas e uma lipoprotefua. A revelação imunoenzimática no papel de nitrocelulose evidenciou três bandas quando se usaram soros de bovinos infestados por esse ixodídeo ou soro de coelhos e camundongos imunizados com a citada saliva.
Abstract in English:
The levels of copper of 365 bovine livers were determined by atomic absorption spectrophotometry. Two hundred and sixty-six samples were obtained at slaughter-houses and the other 99 from necropsies. All the samples were collected from animals raised in southern Rio Grande do Sul. The area studied was divided in four zones: Litoral, Encosta do Sudeste, Serra do Sudeste and Campanha. Copper concentrations of<25 ppm (dry basis) were detected in 31.34% and 31.16% of slaughtered cows and bullocks, respectively, and in 36.36% of necropsy materials, showing marked depletión of this element. Nine samples from necropsies had levels lower than 5 ppm (d.b.); eight were from animals that died suddenly, suggesting an association between the death and low levels of copper. Livers obtained from necropsies and slaughtered cows, which carne from Litoral and Encosta do Sudeste, both localized near the Lagoa dos Patos and Lagoa Mirim, had mean copper concentrations significantly lower than those from Serra do Sudeste.
Abstract in Portuguese:
Trezentas e sessenta e cinco amostras de fígado bovino, provenientes de animais da área de influência do Laboratório Regional de Diagnóstico, da Universidade Federal de Pelotas, Rio Grande do Sul, tiveram seus níveis de cobre determinados por espectrofotometria de absorção atômica em chama de aracetileno. Desse total, 266 amostras, incluindo vacas e novilhos, foram coletadas de abatedouros e 99' eram materiais de necropsia, estocados nos anos de 1986, 1987 e primeiro semestre de 1988. A área estudada foi dividada para a realização da amostragem e análise dos resultados em 4 zonas, incluindo Litoral, Encosta do Sudeste, Serra do Sudeste e Campanha. Concentrações iguais ou inferiores a 25 partes por milhão (base seca) foram encontradas em 31,34% e 31,16% dos fígados de vacas e novilhos de abate; respectivamente, e em 36,36% de materiais de necropsia, evidenciando uma marcada depleção dos níveis hepáticos do elemento. De 9 fígados de animais necropsiados que tiveram níveis inferiores a 5 ppm (b.s.), 8 foram provenientes de bovinos que apresentaram morte súbita, sugerindo que o quadro clínico seja devido à carência de cobre. Esse fato evidência que os baixos níveis do elemento observados na área podem resultar em estados carenciais, com presença de sinais clínicos e/ou perda na produção. Os fígados de bovinos necropsiados e de vacas de abate, provenientes do Litoral e da Encosta do Sudeste, zonas essas localizadas próximas às Lagoas Mirim e dos Patos, apresentaram concentrações médias de cobre significativamente mais baixas que na Serra do Sudeste.
Abstract in English:
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of botulinum type D toxin. The double antibody sandwich ELISA was performed with reference to botulinum type D antitoxin (Statens Seruminstitut, Denmark) as in the solid phase, to sensitize plastic surface, as in the production of the immunoenzymatic conjugate. The sensitivity of ELISA was evaluated by using various dilutions of botulinum type D toxin added to liquid culture or a pool of normal bovine serum. The reactivity was, respectively, 15.6 LD50\ml and 31.2 LD50\ml for mice, with absorbance measured spectrophotometrically at 450 nm using an ELISA microreader. The specificity was demonstrated by the absence of reactivity with botulinum type A, B and E, tetanic and diphteric toxins. However, botulinum type C toxin indicated a partial cross-reactivity dueto comparable common antigenic determinants between type C and D toxins. Considering the results presented in this paper it can be concluded that the assay is particulary useful as a sensitive, fast and efficient screening method for detection of botulinum type D toxin, but it has the sarne limitations for the direct diagnosis of botulism in cattle as encountered with the bioassay in mice, because of the low concentration of circtilating toxin.
Abstract in Portuguese:
Foi desenvolvido um teste imunoenzimático (ELISA) capaz de detectar toxina botulínica tipo D. A técnica empregada foi a de Duplo Anticorpo (ELISA "Sandwich") utilizando-se antitoxinas botulínicas tipo D de referência (Statens Seruminstitut, Dinamarca) tanto na fase de sensibilização das microplacas de polivinilcloreto como para a produção do conjugado imunoenzimático (antisoro botulínico tipo D ligado à peroxidase). A sensibilidade do teste foi verificada através de titulações de toxina botulínica tipo D em fluidos de cultura e adicionada a "pool" de soro bovino normal, resultando em reatividade correspondendo respectivamente a 15,6 DL50\ml e 31,2 DL50\ml para camundongos, determinada espectrofotometricamente em leitor de microplacas. A especificidade, por sua vez, foi demonstrada pela ausência de reatividade com os diferentes tipos de toxinas botulínicas A, B e E, toxinas tetânica e diftérica. Entretanto, foi observado reatividade cruzada parcial com a toxina botulínica tipo C, devido às semelhanças antigênicas entre as toxinas tipos C e D. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que o referido teste pode ser utilizado como um método de triagem, sensível, rápido e eficaz para a detecção de toxina botulínica tipo D, embora, especificamente para o diagnóstico direto do botulismo do bovino, o método tem as mesmas limitações do bioensaio em camundongos por causa da baixa concentração de toxina circulante.
Abstract in English:
The prevalence of caseous lymphadenitis in 13 goat herds with 760 adult animals (58.4 herd/media) in the State of Rio de Janeiro was evaluated by clinical, serological and allergical diagnostic procedures. Three herds (23.0%) were free and 10 (77.0%) were infected by Corynebacterium pseudotuberculosis and the infection rate varied from 3.6% to 100% in these herds. From the 760 goats, 171 (22.5%) showed lesions and/or serological and/or allergical imune response. Separately, the clinical examination based on inspection and palpation rçvealed 93 (12.2%) cases of lymphnode abscedation and/or scares of prior ruptured lesions. The serological test made by the synergistic hemolysis inhibiton test showed antibodies in 146 (19.2%) goats with titers varying from 1:20 to 1:1256, and the allergical sensitization measured by the lymphadenization test presented positive reaction up to 1.5 mm increase in the thickness of skin-folds in 168 (22.1%) animals. The allergy test was the most sensitive and specific diagnostic procedure and proved to be a practical method to detect pré-clinical infections in the field.
Abstract in Portuguese:
Foram examinados 13 rebanhos de caprinos leiteiros no Estado do Rio de Janeiro, constituídos por 760 (média 58,4/rebanho) animais de raças puras e mestiças. Utilizou-se o exame clínico para localizar lesões suspeitas através de inspeção e palpação dos linfonodos superficiais; o exame sorológico para evidenciar antitoxinas pela técnica da inibição da hemólise sinérgica e o teste alérgico da linfadenização para avaliar a imunidade mediada por células. A pesquisa revelou que três (23,0%) rebanhos estavam indenes e 10 (77 ,0%) infectados por Corynebacterium pseudotuberculosis, variando a incidência de 3,6% a 100% de infecções nos rebanhos. Dos 760 caprinos, 171 (22,5%) apresentaram lesões e/ou reações positivas nos testes utilizados. Individualmente, o exame clínico revelou em 93 (12,2%) dos caprinos a presença de linfonodos abscedados e/ ou cicatrizes na pele de ulcerações anteriores. O exame sorológico acusou a presena de antitoxinas com título igual ou superior a 1:20 em 146 (19,2%) dos caprinos e o teste alérgico revelou reações positivas (acima de 1,5 mm) em 168 (22,1 %) dos animais. O teste alérgico, além de se mostrar mais sensível e específico para o diagnóstico da linfadenite do que a pesquisa de antitoxinas e o exame clínico, é sobretudo um método prático para a detecção de infecções precoces e confirmar suspeitas clínicas, a nível de campo.