PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Campos A.G.S.S., Santos R.A., Afonso J.A.B., Soares P.C., Fagliari J.J., Silva P.C. & Mendonça C.L. 2016. [Electrophoretic profile of the colostrum of ewes supplemented with propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy.] Perfil eletroforético do colostro de ovelhas suplementadas com propileno glicol e cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):95-100. Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Avenida Bom Pastor s/n, Boa Vista, Cx. Postal 152, Garanhuns, PE 55292-270, Brazil. E-mail: annegracevet@yahoo.com.br This study aimed to evaluate the proteinogram of the colostrum of ewes submitted to administration of propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy. Eighteen pregnant Santa Inês ewes 18 months to 5 years old were distributed by probabilistic sampling into three experimental groups, about 30 days before the expected delivery date. In group 1 (G1/n=6), daily oral doses of 30ml propylene glycol PA were administered; Group 2 (G2/n=2) received a daily oral dosage of 1mg cobalt chloride in 1% solution and 2mg of vitamin B12 intramuscularly once a week, and Group 3 (G3/n=6) was the control group. Soon after delivery 30mL of colostrum was harvested from each ewe, which were stored in appropriate containers and sent to the laboratory. After homogenization, we added to each 1000µL of colostrum 75µL solution of rennin, which was kept in a water bath at 37°C for about 20 minutes and centrifuged at 21.000G for 10 minutes in a refrigerated centrifuge. Later, the intermediate fraction, corresponding to colostrum whey, was aliquoted and kept in a -80oC ultrafreezer for subsequent determination of proteins. The determination of the total colostral protein whey was performed using a commercial reagent, observing the linearity test for colostrum. The separation of proteins was performed using the technique of electrophoresis on polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). Lactoferrin, IgA, albumin, IgG heavy chain (IgGCP), β-casein, IgG light chain (IgGCL), β-lactoglobulin and α-lactalbumin proteins were identified. There was no influence of the administration of supplements during late pregnancy on the concentration of proteins identified in the colostrum of the ewes.

• Propylene glycol cobalt vitamin B12 colostrum sheep propileno glicol cobalto vitamina B12 colostro ovinos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Campos A.G.S.S., Santos R.A., Afonso J.A.B., Soares P.C., Fagliari J.J., Silva P.C. & Mendonça C.L. 2016. [Electrophoretic profile of the colostrum of ewes supplemented with propylene glycol and cobalt associated with vitamin B12 in late pregnancy.] Perfil eletroforético do colostro de ovelhas suplementadas com propileno glicol e cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):95-100. Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Avenida Bom Pastor s/n, Boa Vista, Cx. Postal 152, Garanhuns, PE 55292-270, Brazil. E-mail: annegracevet@yahoo.com.br Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma do colostro de ovelhas submetidas a administração de propileno glicol e de cobalto associado à vitamina B12 no final da gestação. Dezoito ovelhas da raça Santa Inês, prenhas e com idade variando entre 18 meses a cinco anos foram distribuídas, por amostragem probabilística em três grupos experimentais, aproximadamente 30 dias antes da data prevista para o parto. No Grupo 1 (G1/n=6) foram administrados 30mL de propileno glicol P.A. via oral diariamente; no Grupo 2 (G2/n=6) foi administrado 1mg de cloreto de cobalto em solução a 1% via oral diariamente e 2mg de vitamina B12, via intramuscular semanalmente e no Grupo 3 (G3/n=6): grupo controle. Logo após o parto procedeu-se a colheita de 30mL de colostro, que foram acondicionados em recipientes apropriados e encaminhados ao laboratório. Após homogeneização, adicionou-se a cada 1.000µL de colostro, 75µL de solução de renina, que foi mantido em banho-maria a 37ºC por aproximadamente 20 minutos e centrifugado a 21.000G durante dez minutos em centrífuga refrigerada. Posteriormente, a fração intermediária, correspondente ao soro do colostro, foi aliquotada e mantida em ultrafreezer a -80oC para posterior determinação das proteínas. A determinação da proteína total do soro colostral foi realizada empregando-se reagente comercial. A separação das proteínas foi realizada utilizando-se a técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram identificadas as proteínas IgA, lactoferrina, albumina, IgG de cadeia pesada (IgGCP), β-caseína, IgG de cadeia leve (IgGCL), β-lactoglobulina and α-lactoalbumina, não havendo influência da administração dos suplementos na fase final da gestação sobre as concentrações protéicas do colostro.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Valente F.L., Ferreira A.P.B.R., Costa L.D., Louzada M.J.Q., Patarroyo J.H. & Vargas M.I. 2016. Effects of chronic mild stress on parameters of bone assessment in adult male and female rats. [Efeito do estresse moderado crônico sobre parâmetros de avaliação óssea em ratos adultos machos e fêmeas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):106-112. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E-mail: bebel@ufv.br Osteoporosis is a multifactorial disease of high prevalence and has great impact on quality of life, because the effects on bone structure increase the risk of fractures, what may be very debilitating. Based on the observation that patients with depression have lower bone mineral density than healthy individuals, many studies have indicated that stress could be an aggravating factor for bone loss. This study evaluates the effect of a protocol of chronic mild stress (CMS) on parameters of bone assessment in male and female rats. Five 5-monh-old rats of each sex underwent a schedule of stressor application for 28 days. Stressors included cold, heat, restraint, cage tilt, isolation, overnight illumination, and water and food deprivation. Five rats of each sex were kept under minimum intervention as control group. The animals were weighed at beginning and end of the period, and after euthanasia had their bones harvested. Femur, tibia and lumbar vertebrae were analyzed by bone densitometry. Biomechanical tests were performed in femoral head and diaphysis. Trabecular bone volume was obtained from histomorphometric analysis of femoral head and vertebral body, as well as of femoral midshaft cross-sectional measures. Not all parameters analyzed showed effect of CMS. However, tibial and L4 vertebral bone mineral density and cross-sectional cortical/medullar ratio of femoral shaft were lower in female rats submitted to the CMS protocol. Among male rats, the differences were significant for femoral trabecular bone volume and maximum load obtained by biomechanical test. Thus, it could be confirmed that CMS can affect the balance of bone homeostasis in rats, what may contribute to the establishment of osteopenia or osteoporosis.

• Stress osteoporosis bone densitometry bone histomorphometry

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Valente F.L., Ferreira A.P.B.R., Costa L.D., Louzada M.J.Q., Patarroyo J.H. & Vargas M.I. 2016. Effects of chronic mild stress on parameters of bone assessment in adult male and female rats. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):106-112. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Viçosa, MG 36570-900, Brazil. E-mail: bebel@ufv.br A osteoporose é uma doença multifatorial, de alta prevalência e que tem um grande impacto na qualidade de vida, principalmente porque os efeitos sobre a estrutura do osso aumentam o risco de fraturas, que podem ser muito debilitantes. Com base na observação de que pacientes com depressão têm menor densidade mineral óssea que indivíduos saudáveis​​, muitos estudos têm indicado que o estresse pode ser um fator agravante para a perda óssea. Este estudo avalia o efeito de um protocolo de estresse moderado crônico (EMC) em parâmetros de avaliação óssea em ratos machos e fêmeas. Cinco animais de cada sexo, com cinco meses de idade, foram submetidos a um cronograma de aplicação de estressores durante 28 dias. Os estressores incluídos foram: frio, calor, contenção, inclinação da gaiola, isolamento, iluminação durante a noite e privação de água e ração. Cinco animais de cada sexo foram mantidos com um mínimo de intervenção como grupo controle. Os animais foram pesador no início e no final do período, e após eutanásia tiveram seus ossos coletados. Fêmur, tíbia e vértebra lombar foram analisados por densitometria óssea. Testes biomecânicos foram realizados na cabeça e na diáfise do fêmur. Volume trabecular ósseo foi obtido a partir de análise histomorfométricas da cabeça do fêmur e do corpo vertebral, bem como medidas da seção transversal diáfise femoral. Nem todos os parâmetros avaliados sofreram efeito do protocolo de EMC. No entanto, a densidade mineral óssea da tíbia e da vértebra L4 e a razão osso cortical/medula da seção transversal da diáfise femoral foram menores nas fêmeas submetidas ao protocolo. Entre os ratos machos, as diferenças foram significativas no volume trabecular ósseo da cabeça femoral e na carga máxima obtida no teste biomecânico. Assim, confirma-se que o protocolo de EMC pode afetar o equilíbrio da homeostase óssea em ratos, o que pode contribuir para o estabelecimento de osteopenia ou osteoporose.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Song X., Cao M., Yin Z., Jia R., Zou Y., Li L., Yue G., Liang X., Yin L. & He C. 2016. Effects of polysaccharide from Ophiopogon japonicus on immune response to Newcastle disease vaccine in chicken. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1155-1159. Natural Medicine Research Center, College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, 611130, China. E-mail: yinzhongq@163.com In order to investigate the immune enhancement effects of Ophiopogon japonicus polysaccharide Ophiopogon japonicus (OJPS) on Newcastle disease (ND) live vaccine, chickens vaccinated against ND live vaccine was orally administered with the OJPS at high, medium and low concentrations respectively. In negative control group, chickens were given orally equal volume of physiological saline. On day 14, 21 and 28, the serum antibody titer, erythrocyte-C3b receptor rosette rate (E-C3bRR), erythrocyte-C3b immune complex rosette rate (E-ICRR) and peripheral lymphocyte proliferation were measured. The results showed that at most time points, the antibody titer, peripheral lymphocyte proliferation, E-C3bRR and elimination rate of immune complex of three OJPS administrating groups were significantly higher (P<0.05) than those in negative control group. It indicated that OJPS could significantly improve the immune efficacy of Newcastle disease live vaccine, Ophiopogon japonicus polysaccharide possessed synergistical immunoenhancement.

• Ophiopogon japonicus Newcastle disease antibody titer lymphocyte proliferation immunity vaccine

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Song X., Cao M., Yin Z., Jia R., Zou Y., Li L., Yue G., Liang X., Yin L. & He C. 2016. Effects of polysaccharide from Ophiopogon japonicus on immune response to Newcastle disease vaccine in chicken. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1155-1159. Natural Medicine Research Center, College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Chengdu, 611130, China. E-mail: yinzhongq@163.com In order to investigate the immune enhancement effects of Ophiopogon japonicus polysaccharide Ophiopogon japonicus (OJPS) on Newcastle disease (ND) live vaccine, chickens vaccinated against ND live vaccine was orally administered with the OJPS at high, medium and low concentrations respectively. In negative control group, chickens were given orally equal volume of physiological saline. On day 14, 21 and 28, the serum antibody titer, erythrocyte-C3b receptor rosette rate (E-C3bRR), erythrocyte-C3b immune complex rosette rate (E-ICRR) and peripheral lymphocyte proliferation were measured. The results showed that at most time points, the antibody titer, peripheral lymphocyte proliferation, E-C3bRR and elimination rate of immune complex of three OJPS administrating groups were significantly higher (P<0.05) than those in negative control group. It indicated that OJPS could significantly improve the immune efficacy of Newcastle disease live vaccine, Ophiopogon japonicus polysaccharide possessed synergistical immunoenhancement.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Guimarães F.F., Joaquim S.F., Manzi M.P., Silva R.C., Bruder-Nascimento A.C.M.O., Costa E.O. & Langoni H. 2016. Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1160-1164. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br In addition to Staphylococcus aureus nowadays other coagulase-positive staphylococci (CoPS) and coagulase-negative staphylococci (CoNS), earlier considered of minor importance, are now accepted as relevant pathogens for humans and animals. The involvement of these microorganisms in bovine mastitis etiology and the possibility their transmission through milk to humans justify the requirement of developing reliable methods for identification of the most frequent species among them. The purpose of this study was to compare the phenotypic techniques with the genotypic method carried out by sequencing of the rpoB gene in identification of several species of the genus Staphylococcus isolated from bovine mastitis. A total of 300 staphylococci isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied by phenotypic and genotypic techniques, respectively: 150 CoPS and 150 CoNS strains. A total of 18 CoNS different species and 4 CoPS species were identified. Among the CoNS the following species were recognized: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auricularis, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis, 1(0.7%) S. capitis. And among the 150 CoPS were identified respectively: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%) S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considering the 150 CoNS isolates, the identifications performed by phenotypic and genotypic tests presented 96.7% of concordance, kappa coefficient of agreement = 0.933, SE (standard error) of kappa=0.021 (95% confidence interval: 0.893 to 0.974), Pearson’s correlation coefficient (r) = 0.9977, (confidence interval 95%: 0.9938 a 0.9992) and in relation to 150 CPS isolates it was detected an agreement of 98.7%, kappa = 0.960, SE of kappa = 0.016, (95% confidence interval: 0.929 to 0.992) Pearson’s correlation coefficient (r) = 0.9994 (95% confidence interval: 0.9681 to 1.0000). The verified agreement strength between the identification methods can be considered as excellent. These results assure that according to laboratory resources any of them will be suitable to perform the staphylococci identification.

• Phenotype genotype Staphylococcus spp. mastitis fenotipo genótipo mastite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Guimarães F.F., Joaquim S.F., Manzi M.P., Silva R.C., Bruder-Nascimento A.C.M.O., Costa E.O. & Langoni H. 2016. Comparison phenotypic and genotypic identification of Staphylococcus species isolated from bovine mastitis. [Comparação da identificação fenotípica e genotípica de espécies do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1160-1164. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br Além de Staphylococcus aureus atualmente outros estafilococos coagulase positiva (SCP) e estafilococos coagulase-negativos (SCN), anteriormente considerados de menor relevância, são reconhecidos como importantes patógenos para humanos e animais. O envolvimento desses micro-organismos na etiologia da mastite bovina e a possibilidade da sua transmissão através do leite aos humanos justifica a utilização de métodos confiáveis para a identificação das espécies mais frequentes. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas fenotípicas com o método genotípico realizada por sequenciamento do gene rpoB na identificação de espécies do gênero Staphylococcus spp. isolados de mastite bovina. Um total de 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina em diferentes rebanhos leiteiros brasileiros foram estudados por técnicas fenotípicas e genotípicas, respectivamente: 150 linhagens de SCP e 150 linhagens de SCN. Foram identificados um total de 18 espécies de SCN e 4 espécies SCP. Entre os SCN as seguintes espécies identificadas: 48 (32%) Staphylococcus warneri, 22 (15%) S. epidermidis, 20 (13%) S. hyicus, 10 (7%) S. xylosus, 7 (5%) S. haemolyticus, 6 (4%) S. simulans, 6 (4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6 (4%) S. hominis, 5 (3%) S. pasteuri, 4 (2,7%) S. cohnii, 3 (2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3 (2%) S. chromogenes, 3 (2%) S. sciuri, 2 (1%) S. saccharolyticus, 2 (1%) S. lugdunensi, 1 (0,7%) S. auricularis, 1 (70 %) S. saprophyticus subsp. bovis, 1 (0,7%) S. capitis. E entre as 150 SCP foram identificados, 105 (70%) S. aureus, 21 (14%), S. hyicus, 19 (13%) S. intermedius e 5 (3%) S. schleiferi subsp coagulans. Considerando-se os 150 SCN isolados, as identificações realizadas por testes fenotípicos e genotípicos apresentaram 96,7% de concordância, coeficiente de concordância kappa = 0,933, SE (erro padrão) de kappa = 0,021 (95% intervalo de confiança: 0,893-0,974), coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9977, (intervalo de confiança de 95%: 0,9938 a 0,9992) e em relação a 150 SCP isolados foi observado uma concordância de 98,7%, kappa = 0,960, sE de kappa = 0,016, (95% de intervalo de confiança: 0,929 a 0,992) coeficiente de correlação de Pearson (r) = 0,9994 (95% intervalo de confiança: 0,9681-1,0000). A correlação entre os métodos de identificação pode ser considerada como excelente. Esses resultados demonstraram que de acordo com os recursos disponíveis no laboratório, poderia ser utilizada qualquer uma das metodologias.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cruz T.F., Kanashiro T.M., Castro A.M.M.G., Baldin C.M., Richtzenhain L.J. & Araujo Jr J.P. 2016. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1171-1177. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jpessoa@ibb.unesp.br, tfcruz@yahoo.com.br Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p<0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.

• Immunosorbent assay centrifugation porcine circovirus type 2 antibody

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cruz T.F., Kanashiro T.M., Castro A.M.M.G., Baldin C.M., Richtzenhain L.J. & Araujo Jr J.P. 2016. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. [Sandwich ELISA com duplo anticorpo baseado no circovirus suíno tipo 2 (PCV2) produzido em cultivo celular para detecção de anticorpos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1171-1177. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jpessoa@ibb.unesp.br, tfcruz@yahoo.com.br Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Monteiro K., Allendorf S.D., Vicente A.F., Appolinário C.M., Peres M.G., Cortez A., Heinemann M.B. & Megid J. 2016. Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1181-1185. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br Since the first isolation of canine parvovirus type 2 (CPV-2) in late 70’s new virus types as CPV-2a and CPV-2b have been emerged and becoming prevalent in natural canine population and more recently, a third subtype was identified , CPV-2c. The main purpose of this study was to detect and characterize canine parvovirus currently present in Central-West region of São Paulo state, in Brazil. Fecal samples were collected of vaccinated and non-vaccinated dogs, clinically suspected of having CPV infection brought to the Infectious Diseases Service, Veterinary Hospital of FMVZ-UNESP. All samples (n=30) were screening for canine parvovirus through hemagglutination test and those resulting as positive (n=20) were submitted to PCR and the products were subsequently sequenced for subtype characterization. Results were tested for association with age, hematological values, viral hemagglutination titers in the feces, vaccination status and survival. Leukopenia was found in all animals, death occurred in 30% of unvaccinated dogs and in 42% of vaccinated ones. In a total of 20 positive sequenced samples, 18 were classified as CPV-2b, one as CPV-2c, and one as CPV-2a, being CPV2a and CPV2c detected in unvaccinated puppies. Compared to the reference samples amino acid change at position 426 in those circling virus was identified. The study results demonstrate the predominance of CPV-2b and the presence of CPV-2a and CPV-2c in naturally infected, vaccinated and unvaccinated dogs in in São Paulo region.

• anine parvovirus parvovirus canino

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Monteiro K., Allendorf S.D., Vicente A.F., Appolinário C.M., Peres M.G., Cortez A., Heinemann M.B. & Megid J. 2016. Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil. [Caracterização viral e aspectos clínicos de parvovirose em cães naturalmente infectados no Estado de São Paulo.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1181-1185. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br Desde o primeiro isolamento do parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) no final dos anos 70 novos subtipos virais como CPV-2a e CPV-2b surgiram e foram se tornando prevalentes na população canina; posteriormente um terceiro subtipo foi identificado, CPV- 2-C. O principal objetivo deste estudo foi detectar e caracterizar os subtipos de parvovírus canino atualmente presente na região Centro-Oeste do Estado de São Paulo-Brasil. Amostras de fezes foram coletadas de cães vacinados e não vacinados, atendidos no Serviço de Enfermidades Infecciosas dos Animais, Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP, com suspeita clínica parvovirose . Todas as amostras (n = 30) foram submetidas teste de hemaglutinação para parvovirus canino e as positivas (n = 20) submetidas a PCR; os produtos amplificados foram subsequentemente sequenciados para caracterização do subtipo viral. Os resultados foram associados com a idade, os valores hematológicos, os títulos de hemaglutinação viral nas fezes, estado de vacinação e sobrevivência. A leucopenia foi encontrada em todos os animais; Obito foi observado em 30% dos cães não vacinados e 42% dos vacinados. Em um total de 20 amostras positivas sequenciadas, 18 foram classificadas como CPV-2b, uma como CPV-2c, e uma como CPV-2a. CPV 2a e CPV2c foram detectados em filhotes não vacinados. Em comparação com a amostra de referência foi evidenciada uma mudança de aminoácido na posição 426 nas amostras virais circulantes. Os resultados do estudo demonstram a predominância de CPV-2b e a presença de CPV-2a e CPV-2c em cães naturalmente infectados, vacinados e não vacinados na região de São Paulo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Fonseca L.A., Maia N.L., Girardi F.M.Carvalho Filho W.P., Pimentel F.G. & Braga F.R. 2016. [Evaluation of serum biochemical parameters in Amazon turtles (Podocnemis expansa) hatchlings kept in captivity.] Avaliação de parâmetros bioquímicos séricos em Tartarugas-da-Amazônia (Podocnemis expansa) mantidas em cativeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1186-1189. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: leandroabreu@ufv.br Blood samples from the giant river turtle kept in captivity were analyzed in order to evaluate the serum biochemical constituents and relate to what has been reported by other researchers, beyond the purpose of generating further information, given the paucity of data involving this species. The turtle eggs were from the state of Tocantins and were obtained from direct sampling in their natural habitat. After being collected the eggs were kept in incubators and then the puppies were kept in tanks. Samples were collected after chemical restraint of these animals by intracardiac puncture or cardiocentesis. The samples were centrifuged to obtain serum. Biochemical analyzes were processed by kinetic and colorimetric methods, as described by the manufacturer, and the values obtained were: calcium 7.0+1.9mg/dL, phosphorus 2.8±1.2mg/dL, uric acid 1.8±0.8mg/dL, BUN 10.4+3.9mg/dL, alanine aminotransferase (AST) 75.5+33.6 IU/L, total protein 1.9±0.8g/dL, triglycerides 22.9+9.8mg/dL and cholesterol 45.3+19.7mg/dL. It was observed that the values of the evaluated blood components are similar to those found by other researchers in serum biochemical studies with samples of Podocnemis expansa. During this study we observed the paucity of published data on blood parameters of Podocnemis genus, especially P. expansa species, which confirmed the high relevance of the development of further research involving this topic.

• Podocnemis biochemistry giant river turtle bioquímica sérica Tartaruga-da-Amazônia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Fonseca L.A., Maia N.L., Girardi F.M.Carvalho Filho W.P., Pimentel F.G. & Braga F.R. 2016. [Evaluation of serum biochemical parameters in Amazon turtles (Podocnemis expansa) hatchlings kept in captivity.] Avaliação de parâmetros bioquímicos séricos em Tartarugas-da-Amazônia (Podocnemis expansa) mantidas em cativeiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1186-1189. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Peter Henry Rolfs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: leandroabreu@ufv.br Amostras de sangue de Tartaruga-da-Amazônia mantidas em cativeiro foram analisadas com o propósito de avaliar os constituintes bioquímicos séricos e de relacionar ao que já foi relatado por outros pesquisadores, além de gerar mais informações, tendo em vista a escassez de dados envolvendo a espécie estudada. Foram utilizados 35 animais, com idade entre 3 e 7 meses, os quais foram contidos fisicamente para coleta de sangue em tubo sem anticoagulante. As análises bioquímicas foram processadas através de métodos cinéticos (enzimas) e colorimétricos (demais análises), e os valores médios obtidos foram: cálcio 7,0+1,9mg/dL, fóforo 2,8+1,2mg/dL, ácido úrico 1,8+0,8mg/dL, uréia 10,4+3,9mg/dL, alanina aminotransferase (AST) 75,5+33,6 UI/L, proteína total 1,9+0,8g/dL, triglicerídeos 22,9+9,8mg/dL e colesterol 45,3+19,7mg/dL. Observou-se que os valores dos componentes séricos avaliados assemelham-se aos que foram encontrados por outros pesquisadores em estudos bioquímicos séricos com Podocnemis expansa e outras tartarugas de água doce. Importante ressaltar que, no decorrer deste estudo observou-se a escassez de dados publicados sobre parâmetros sanguíneos de tartarugas do gênero Podocnemis, especialmente a espécie Podocnemis expansa, o que corroborou a alta relevância do desenvolvimento de mais pesquisas que envolvam a questão.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Justino R.C., Cardoso G.S., Trautwein L.G.C., Alves R.I.A., Flaiban K.K.M.C. & Martins M.I.M. 2016. Evaluation of physiological parameters of dogs submitted to uterine lymphatic mapping using patent blue V dye for anaphylaxis detection. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1209-1214. Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia, Londrina, PR 86061-900, Brazil. E-mail: imartins@uel.br Lymphatic mapping has been performed in humans and dogs. Although several cases of anaphylaxis have been reported in humans, there are no such reports in dogs. The objective of this study was to identify the occurrence of adverse reactions to patent blue V dye in bitches undergoing uterine lymphatic mapping procedures using cardiovascular and hematological evaluations. The experiment was performed in 14 mongrel bitches without any reproductive disease, randomly assigned into two equal groups (PBV- uterine lynphatic mapping and OHE; Control - OHE only). The animals were submitted to pre- and postoperative hematological and serum biochemistry exams (7 days). The anesthetic protocol was: sedation (morphine and acepromazine), induction (propofol), maintenance (isoflurane), transoperative analgesia (fentanyl). Systolic blood pressure was monitored throughout the procedure and arterial blood gas analysis was performed immediate pre and postoperatively. For lymphatic mapping was injected patent blue V in the uterine wall, 10 minutes before OEH. Comparisons between the pre- and postoperative parameters within the same animal were performed using the Wilcoxon-Mann-Whitney test. To compare the values between control and PBV group was obtaining the difference between the pre and post of each group, subjected to the Mann-Whitney test (significance of 5%). Differences were observed (P<0.05) between the pre- and postoperative evaluations in the PBV (total protein and the albumin serum), in both groups (arterial partial pressure of oxygen) and in the Control (arterial oxygen saturation). There were no signs of adverse reactions to the patent blue V dye in the healthy bitches submitted to lymphatic uterine mapping.

• Uterine lymphatic mapping blue V dye anaphylaxis hypersensitivity mapeamento linfático uterino azul patente V anafilaxia hipersensibilidade

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Justino R.C., Cardoso G.S., Trautwein L.G.C., Alves R.I.A., Flaiban K.K.M.C. & Martins M.I.M. 2016. Evaluation of physiological parameters of dogs submitted to uterine lymphatic mapping using patent blue V dye for anaphylaxis detection. [Avaliação de parâmetros fisiológicos de cães submetidos ao mapeamento linfático uterino usando o corante azul patente V para a detecção de anafilaxia.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1209-1214. Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia, Londrina, PR 86061-900, Brazil. E-mail: imartins@uel.br O mapeamento linfático tem sido realizado em humanos e cães. Embora inúmeros casos de anafilaxia já tenham sido relatados em humanos, não existem tais relatos em cães. O objetivo deste estudo foi identificar a ocorrência de reações adversas ao corante azul patente V em cadelas submetidas ao mapeamento linfático uterino, usando avaliações cardiovasculares e hematológicas. O experimento foi realizado em 14 cadelas mestiças, divididas igualmente em dois grupos (PBV- mapeamento linfático uterino e OEH; Controle - apenas OEH). Os animais foram submetidos a exames hematológicos e bioquímicos séricos no pré e pós-operatório (7 dias). O protocolo anestésico foi: sedação (morfina e acepromazina), indução (propofol), manutenção (isoflurano), analgesia trans-operatória (fentanil). A pressão arterial sistólica foi monitorada durante todo o procedimento e hemogasometria arterial no pré e pós-operatório imediato. Para o mapeamento linfático foi injetado azul patente V na parede uterina, 10 minutos antes de realizar a OEH. Comparações entre os valores do pré e pós-operatório do mesmo animal foram realizados pelo teste Wilcoxon-Mann-Whitney. Para a comparação dos valores entre Controle e PBV foi realizado a obtenção da diferença entre os valores pré e pós de cada grupo, submetidas ao teste de Mann-Whitney (significância de 5%). Diferenças foram observadas (p<0,05) entre as avaliações pré e pós-operatórias no PBV (proteína total e albumina), ambos os grupos (pressão parcial de oxigênio arterial) e no Controle (saturação de oxigênio arterial). Não houve sinais de reação adversa ao corante azul patente V em cadelas saudáveis submetidas ao mapeamento linfático uterino.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Weiss M., Anziliero D., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2016. Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1067-1074. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gE&#8710;) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gE&#916; or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or MontanideTM (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gE&#916; vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gE&#8710; and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gE&#8710; is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.

• BoHV-1 vaccine vacinas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Weiss M., Anziliero D., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2016. Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain. [Atenuação e imunogenicidade de uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1067-1074. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gE&#8710;) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou MontanideTM (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gE&#916;, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gE&#916;) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Marques A.L.A., Maia L.A., Aguiar G.M.N., Weber M.N., Simões S.V.D. & Azevedo S.S. 2016. [Detection of ‘HoBi’-like (BVDV-3) vírus in a cow in the semiarid of Paraíba, Northeastern Brazil.] Detecção do virus ‘HoBi’-like (BVDV-3) em bovino no semiárido da Paraíba. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1081-1086. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Bairro Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio@vps.fmvz.usp.br The aim of this study was to describe the clinical and anatomopathological aspects, and the viral identification of a case of ‘Hobi’-like (BVDV-3) vírus infection in cattle from the semiarid of Paraiba State, Northeastern Brazil. A female bovine, three months old, was sent to the UFCG’s Veterinary Hospital presenting salivation, difficulty of ceiling seizure, lack of appetite, dark feces and in small amounts. Due to worsening of symptoms it was decided to in extremis euthanasia, followed by the necropsy and collection of material for histopathology. Histologically, in the mucous membranes of the digestive tract there were edema, ballooning degeneration, necrosis and inflammatory infiltrate, which was observed on the dorsal surface of the tongue and in its deepest epithelium. The immunohistochemical of skin biopsies of the extremity of the ear (ear notches) showed positive antigenic marking and by RT-PCR it was possible to detect viral RNA of BVDV in the serum, whose cytopathic effect in epithelial cells of bovine kidney lineage “Madin Darby bovine kidney” (MDBK)was not observed. The sequencing of the 5’NCR gene showed that the virus isolated was more related to ‘Hobi’-like (BVDV-3). After confirming the diagnosis serum samples were collected from 23 animals for serology by indirect ELISA, and a seropositivity of 69.6% (16/23) was found. The identification of this new case of ‘Hobi’-like infection in Paraiba reaffirms the need for regular BVDV monitoring in the region to early detection of infection in the herds and adoption of effective preventive and control measures.

• BVDV-3 pestivirus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Marques A.L.A., Maia L.A., Aguiar G.M.N., Weber M.N., Simões S.V.D. & Azevedo S.S. 2016. [Detection of ‘HoBi’-like (BVDV-3) vírus in a cow in the semiarid of Paraíba, Northeastern Brazil.] Detecção do virus ‘HoBi’-like (BVDV-3) em bovino no semiárido da Paraíba. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1081-1086. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Bairro Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio@vps.fmvz.usp.br Objetivou-se descrever os aspectos clínicos e anatomopatológicos, e a identificação viral de um caso de infecção pelo vírus ‘Hobi’-like (BVDV-3) em bovino do semiárido paraibano, Nordeste do Brasil. Um bovino, fêmea, três meses de idade, foi levado ao Hospital Veterinário da UFCG apresentando salivação, dificuldade de apreensão do teto, falta de apetite, fezes escuras e em pouca quantidade. Diante da piora do quadro clínico optou-se por sua eutanásia in extremis, seguida da realização da necropsia e coleta de material para histopatologia. Histologicamente, nas mucosas do trato digestivo, havia edema, degeneração balonosa, necrose e infiltrado inflamatório, que foi observado na face dorsal da língua e no seu epitélio mais profundo. A imunohistoquímica de amostras de extremidade de pavilhão auricular demonstrou marcação antigênica positiva e pela RT-PCR foi possível detectar RNA viral do BVDV no soro sanguíneo, cujo efeito citopático em células epiteliais de rim bovino da linhagem “Madin Darby bovine kidney” (MDBK) não foi observado. O sequenciamento do gene 5’NCR demonstrou que o vírus isolado estaria mais relacionado ao ‘Hobi’-like (BVDV-3). Após a confirmação do diagnóstico foram coletadas amostras de soro dos 23 animais do rebanho para sorologia por ELISA indireto, sendo constatada 69,6% (16/23) de soropositividade. A identificação deste novo caso de infecção por ‘Hobi’-like na Paraíba reafirma a necessidade de um monitoramento regular para BVDV na região para detecção precoce da infecção dos rebanhos e adoção de medidas eficazes de prevenção e controle.