PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cruz T.F., Kanashiro T.M., Castro A.M.M.G., Baldin C.M., Richtzenhain L.J. & Araujo Jr J.P. 2016. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1171-1177. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jpessoa@ibb.unesp.br, tfcruz@yahoo.com.br Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p<0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.

• Immunosorbent assay centrifugation porcine circovirus type 2 antibody

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cruz T.F., Kanashiro T.M., Castro A.M.M.G., Baldin C.M., Richtzenhain L.J. & Araujo Jr J.P. 2016. A double-antibody sandwich ELISA based on the porcine circovirus type 2 (PCV2) propagated in cell culture for antibody detection. [Sandwich ELISA com duplo anticorpo baseado no circovirus suíno tipo 2 (PCV2) produzido em cultivo celular para detecção de anticorpos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1171-1177. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jpessoa@ibb.unesp.br, tfcruz@yahoo.com.br Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Monteiro K., Allendorf S.D., Vicente A.F., Appolinário C.M., Peres M.G., Cortez A., Heinemann M.B. & Megid J. 2016. Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1181-1185. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br Since the first isolation of canine parvovirus type 2 (CPV-2) in late 70’s new virus types as CPV-2a and CPV-2b have been emerged and becoming prevalent in natural canine population and more recently, a third subtype was identified , CPV-2c. The main purpose of this study was to detect and characterize canine parvovirus currently present in Central-West region of São Paulo state, in Brazil. Fecal samples were collected of vaccinated and non-vaccinated dogs, clinically suspected of having CPV infection brought to the Infectious Diseases Service, Veterinary Hospital of FMVZ-UNESP. All samples (n=30) were screening for canine parvovirus through hemagglutination test and those resulting as positive (n=20) were submitted to PCR and the products were subsequently sequenced for subtype characterization. Results were tested for association with age, hematological values, viral hemagglutination titers in the feces, vaccination status and survival. Leukopenia was found in all animals, death occurred in 30% of unvaccinated dogs and in 42% of vaccinated ones. In a total of 20 positive sequenced samples, 18 were classified as CPV-2b, one as CPV-2c, and one as CPV-2a, being CPV2a and CPV2c detected in unvaccinated puppies. Compared to the reference samples amino acid change at position 426 in those circling virus was identified. The study results demonstrate the predominance of CPV-2b and the presence of CPV-2a and CPV-2c in naturally infected, vaccinated and unvaccinated dogs in in São Paulo region.

• anine parvovirus parvovirus canino

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Monteiro K., Allendorf S.D., Vicente A.F., Appolinário C.M., Peres M.G., Cortez A., Heinemann M.B. & Megid J. 2016. Viral type characterization and clinical aspects of canine parvovirus in naturally infected dogs in São Paulo State, Brazil. [Caracterização viral e aspectos clínicos de parvovirose em cães naturalmente infectados no Estado de São Paulo.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1181-1185. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br Desde o primeiro isolamento do parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) no final dos anos 70 novos subtipos virais como CPV-2a e CPV-2b surgiram e foram se tornando prevalentes na população canina; posteriormente um terceiro subtipo foi identificado, CPV- 2-C. O principal objetivo deste estudo foi detectar e caracterizar os subtipos de parvovírus canino atualmente presente na região Centro-Oeste do Estado de São Paulo-Brasil. Amostras de fezes foram coletadas de cães vacinados e não vacinados, atendidos no Serviço de Enfermidades Infecciosas dos Animais, Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP, com suspeita clínica parvovirose . Todas as amostras (n = 30) foram submetidas teste de hemaglutinação para parvovirus canino e as positivas (n = 20) submetidas a PCR; os produtos amplificados foram subsequentemente sequenciados para caracterização do subtipo viral. Os resultados foram associados com a idade, os valores hematológicos, os títulos de hemaglutinação viral nas fezes, estado de vacinação e sobrevivência. A leucopenia foi encontrada em todos os animais; Obito foi observado em 30% dos cães não vacinados e 42% dos vacinados. Em um total de 20 amostras positivas sequenciadas, 18 foram classificadas como CPV-2b, uma como CPV-2c, e uma como CPV-2a. CPV 2a e CPV2c foram detectados em filhotes não vacinados. Em comparação com a amostra de referência foi evidenciada uma mudança de aminoácido na posição 426 nas amostras virais circulantes. Os resultados do estudo demonstram a predominância de CPV-2b e a presença de CPV-2a e CPV-2c em cães naturalmente infectados, vacinados e não vacinados na região de São Paulo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Sanches C.C., Rosinha G.M.S., Galvão C.E., Feijó G.L.D., Araújo F.R. & Soares C.O. 2016. Polymorphisms in the Prion Protein Gene of cattle breeds from Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1059-1066. Programa de Doutorado em Ciência Animal, Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Cidade Universitária, Cx. Postal 549, Campo Grande, MS 79070-500, Brazil. E-mail: cleber.soares@embrapa.br One of the alterations that occur in the PRNP gene in bovines is the insertion/deletion (indel) of base sequences in specific regions, such as indels of 12-base pairs (bp) in intron 1 and of 23- bp in the promoter region. The deletion allele of 23 bp is associated with susceptibility to bovine spongiform encephalopathy (BSE) as well as the presence of the deletion allele of 12 bp. In the present study, the variability of nucleotides in the promoter region and intron 1 of the PRNP gene was genotyped for the Angus, Canchim, Nellore and Simmental bovine breeds to identify the genotype profiles of resistance and/or susceptibility to BSE in each animal. Genomic DNA was extracted for amplification of the target regions of the PRNP gene using polymerase chain reaction (PCR) and specific primers. The PCR products were submitted to electrophoresis in agarose gel 3% and sequencing for genotyping. With the exception of the Angus breed, most breeds exhibited a higher frequency of deletion alleles for 12 bp and 23 bp in comparison to their respective insertion alleles for both regions. These results represent an important contribution to understanding the formation process of the Brazilian herd in relation to bovine PRNP gene polymorphisms.

• Spongiform encephalopathy prion encefalopatia espongiforme bovina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Sanches C.C., Rosinha G.M.S., Galvão C.E., Feijó G.L.D., Araújo F.R. & Soares C.O. 2016. Polymorphisms in the Prion Protein Gene of cattle breeds from Brazil. [Polimorfismos no gene da proteína priônica em bovinos no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1059-1066. Programa de Doutorado em Ciência Animal, Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Cidade Universitária, Cx. Postal 549, Campo Grande, MS 79070-500, Brazil. E-mail: cleber.soares@embrapa.br Uma das mudanças que ocorrem no gene PRNP em bovinos é a inserção e/ou deleção (indels) de sequências de bases, em determinadas regiões como, por exemplo, as indels de 12 pares de bases (pb) no íntron 1 e 23pb na região promotora. O alelo de deleção de 23pb está relacionado com a suscetibilidade à Encefalopatia Espongiforme Bovina (EEB), assim como a presença do alelo de deleção de 12pb. Neste estudo foi genotipada a variabilidade de nucleotídeos da região promotora e íntron 1 do gene PRNP em bovinos das raças Angus, Canchim, Nelore e Simental, para identificar os perfis genotípicos de resistência e/ou suscetibilidade à EEB de cada animal. Foi realizada a extração de DNA genômico para amplificação das regiões alvo do gene PRNP, por meio da reação em cadeia de polimerase (PCR) utilizando-se primers específicos. Os produtos da PCR foram submetidos à eletroforese em gel de agarose a 3%, e sequenciamento para a realização da genotipagem. Com exceção da raça Angus, a maioria das raças apresentaram maiores frequências do alelo de deleção tanto para 12pb como 23pb, em comparação com seus respectivos alelos de inserção, para as duas regiões. Esses resultados abrem caminhos para o conhecimento de como o rebanho brasileiro está sendo formado com relação aos polimorfismos do gene PRNP bovino.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Weiss M., Anziliero D., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2016. Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1067-1074. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com A glycoprotein E-deleted Brazilian bovine herpesvirus 1 (BoHV-1gE&#8710;) was tested regarding to safety and immunogenicity. Intramuscular inoculation of young calves with a high virus dose did not result in clinical signs or virus shedding during acute infection or after dexamethasone administration. Calves vaccinated once IM (group I) or subcutaneously (group II) with live BoHV-1gE&#916; or twice with inactivated virus plus aluminum hydroxide (group IV) or MontanideTM (group V) developed VN titers of 2 to 8 (GMT:2); 2 to 4 (GMT:1.65); 2 to 16 (GMT:2.45) and 2 to 128 (GMT:3.9), respectively. All BoHV-1gE&#916; vaccinated calves remained negative in an anti-gE ELISA. Lastly, six young calves vaccinated with live BoHV-1gE&#8710; and subsequently challenged with a virulent BoHV-1 strain shed less virus and developed only mild and transient nasal signs comparing to unvaccinated calves. Thus, the recombinant BoHV-1gE&#8710; is safe and immunogenic for calves and allows for serological differentiation by a gE-ELISA test.

• BoHV-1 vaccine vacinas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Weiss M., Anziliero D., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2016. Safety and immunogenicity of a glycoprotein E gene-deleted bovine herpesvirus 1 strain as a candidate vaccine strain. [Atenuação e imunogenicidade de uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1067-1074. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Um isolado brasileiro de herpesvírus bovino tipo 1, contendo uma deleção na glicoproteína E (gE - BoHV-1gE&#8710;) foi submetido a testes para avaliar a sua segurança e imunogenicidade em bovinos. Bezerros foram submetidos à inoculação intramuscular com uma alta dose viral e não demonstraram sinais clínicos ou excreção viral durante a fase aguda ou após tentativa de reativação viral pela administração de dexametasona. Bezerros que receberam uma dose do vírus vivo, contendo a deleção na gE, pela via intramuscular (grupo I) ou pela via subcutânea (grupo II) ou duas doses do vírus inativado utilizando o adjuvante hidróxido de alumínio (grupo IV) ou MontanideTM (grupo V), desenvolveram títulos de anticorpos neutralizantes de 2 a 8 (GMT: 2); 2 a 4 (GMT: 1,65); 2 a 16 (GMT: 2,25) e de 2 a 128 (GMT: 3,9), respectivamente. Todos os bezerros vacinados se mantiveram soronegativos quando utilizado um kit ELISA específico para a gE. Para o teste de segurança, seis bezerros foram vacinados com o vírus vivo BoHV-1gE&#916;, sendo estes posteriormente desafiados com uma cepa virulenta de BoHV-1. Estes bezerros excretaram menos vírus e desenvolveram apenas sinais clínicos moderados e transitórios quando comparados com dados coletados de quatro animais não-vacinados. Com base nestes resultados, podemos confirmar que o vírus do BoHV-1 que contém a deleção na gE (BoHV-1gE&#916;) é seguro e suficientemente imunogênico para bezerros e permite a diferenciação sorológica entre os animais vacinados e infectados perante a a um teste ELISA commercial específico para a gE.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Marques A.L.A., Maia L.A., Aguiar G.M.N., Weber M.N., Simões S.V.D. & Azevedo S.S. 2016. [Detection of ‘HoBi’-like (BVDV-3) vírus in a cow in the semiarid of Paraíba, Northeastern Brazil.] Detecção do virus ‘HoBi’-like (BVDV-3) em bovino no semiárido da Paraíba. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1081-1086. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Bairro Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio@vps.fmvz.usp.br The aim of this study was to describe the clinical and anatomopathological aspects, and the viral identification of a case of ‘Hobi’-like (BVDV-3) vírus infection in cattle from the semiarid of Paraiba State, Northeastern Brazil. A female bovine, three months old, was sent to the UFCG’s Veterinary Hospital presenting salivation, difficulty of ceiling seizure, lack of appetite, dark feces and in small amounts. Due to worsening of symptoms it was decided to in extremis euthanasia, followed by the necropsy and collection of material for histopathology. Histologically, in the mucous membranes of the digestive tract there were edema, ballooning degeneration, necrosis and inflammatory infiltrate, which was observed on the dorsal surface of the tongue and in its deepest epithelium. The immunohistochemical of skin biopsies of the extremity of the ear (ear notches) showed positive antigenic marking and by RT-PCR it was possible to detect viral RNA of BVDV in the serum, whose cytopathic effect in epithelial cells of bovine kidney lineage “Madin Darby bovine kidney” (MDBK)was not observed. The sequencing of the 5’NCR gene showed that the virus isolated was more related to ‘Hobi’-like (BVDV-3). After confirming the diagnosis serum samples were collected from 23 animals for serology by indirect ELISA, and a seropositivity of 69.6% (16/23) was found. The identification of this new case of ‘Hobi’-like infection in Paraiba reaffirms the need for regular BVDV monitoring in the region to early detection of infection in the herds and adoption of effective preventive and control measures.

• BVDV-3 pestivirus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Marques A.L.A., Maia L.A., Aguiar G.M.N., Weber M.N., Simões S.V.D. & Azevedo S.S. 2016. [Detection of ‘HoBi’-like (BVDV-3) vírus in a cow in the semiarid of Paraíba, Northeastern Brazil.] Detecção do virus ‘HoBi’-like (BVDV-3) em bovino no semiárido da Paraíba. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1081-1086. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Bairro Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio@vps.fmvz.usp.br Objetivou-se descrever os aspectos clínicos e anatomopatológicos, e a identificação viral de um caso de infecção pelo vírus ‘Hobi’-like (BVDV-3) em bovino do semiárido paraibano, Nordeste do Brasil. Um bovino, fêmea, três meses de idade, foi levado ao Hospital Veterinário da UFCG apresentando salivação, dificuldade de apreensão do teto, falta de apetite, fezes escuras e em pouca quantidade. Diante da piora do quadro clínico optou-se por sua eutanásia in extremis, seguida da realização da necropsia e coleta de material para histopatologia. Histologicamente, nas mucosas do trato digestivo, havia edema, degeneração balonosa, necrose e infiltrado inflamatório, que foi observado na face dorsal da língua e no seu epitélio mais profundo. A imunohistoquímica de amostras de extremidade de pavilhão auricular demonstrou marcação antigênica positiva e pela RT-PCR foi possível detectar RNA viral do BVDV no soro sanguíneo, cujo efeito citopático em células epiteliais de rim bovino da linhagem “Madin Darby bovine kidney” (MDBK) não foi observado. O sequenciamento do gene 5’NCR demonstrou que o vírus isolado estaria mais relacionado ao ‘Hobi’-like (BVDV-3). Após a confirmação do diagnóstico foram coletadas amostras de soro dos 23 animais do rebanho para sorologia por ELISA indireto, sendo constatada 69,6% (16/23) de soropositividade. A identificação deste novo caso de infecção por ‘Hobi’-like na Paraíba reafirma a necessidade de um monitoramento regular para BVDV na região para detecção precoce da infecção dos rebanhos e adoção de medidas eficazes de prevenção e controle.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Firmino F.P., Aquino L.C., Marçola T.G., Bittencourt M.V., McManus C.M. & Paludo G.R. 2016. Frequency and hematological alterations of different hemoplasma infections with retrovirusis co-infections in domestic cats from Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):731-736. Laboratório de Patologia Clínica, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Campus Universiário Darcy Ribeiro, Brasília, DF 70910-900, Brazil. E-mail: giane@unb.br Mycoplasma haemofelis is the agent of feline infectious anemia, although Candidatus M. haemominutum can also be associated. This study evaluated the frequency and hematological alterations caused by hemoplasma infections and co-infections with FeLV, FIV and Toxoplasma gondii in domestic cats from two distinct areas (urban - G1 and periurban - G2) of Brasília, Brazil. One hundred cats were evaluated, 51 from the G1 area and 49 from G2. No cats were positive for T. gondii. Hemoplasma infection was diagnosed in 33% cats from G1 and 32.6% from G2 (p>0.05). In G1 35.3% of the positive cats were infected with Mycoplasma haemofelis, 47.06% with Candidatus Mycoplasma haemominutum and 17.64% with mixed hemoplasma species infection; 12.5% of the cats identified as PCR positive in G2 were infected with Mycoplasma haemofelis, 18.75% with Candidatus Mycoplasma haemominutum and 68.75% with mixed infection. Cats from the periurban area had higher mixed hemoplasmas infection rates than those from urban area, and most of them were asymptomatic carriers. Cytology results were positive in only 5% of cats from G1. Mycoplasma haemofelis infected cats had normocytic normochromic anemia while the cats infected with Candidatus Mycoplasma haemominutum or with both species did not. 37.2% of G1 cats were co-infected with Mycoplasma haemofelis and FeLV, and presented lower PCV and hemoglobin concentration than those infected only with Mycoplasma haemofelis. The co-infection with Candidatus Mycoplasma haemominutum and FeLV produced lower WBC, segmented cells and platelets, and increased total protein concentration.

• Anemia Mycoplasma spp. hemoplasma infections retrovirusis co-infections hemoplasmas co-infecções por retrovírus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Firmino F.P., Aquino L.C., Marçola T.G., Bittencourt M.V., McManus C.M. & Paludo G.R. 2016. Frequency and hematological alterations of different hemoplasma infections with retrovirusis co-infections in domestic cats from Brazil. [Frequência e alterações hematológicas causadas por diferentes infecções por hemoplasmas com co-infecções por retrovírus em gatos domésticos do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):731-736. Laboratório de Patologia Clínica, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Campus Universiário Darcy Ribeiro, Brasília, DF 70910-900, Brazil. E-mail: giane@unb.br Mycoplasma haemofelis é o principal agente causador da anemia infecciosa felina, apesar de outras espécies de hemoplasmas, Candidatus M. haemominutum e Candidatus M. turicensis, também estarem associadas à hemoplasmose felina. O presente estudo avaliou a frequência de hemoplasmas, as principais alterações hematológicas associadas com a infecção e co-infecções com FeLV, FIV e Toxoplasma gondii em gatos domésticos de duas áreas diferentes (urbana - G1 e periurbana - G2) de Brasília, Brasil. 100 gatos foram avaliados, 51 de G1 e 49 de G2. Nenhum gato foi positivo para T. gondii. Hemoplasmose foi diagnosticada em 33% dos gatos de G1 e 32,6% de G2 (p>0,05). Em G1, 35.3% dos gatos hemoplasma positivos estavam infectados por Mycoplasma haemofelis, 47,06% por Candidatus Mycoplasma haemominutum e 17,64% apresentaram infecção concomitante por Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum. Em G2, 12,5% dos gatos hemoplasma positivos estavam infectados por Mycoplasma haemofelis, 18,75% por Candidatus Mycoplasma haemominutum e 68,75% apresentaram infecção concomitante por Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum. Gatos da região periurbana eram, em sua maioria, assintomáticos e apresentaram mais infecção concomitante por duas espécies de hemoplasmas do que gatos da região urbana. Os resultados da citologia foram positivos apenas em 5% dos gatos de G1. Gatos com infectados apenas com Mycoplasma haemofelis apresentaram anemia normocítica normocrômica e gatos com infecção única com Candidatus Mycoplasma haemominutum ou em combinação com Mycoplasma haemofelis não apresentaram alterações hematológicas. 37,2% dos gatos de G1 estavam co-infectados por Mycoplasma haemofelis e FeLV, e apresentaram VG e concentração de hemoglobina menores do que os gatos infectados apenas por Mycoplasma haemofelis. A co-infecção por Candidatus Mycoplasma haemominutum e FeLV resultou em baixo número de leucócitos, segmentados e plaquetes, além de aumento das concentrações de proteínas totais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Nuñez L.F.N., Santander Parra S.H., Astolfi-Ferreira C.S., Carranza C., De La Torre D.I.D., Pedroso A.C. & Ferreira A.J.P. 2016. Detection of enteric viruses in pancreas and spleen of broilers with runting-stunting syndrome (RSS). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):595-599. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: ajpferr@usp.br Enteric disease is a multifactorial problem in chickens, which causes gastrointestinal alterations, elevated feed conversions and impairment. In the last years, several enteric viruses were implicated in enteric disease; case reports have shown their presence alone or in concomitant infections during outbreaks and have suggested that they might be determining factors in the aetiology of enteric disease. This study shows high detection rates of enteric viruses in the pancreas and spleen in samples from an outbreak of enteritis and malabsorption in 16 chicken flocks (n=80 broilers). Avian nephritis virus (ANV) was the most ubiquitous virus, present in 75% of the flocks followed by avian rotavirus group A (ART-A) with 68.75%, and by chicken astrovirus (CAstV) and chicken parvovirus (ChPV) in 43.75% of samples. Viruses were present in the pancreas of positive flocks at extremely high rates: 100% for ART-A, 91.7% for ANV, 100% for CAstV and 57.14% for ChPV. By contrast, only 16.7% and 57.14% of intestine samples were positive for ANV and CAstV, respectively. Avian reovirus (AReo) and avian adenovirus group 1 (FAdV-1) were not detected. These results suggest that high viral detection rates in pancreas samples may be a result of viremia during enteric disease, with subsequent damage of the exocrine pancreas, leading to runting-stunting syndrome (RSS).

• Pancreas spleen runting-stunting syndrome pâncreas baço nanismo raquitismo

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Nuñez L.F.N., Santander Parra S.H., Astolfi-Ferreira C.S., Carranza C., De La Torre D.I.D., Pedroso A.C. & Ferreira A.J.P. 2016. Detection of enteric viruses in pancreas and spleen of broilers with runting-stunting syndrome (RSS). [Detecção de vírus entéricos em pâncreas e baço de frangos com a síndrome de nanismo e raquitismo (RSS).] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):595-599. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: ajpferr@usp.br A doença entérica é um problema multifatorial em galinhas que causa alterações gastrointestinais, conversão alimentar elevada e deficiência de crescimento. Nos últimos anos, os vírus entéricos foram associados à doença entérica; casos reportados mostraram a infecção de um único vírus e também infecções concomitantes durante os surtos sugerindo a presença de múltiplos fatores etiológicos nas doenças entéricas. Este estudo mostra uma alta taxa de detecção dos vírus entéricos em amostras de pâncreas e baço de um surto de enterite e má-absorção em 16 lotes de frangos (n=80 frangos). O vírus de nefrite aviária (ANV) foi o vírus mais detectado, estando presente em 75% dos lotes seguido pelo rotavírus aviário grupo A (ART-A) em 68,75% dos casos, e pelo astrovirus (CAstV) e parvovírus aviários (ChPV), ambos em 43,75% das amostras. Os vírus estavam presentes no pâncreas dos lotes positivos em percentuais elevados: 100% para ART-A e CAstV; 91,7% para ANV, e em 57,14% para ChPV. Em contraste, somente 16,7% e 57,14%, em amostras de intestino, foram positivos para ANV e CAstV, respectivamente. Reovírus aviário (AReo) e o adenovírus do grupo 1 (FAdV-1) não foram detectados. Estes resultados sugerem que os elevados percentuais de vírus detectados em amostras de pâncreas podem estar associados à viremia durante a doença entérica, com subsequente lesão no pâncreas exócrino das aves levando ao desenvolvimento da síndrome de nanismo e raquitismo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Echenique J.V.Z., Bandarra P.M., Brauner R.K., Soares M.P., Coimbra M.A.A. & Schild A.L. 2016. [Avipoxvirus infecction in Bubo virginianus (great horned owl).] Infecção por pox vírus e Aspergillus fumigatus em Bubo virginianus (Coruja jacurutu). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):630-633. Laboratório Regional de Diagnóstico, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão s/n, Pelotas, RS 96010-900, Brazil. E-mail: gmpsoares@gmail.com This paper describes a case of mixed infection by pox virus and Aspergillus fumigatus in Bubo virginianus (Owl Jacurutu). An adult male Bubo virginianus was referred to the Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre, Instituto de Biologia, Universidade Federal de Pelotas (NURFS/CETAS/UFPEL). The owl was active and had a good body condition but with flight disability. After three days of their admission at NURFS the owl developed crusty and verrucous lesions at the dorsal surface of their feet. Also it had nodes on the left eyelid and cera with the same aspect. The owl died 15 days after its arrival. Necropsy and histopatological examination were carried out. The warty lesions had hyperplasia of the epithelium and intracytoplasmic Bollinger-like inclusion bodies in the basal, spinal, granulosa layer and cornea. Viral particles characteristic of pox viruses were shown by electron microscopy. This case includes Bubo virginianus as a host of the avipoxvirus. There were also a mononuclear inflammatory cell infiltrate and bacterial colonies in the dermis. In the lugs, there was congestion and presence of granulomas with intralesional fungal hyphae. With the Grocott stain those structures showed dichotomous branching which was later identified in mycological culture as characteristic for A. fumigates. The diagnosis of avipoxvirus infection can contribute to studies related to the occurrence of this disease in free-living populations and as auxiliary information for the management and conservation of this raptor species. It is also suggested to include the use of X-rays in rehabilitation center protocols as screening test to diagnose aspergillosis in birds of prey with good body condition but inability to fly.

• Avipoxvirus fowlpox Aspergillus fumigatus aspergillosis Bubo virginianus great horned owl pox vírus aviário bouba aviária aspergilose coruja jacurutu

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Echenique J.V.Z., Bandarra P.M., Brauner R.K., Soares M.P., Coimbra M.A.A. & Schild A.L. 2016. [Avipoxvirus infecction in Bubo virginianus (great horned owl).] Infecção por pox vírus e Aspergillus fumigatus em Bubo virginianus (Coruja jacurutu). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):630-633. Laboratório Regional de Diagnóstico, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão s/n, Pelotas, RS 96010-900, Brazil. E-mail: gmpsoares@gmail.com Este trabalho descreve um caso de infecção mista por pox vírus e Aspergillus fumigatus em Bubo virginianus (coruja jacurutu). A ave, um macho adulto, foi encaminhada ao Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre do Instituto de Biologia da Universidade Federal de Pelotas (NURFS/CETAS/UFPEL). Apresentava bom estado corporal, estava ativa, porém com incapacidade de voo. Após três dias apresentou lesões crostosas e de aspecto verrucoso na superfície dorsal das patas. Havia, também, nódulos de mesmo aspecto na pálpebra esquerda e na cera. A ave morreu após 15 dias de sua chegada ao NURFS e foi necropsiada no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel). Histologicamente, as lesões verrucosas caracterizavam-se por hiperplasia do epitélio e nas células das camadas basal, espinhosa, granular e córnea havia corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos do tipo Bollinger. Na microscopia eletrônica foram visualizadas partículas virais características de pox vírus, incluindo Bubo virginianus como um hospedeiro do vírus. Havia, ainda, infiltrado inflamatório de células mononucleares e focos de colônias bacterianas na derme. Nos pulmões havia congestão e presença de granulomas com hifas fúngicas, que pela técnica de Grocott, apresentaram ramificação dicotômica compatível com Aspergillus spp., identificado na cultura como A. fumigatus. O diagnóstico de infecção por avipoxvirus pode contribuir para estudos relacionados com a ocorrência desta doença nas populações de vida livre e como informação auxiliar para o manejo e conservação desta espécie. Sugere-se, ainda, a inclusão do uso de raios-X nos protocolos de centros de reabilitação como o diagnostico de aspergilose em aves rapinantes com bom estado corporal, porém incapazes de voar.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Olinda R.G., Maia L.A., Cargnelutti J.F., Gois R.C.S., Batista J.S., Dantas A.F.M., Flores E.F. & Riet-Correa F. 2016. Swinepox dermatitis in backyard pigs in Northeastern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):468-472. Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Hospital Veterinário, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos, Patos, PB 58700-000, Brazil. E-mail: rgumes@hotmail.com This article describes five outbreaks of swinepox in backyard pigs in Northeastern Brazil. It affected backyard pigs from herds of poor hygienic-sanitary conditions with severe fly and lice infestations. The morbidity ranged from 33.3 to 100% among affected herds, with mortality reaching up to 60%. The affected pigs developed multifocal to coalescent gray to white papules and blisters in the skin, with eventual eruptions, evolving to erosions and crusts. In addition to skin lesions, affected piglets presented apathy, anorexia and fever. The disease was auto-limiting, resolving within 15 to 25 days. Histological examination revealed proliferative and ulcerative vesiculopustular dermatitis with ballooning degeneration of epithelial cells, perivascular inflammatory infiltrates of lymphocytes, plasma cells, neutrophils, eosinophils and some macrophages in the dermis. Intracytoplasmic eosinophilic inclusions were consistently observed in keratinocytes. Total DNA extracted from fresh tissue fragments obtained from one outbreak and formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue from the other four outbreaks was submitted to polymerase chain reaction (PCR) for Swinepox virus (SWPV) and Vaccinia virus (VACV). Genetic SWPV material was identified by PCR in fresh material from one outbreak. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of the PCR amplicons (viral polymerase gene) demonstrated 100% homology with sequences from SWPV. All tissues were PCR negative for VACV. Swine poxvirus is present in backyard pigs in Northeastern Brazil, indicating the need of including SWPV in the differential diagnosis of dermatitis in pigs.

• Poxvirus dermatitis varíola dermatite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Olinda R.G., Maia L.A., Cargnelutti J.F., Gois R.C.S., Batista J.S., Dantas A.F.M., Flores E.F. & Riet-Correa F. 2016. Swinepox dermatitis in backyard pigs in Northeastern Brazil. [Varíola em suínos no Nordeste do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):468-472. Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Hospital Veterinário, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos, Patos, PB 58700-000, Brazil. E-mail: rgumes@hotmail.com Em cinco surtos de varíola em suínos no Nordeste do Brasil foram acometidos leitões e suínos adultos, de rebanhos domésticos criados em condições higiênico-sanitárias precárias, que apresentavam graves infestações por moscas e piolhos. A morbidade variou de 33,3-100% entre os rebanhos afetados e a mortalidade atingindo 60%. Os animais afetados desenvolveram pápulas cinzentas ou esbranquiçadas coalescentes e vesículas, que evoluíram para erosões e crostras. Além das lesões de pele, os leitões afetados apresentavam apatia, anorexia e febre. A doença foi autolimitante, com resolução em 15 a 25 dias. Histologicamente, observou-se dermatite proliferativa e ulcerativa com degeneração balonosa das células do epitélio, infiltrado inflamatório perivascular de linfócitos, plasmócitos, neutrófilos, eosinófilos e escassos macrófagos na derme. Inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas foram consistentemente observadas em queratinócitos. DNA total extraído a partir de fragmentos de tecido frescos obtidos a partir de um surto, e de tecido fixado em formol e embebido em parafina dos outros quatro surtos, foram submetidos à reação em cadeia da polimerase (PCR) para o vírus da varíola suína (SWPV) e o vírus vaccínia (VACV). Material genético do SWPV foi identificado por PCR em material fresco de um surto. O sequenciamento e análise filogenética dos produtos de amplificação da PCR (gene da polimerase viral) demonstraram 100% de homologia com sequências do SWPV. Todos os fragmentos de tecidos foram negativos para VACV na PCR. Este artigo relata a circulação de poxvírus suíno no Nordeste do Brasil, indicando a necessidade de incluir SWPV no diagnóstico diferencial de dermatite em suínos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br This study evaluated the performance of three real time PCR techniques (qPCR) for the diagnosis of African Swine Fever in tissue samples. The three chosen techniques are based on amplification of viral protein VP72 gene sequences and are recommended by OIE (PSA-OIE), the United States official laboratories (PSA-USDA) and the European Union (PSA-EU). Target sequences of the viral DNA were inserted into synthetic plasmid, which served as a positive control for the standardization of techniques and optimization of reagents, determination of limits of detection and performance verification testing. To gauge repeatability and reproducibility of techniques, standard procedures were repeated on different days by two analysts and by changing mix reagents and equipment, and also by another laboratory. Analytical sensitivity tests were done with reference samples provided by an OIE reference laboratory and analytical and diagnostic specificity were tested with negative samples. The PSA-EU and PSA-USDA techniques were more advantageous to use because of lower concentration of oligos used. There were no significant differences in quantitative results varying the days of tests, analysts, equipment and the mix of reagents. The three techniques had high analytical and diagnostic specificity and sensitivity. The three qPCR techniques were considered equivalent and effective and can be adopted by any laboratory for issuing official diagnosis of African Swine Fever.

• African swine fever Peste Suína Africana

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.