Abstract in English:
Clostridioides difficile is a strictly anaerobic, spore-forming Gram-positive bacterium associated with diarrhea, known as C. difficile infection (CDI). In domestic animals, C. difficile is considered an important pathogen mostly in pigs and horses, but there are also reports in other domestic species. In wild animals, the epidemiology of C. difficile is largely unknown, and the role of the bacterium as a cause of diarrhea is unclear. The aim of this study was to determine the prevalence of C. difficile in the feces of wild animals referred to the Center of Medicine and Research in Wild Animals (CEMPAS). Fecal samples obtained from 100 animals of 34 different species were subjected to qPCR for the detection of the C. difficile 16S rRNA gene and two major toxin genes (tcdA and tcdB) and to anaerobic bacterial isolation. A total of 63 animals (63%) were positive for C. difficile by qPCR, and 16 isolates were recovered. The opossum (Didelphis spp.) had the highest number of positive animals in both tests (from 21 samples, 19 were qPCR positive, and four isolates were recovered). Three toxigenic strains (RT 002, 004, and 014), all previously described as infecting humans and animals, were isolated in the following species: bearded dragon (Pogona vitticeps), pampas fox (Lycalopex vetulus), and marmoset (Callithrix sp.). The presence of C. difficile in the feces of wild animals highlights the importance of wildlife as potential carriers of infection for production animals or humans.
Abstract in Portuguese:
O Clostridioides difficile é uma bactéria Gram-positiva estritamente anaeróbica e formadora de esporos, associada à diarreia e conhecida como infecção por C. difficile (CID). Em animais domésticos, o C. difficile é considerado um patógeno importante principalmente em porcos e cavalos, mas também há relatos em outras espécies domésticas. Em animais selvagens, a epidemiologia do C. difficile é amplamente desconhecida, e o papel da bactéria como causa de diarreia não está claro. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência do C. difficile nas fezes de animais selvagens encaminhados ao Centro de Medicina e Pesquisa em Animais Selvagens (CEMPAS). Amostras de fezes obtidas de 100 animais de 34 espécies diferentes foram submetidas à qPCR para a detecção do gene 16S rRNA do C. difficile e dois principais genes de toxina (tcdA e tcdB), além de isolamento bacteriano anaeróbico. Um total de 63 animais (63%) foram positivos para C. difficile por qPCR, e 16 isolados foram recuperados. O gambá (Didelphis spp.) apresentou o maior número de animais positivos em ambos os testes (de 21 amostras, 19 foram positivas na qPCR, e quatro isolados foram recuperados). Três cepas toxigênicas (RT 002, 004 e 014), todas previamente descritas como infectando humanos e animais, foram isoladas nas seguintes espécies: dragão barbado (Pogona vitticeps), raposa-pampas (Lycalopex vetulus) e sagui (Callithrix sp.). A presença de C. difficile nas fezes de animais selvagens destaca a importância da vida selvagem como potencial portadora de infecção para animais de produção ou seres humanos.
Abstract in English:
The present study investigated Salmonella spp. in the feces of 200 foals up to one year of age (100 with clinical signs of diarrhea and 100 without clinical signs of diarrhea). Bacteriological culture, serotyping, antimicrobial susceptibility, and real-time PCR (qPCR SYBR® Green or a TaqMan®) for detecting the invA gene (with and without a selective pre-enrichment step in tetrathionate broth) were performed. Bacterial culture revealed 15% (n=30) of positive animals (21 animals with diarrhea and nine without diarrhea). Among the 30 isolates, 13 different serovars were identified: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multidrug resistance was found in 43.33% (n=13) of the isolates, with one isolate obtained from animals without diarrhea and 12 isolates from animals with diarrhea. All qPCR techniques used in the study classified more samples as positive for Salmonella spp. than the bacterial culture of feces. In addition, all qPCR techniques detected more positive animals in the diarrhea group than in the diarrhea-free group. The results confirm the utility of the qPCR method without the pre-enrichment step in tetrathionate as a rapid test for Salmonella spp. in carrier animals. In animals with clinical signs of diarrhea, it can be combined with bacterial culture (antimicrobial susceptibility testing and serotyping). The isolation of Salmonella spp. in nine animals without diarrhea confirms the importance of asymptomatic carrier animals in the epidemiology of the disease. The multidrug resistance observed highlights the importance of rational antimicrobial use in horses and adopting biosecurity protocols that are efficacious in controlling the spread of infections between animals and zoonotic transmission in farms.
Abstract in Portuguese:
O presente estudo investigou a ocorrência de Salmonella spp. em fezes de 200 potros com até um ano de idade (100 com sinais clínicos de diarreia e 100 sem sinais clínicos de diarreia), utilizando as técnicas de cultivo bacteriológico e PCR em tempo real (qPCR) pelos métodos de corante fluorescente (SYBR® Green) e sonda específica (Taqman®) para a detecção do gene invA com e sem etapa de pré-enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato. O cultivo bacteriológico revelou 15% (n=30) de animais positivos (21 animais com diarreia e nove animais sem diarreia). Dentre esses 30 isolados, 13 sorovares diferentes foram identificados: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multirresistência foi constatada em 43,33% (n=13) dos isolados, sendo um isolado obtido de animal sem diarreia e 12 isolados de animais com diarreia. Todas as técnicas de qPCR empregadas no estudo apresentaram maior número de amostras classificadas como positivas para Salmonella spp. comparadas ao cultivo bacteriológico de fezes. Adicionalmente, em todas as técnicas de qPCR houve maior número de animais detectados como positivos no grupo de animais com diarreia em relação aos animais sem diarreia. Os resultados confirmaram a utilidade do método qPCR sem a etapa de pré-enriquecimento em tetrationato, como um teste rápido para detecção de Salmonella spp. em animais portadores ou em animais com sinais clínicos de diarreia. O cultivo bacteriológico deve ser associado para a realização do teste de sensibilidade aos antimicrobianos e sorotipificação. O isolamento de Salmonella spp. em nove animais sem diarreia, confirma a importância dos animais portadores assintomáticos na epidemiologia da doença. A multirresistência observada evidencia a importância do uso racional de antimicrobianos em equinos e a importância da adoção de protocolos de biossegurança que sejam eficazes para controlar a disseminação de infecções entre animais e a transmissão zoonótica nas fazendas.
Abstract in English:
This study attempted to determine the associations between metabolic imbalances and lameness or hoof injuries in high-producing Holstein × Gir cows, and to determine whether the metabolic profile affects the occurrence of lameness. Eighty cows were followed from -60 to 60 days relative to calving and hoof injuries were reported on days -60, 7 and 60. Locomotion score (LS), body condition score (BCS), the concentrations of non-esterified fatty acids, β-hydroxybutyrate, glucose, cholesterol, albumin, total protein, blood urea nitrogen (BUN), calcium, phosphorus, and magnesium, and the activity of aspartate aminotransferase were determined at days -42, -21, -7, 0, 7, 21 and 42. The McNemar and Chi-square tests were used to compare frequencies of lameness and hoof injuries over time and to verify the associations between lameness, BCS, hoof injuries, and metabolic disorders. Two-way repeated measures ANOVA was used considering groups (non-lame × lame cows) and variations of BCS and metabolites over time. Lameness and hoof injuries increased between days -60 (20% and 66.3%) and 60 (44.7% and 98.6%). Excessive postpartum loss of BCS (P=0.017) and subclinical hypocalcemia (P=0.012) were associated with lameness on day 60. In general, the metabolic profile did not differ between lame and non-lame cows but cholesterol, albumin, BUN and magnesium concentrations were higher in non-lame cows. The postpartum decrease in BCS can affect the occurrence of lameness, and the metabolic profile of lame cows shows little difference from that of non-lame cows.
Abstract in Portuguese:
Este estudo objetivou verificar as associações entre desequilíbrios metabólicos e claudicação ou lesões nos cascos em vacas mestiças Holandesa × Gir de alta produção e determinar se o perfil metabólico afeta a ocorrência de claudicação. Oitenta vacas foram acompanhadas de -60 a 60 dias em relação ao parto e as lesões nos cascos foram avaliadas nos dias -60, 7 e 60. O escore de locomoção (EL), o escore de condição corporal (ECC), as concentrações de ácidos graxos não esterificados, β-hidroxibutirato, glicose, colesterol, albumina, proteína total, nitrogênio ureico no sangue (BUN), cálcio, fósforo e magnésio e a atividade da aspartato aminotransferase foram determinados nos dias -42, -21, -7, 0, 7, 21 e 42. Os testes de McNemar e de Qui-quadrado foram empregados para comparar as frequências de claudicação e de lesões nos cascos ao longo do tempo e para verificar as associações entre claudicação, ECC, lesões nos cascos e distúrbios metabólicos. A análise de variâncias de medidas repetidas bifatorial foi usada considerando-se grupos (vacas com claudicação × vacas sem claudicação) e variações de BCS e de metabólitos ao longo do tempo. A claudicação e as lesões nos cascos aumentaram entre os dias -60 (20% e 66,3%) e 60 (44,7% e 98,6%). A perda excessiva de ECC no pós-parto (P=0,017) e a hipocalcemia subclínica ao parto (P=0,012) foram associadas com claudicação no dia 60. Em geral, o perfil metabólico não diferiu entre vacas com e sem claudicação, mas as concentrações de colesterol, albumina, BUN e magnésio foram maiores em vacas sem claudicação. A redução do ECC no periodo pós-parto pode afetar a ocorrência de claudicação, e o perfil metabólico das vacas claudicantes apresenta pouca diferença em relação ao das vacas não claudicantes.