PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Santos M.L.T., Borges A.A., Queiroz Neta L.B., Santos M.V.O., Oliveira M.F., Silva A.R. & Pereira A.F. 2016. In vitro culture of somatic cells derived from ear tissue of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) in medium with different requirements. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1194-1202. Laboratório de Biotecnologia Animal, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: alexsandra.pereira@ufersa.edu.br The maintenance of metabolic activities during the in vitro culture of somatic cells of wild animals, especially collared peccary (Pecari tajacu), is an interesting step in conservation of these cells for the use in nuclear transfer. In this context, it is necessary to optimize the culture conditions of somatic cells by the establishment of appropriate supplementation to the media. Therefore, this study aimed to analyze the composition of the culture means of somatic cell derived from ear tissue of collared peccaries, evaluating concentrations of fetal bovine serum (FBS; 10% vs. 20%) and epidermal growth factor (EGF; 5ng/mL vs. 10ng/mL). Tissues were submitted to primary culture and subcultures for 40 days and cells were analyzed for morphology, adhesion, subconfluence, and proliferative activity to develop the growth curve and to determine the population doubling time (PDT), viability, and functional/metabolic activity. No difference was observed between the concentrations of FBS for several parameters, except for viability [FBS10: 85.6% vs. FBS20: 98.2%], PDT [FBS10: 155.4h vs. 77.2h], and functional/metabolic assay [FBS10: 0.57–0.55 vs. FBS20: 0.82–0.99 (D5-D7)]. For the EGF in culture, no difference was observed in the evaluated parameters. In all experiments, the growth curves were typical S-shape and the cells passed through a lag, logarithmic, and plateau phase. In conclusion, 20% FBS is suitable for the recovery of somatic cells; nevertheless, EGF does not improve the quality of growing these cells. To our knowledge, this is the first study culturing somatic cells of collared peccaries.

• Peccary Pecari tajacu culture medium somatic tissue mitotic factor células somáticas tecido auricular catetos meio de cultivo fator mitótico

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Santos M.L.T., Borges A.A., Queiroz Neta L.B., Santos M.V.O., Oliveira M.F., Silva A.R. & Pereira A.F. 2016. In vitro culture of somatic cells derived from ear tissue of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) in medium with different requirements. [Cultivo in vitro de células somáticas derivadas de tecido auricular de cateto (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) em meio com diferentes requerimentos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1194-1202. Laboratório de Biotecnologia Animal, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: alexsandra.pereira@ufersa.edu.br A manutenção das atividades metabólicas durante o cultivo in vitro de células somáticas de animais silvestres, especialmente cateto (Pecari tajacu), é uma etapa interessante na conservação dessas células para o uso na transferência nuclear. Nesse contexto, é necessário aperfeiçoar as condições de cultivo de células somáticas pelo estabelecimento de suplementações apropriadas aos meios. Portanto, este estudo objetivou analisar a composição dos meios de cultivo de células somáticas derivadas de tecido auricular de catetos, avaliando concentrações de soro fetal bovino (SFB; 10% vs. 20%) e fator de crescimento epidermal (EGF; 5 ng/mL vs. 10 ng/mL). Para tanto, tecidos foram submetidos ao cultivo primário e subcultivos por 40 dias e células foram analisadas por morfologia, adesão, subconfluência, e atividade proliferativa pelo desenvolvimento da curva de crescimento e determinação do time de duplicação da população (PDT), viabilidade, e atividade funcional/metabólica. Nenhuma diferença foi observada entre as concentrações de SFB para os vários parâmetros, exceto para viabilidade [SFB10: 85,6% vs. SFB20: 98,2%], PDT [SFB10: 155,4 h vs. 77,2 h], e atividade funcional/metabólica [SFB10: 0,57–0,55 vs. SFB20: 0,82–0,99 (D5–D7)]. Para o EGF em cultivo, nenhuma diferença foi observada nos parâmetros avaliados. Em todos os experimentos, as curvas de crescimento foram típicas de forma S e as células passaram por uma fase lag, logarítmica e platô. Em conclusão, 20% de SFB é adequado para a recuperação de células somáticas; contudo, EGF não melhora a qualidade de crescimento dessas células. Ao nosso conhecimento, este é o primeiro estudo cultivando células somáticas de catetos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pereira-Junior R.A., Sousa S.A.P., Oliveira M.C., Valadares A.A., Hoppe E.G.L. & Almeida K.S. 2016. [Helminthic parasites of the collared peccaries (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758) of the Brazilian Amazon.] Fauna helmintológica de catetos (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758) procedentes da Amazônia Brasileira. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1109-1115. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal do Tocantins, BR-153 Km 112, Zona Rural, Caixa Postal 132, Araguaína, TO 77804-970, Brazil. E-mail: pereirajunior.ra@outlook.com Tayassu tajacu, popularly known as collared peccary, is a wildlife species found throughout the American continent, being abundant in their places of occurrence. This study aimed to describe the helminthological fauna, as well as the infection indicators, of the collared peccary (T. tajacu) coming from the Brazilian Amazon. Five adult peccaries (three males and two females) were captured in the Araguaína region, Tocantins, Brazil, with the aid of traps. The collared peccaries were reassured, chemically restrained and euthanized according to the Brazilian Good Practice Guide for Animal Euthanasy of the Federal Board of Veterinary Medicine. The species found were identified and the infection indicators were determined (infection rate, abundance, mean intensity and intensity variation). A total of 1394 helminths of nine nematode species were collected: Eucyathostomum dentatum, Cruzia brasiliensis, Monodontus semicircularis, Monodontus aguiari, Spiculopteragia tayassui, Texicospirura turki, Parabronema pecariae, Physocephalus sexalatus and Cooperia punctata. Helminths with higher percentages of infection were Physocephalus sexalatus, Parabronema pecariae and Monodontus aguiari found in 100% of the examined animals; the latter was the most abundant (164) and had a highest mean intensity (164) and total number of helminths (820). In contrast, Spiculopteragia tayassui presented lower indicators, found only one female in this study. In this studythe the first occurrence of Cruzia brasiliensis parasitizing collared peccary (T. Tajacu) in Brazil was reported, specie hitherto described and only found parasitizing domestic pigs.

• Cruzia brasiliensis Helminths Tayassuidae peccaries Tayassu tajacu helmintoses catetos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pereira-Junior R.A., Sousa S.A.P., Oliveira M.C., Valadares A.A., Hoppe E.G.L. & Almeida K.S. 2016. [Helminthic parasites of the collared peccaries (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758) of the Brazilian Amazon.] Fauna helmintológica de catetos (Tayassu tajacu Linnaeus, 1758) procedentes da Amazônia Brasileira. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(11):1109-1115. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal do Tocantins, BR-153 Km 112, Zona Rural, Caixa Postal 132, Araguaína, TO 77804-970, Brazil. E-mail: pereirajunior.ra@outlook.com Tayassu tajacu, popularmente conhecido como cateto, é uma espécie silvestre encontrada em quase todo o continente Americano, sendo abundante em seus locais de ocorrência. O trabalho objetivou conhecer a fauna helmintológica, bem como os indicadores de infecções, de catetos (T. tajacu) procedentes da Amazônia Brasileira. Para tanto, foram utilizados cinco animais adultos (três machos e duas fêmeas), capturados no município de Araguaína, estado do Tocantins, com auxílio de armadilhas. Os catetos foram tranquilizados, contidos quimicamente e eutanasiados segundo o Guia Brasileiro de Boas Práticas para Eutanásia em Animais do Conselho Federal de Medicina Veterinária. As espécies encontradas foram identificadas e os indicadores de infecção foram determinados (percentual de infecção, abundância, intensidade média e variação da intensidade). Foi coletado um total de 1394 helmintos, sendo nove espécies de nematódeos: Eucyathostomum dentatum, Cruzia brasiliensis, Monodontus semicircularis, Monodontus aguiari, Spiculopteragia tayassui, Texicospirura turki, Parabronema pecariae, Physocephalus sexalatus, Cooperia punctata. Os helmintos com maiores percentuais de infecção foram Physocephalus sexalatus, Parabronema pecariae e Monodontus aguiari, encontrados em 100% dos animais examinados, sendo este último o mais abundante (164), com maior intensidade média (164) e com maior número total de helmintos (820). Em contrapartida, Spiculopteragia tayassui foi a espécie que obteve menores indicadores, sendo encontrada apenas uma fêmea neste estudo. Foi relatada, neste trabalho, a primeira ocorrência de Cruzia brasiliensis parasitando catetos (T. tajacu) no Brasil, espécie até então descrita e encontrada apenas parasitando suínos domésticos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Laskoski L.M., Locatelli Dittrich R., Sousa R.S., Brum J.S., Cristo T.G., Montiani- Ferreira F., Beltrame O.C. & Valadão C.A.A. 2016. Laminar lesions in horses with systemic oxidative stress, committed by experimentally induced or naturally occurring gastrointestinal disorders. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):694-700. Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Federal do Paraná, Campus de Curitiba, Rua dos Funcionários 1540, Curitiba, PR 80035-050, Brazil. E-mail: luci.laskoski@gmail.com Laminitis in horses can be associated with lesions in multiple organs secondary to sepsis. Twenty-one horses suffering from gastrointestinal disorders were used in the experiment; 7 horses with experimentally induced endotoxemia and intestinal ischaemia, and 14 horses suffering from naturally occurring colic syndrome. Tissue samples of lungs, liver, heart, brain, cerebellum and hoof laminar tissue were collected for histopathological and oxidative stress evaluation using nitrotyrosine and superoxide dismutase (SOD2) immunostaining. The horses were divided into two groups: the non-oxidative lesions group (NOLG), with 7 horses showing weak immunostaining in lungs, liver and kidney, and the oxidative lesions group (OLG), with 14 horses showing immunostaining indicating systemic oxidative stress in multiple organs. The horses from OLG showed increase of laminar lesions and SOD2 immunostaining in multiple organs when compared to the horses from the NOLG. No differences were found ln regard to laminar immunostaining by nitrotyrosine and SOD2 between experimental groups. It was concluded that systemic oxidative stress can be associated with the development of laminar lesions, and that the laminar tissue does not respond to oxidative stress with increase of SOD as occurs in other organs.

• Laminitis nitrotyrosine peroxynitrite superoxide dismutase sepsis laminite nitrotirosina peroxinitrito superóxido dismutase sepse

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Laskoski L.M., Locatelli Dittrich R., Sousa R.S., Brum J.S., Cristo T.G., Montiani- Ferreira F., Beltrame O.C. & Valadão C.A.A. 2016. Laminar lesions in horses with systemic oxidative stress, committed by experimentally induced or naturally occurring gastrointestinal disorders. [Lesões laminares em cavalos com estresse oxidativo sistêmico, acometidos por doenças gastrintestinais experimentalmente induzidas ou de ocorrência natural.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):694-700. Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Federal do Paraná, Campus de Curitiba, Rua dos Funcionários 1540, Curitiba, PR 80035-050, Brazil. E-mail: luci.laskoski@gmail.com A laminite em equinos pode estar associada à lesão em múltiplos órgãos secundária a sepse. Foram utilizados 21 cavalos com afecções gastrintestinais, sendo sete com endotoxemia e isquemia intestinal induzidos experimentalmente, e 14 cavalos com síndrome cólica de origem natural. Amostras teciduais de pulmão, rim, fígado, coração, cérebro e cerebelo e de tecido laminar do casco foram coletadas para avaliação de lesão histopatológica e estresse oxidativo, pela imunomarcação de nitrotirosina e superóxido dismutase (SOD2). Os animais foram divididos em dois grupos: grupo sem lesão oxidativa (NOLG), com sete cavalos com fraca imunomarcação em pulmão, fígado e rim, e grupo lesão oxidativa (OLG), contendo 14 cavalos com imunomarcação indicando estresse oxidativo em múltiplos órgãos. Os cavalos do grupo OLG apresentaram aumento de lesões laminares e imunomarcação para SOD2 em múltiplos órgãos, quando comparados ao NOLG. Não houve diferença sobre a imunomarcação laminar para nitrotirosina e SOD2 entre os grupos experimentais. Conclui-se que o estresse oxidativo sistêmico está associado ao desenvolvimento de lesões laminares, e que o tecido laminar não responde ao estresse oxidativo com aumento de SOD como ocorre nos outros órgãos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Franco R.P., Zacche E., Camacho R.R., Sousa M.G. & Camacho A.A. 2016. Determination of left atrial volume in healthy dogs and dogs with myxomatous mitral valve disease. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):743-748. Departamento de Ciências Agrárias e Veterinária, Universidade de Marília, Avenida Hygino Muzzi Filho 1001, Campus Universitário, Marilia, SP 17525-902, Brazil. E-mail: vetrpf@yahoo.com.br The left atrial volume (LAV) can be obtained using the biplane Simpson’s method via echocardiography. Although in medicine this parameter has been considered to be a prognostic marker of left atrial enlargement in several cardiac diseases, in dogs with myxomatous mitral valve degeneration (MMVD), a valvulopathy characterized by left atrial (LA) volume overload, atrial enlargement is usually assessed by the LA-to-Aorta ratio (LA:Ao). Therefore, the body surface area (BSA)-indexed LAV was measured in healthy dogs and in dogs with MMVD using the biplane Simpson’s method. For this purpose, a total of 107 healthy dogs (control) and 81 dogs with MMVD in ACVIM stages B1, B2 and C were assessed, with LAV being calculated during atrial diastole (d) and systole (s) through the biplane Simpson’s method. Two-dimensional apical four-chamber (4C) and two-chamber (2C) images were obtained in every dog through the left parasternal window. The values obtained from healthy dogs were correlated with body weight using Pearson’s test. An analysis of variance (ANOVA) and Tukey’s test were used to compare healthy and MMVD dogs, as well as to investigate differences according with MMVD stages. A strong positive correlation was documented between either LAVd (r> 0.77) or LAVs (r> 0.73) and body weight in healthy dogs. The BSA-indexed LAV calculated for MMVD dogs was significantly different (p<0.01) from that obtained for the control group. Also, LAV was significantly different (P<0.05) when stages B2 and C, and B1 and C were compared. In conclusion, this study provided a reference for left atrial volume and the applicability of this technique to assess atrial overload in dogs with varying-stage MMVD.

• Myxomatous disease mitral valve endocardiosis atrium degeneração mixomatosa válvula mitral átrio endocardiose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Franco R.P., Zacche E., Camacho R.R., Sousa M.G. & Camacho A.A. 2016. Determination of left atrial volume in healthy dogs and dogs with myxomatous mitral valve disease. [Determinação do volume atrial esquerdo em cães sadios e portadores da degeneração mixomatosa da válvula mitral.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):743-748. Departamento de Ciências Agrárias e Veterinária, Universidade de Marília, Avenida Hygino Muzzi Filho 1001, Campus Universitário, Marilia, SP 17525-902, Brazil. E-mail: vetrpf@yahoo.com.br A mensuração do volume atrial esquerdo (VAE) pode ser obtido pelo método biplanar de Simpson via ecocardiografia. Embora na medicina tal parâmetro venha sendo considerado um marcador prognóstico da sobrecarga atrial esquerda em várias cardiopatias, nos cães com degeneração mixomatosa da válvula mitral (DMVM), valvulopatia caracterizada pela sobrecarga do átrio esquerdo (AE), a avaliação da sobrecarga atrial é realizada rotineiramente apelas pela relação entre o diâmetro do AE e da artéria Aorta (Ao) (AE:Ao). Portanto, procurou-se mensurar os valores do LAV indexados à área de superfície corporal (ASC) em cães sadios e em portadores da DMVM utilizando-se do método biplanar de Simpson. Para tanto, foram avaliados 107 cães sadios (controle) e 81 portadores da DMVM nos estágios B1, B2 e C (ACVIM), sendo o VAE calculado nos momentos da diástole (d) e sístole (s) atrial utilizando o método biplanar de Simpson. Imagens bidimensionais apicais quatro (4C) e duas câmaras (2C) foram obtidas pela janela paraesternal esquerda em todos os cães. Os valores do LAV nos cães sadios foram correlacionados com o peso corporal utilizando o teste de Pearson. Para a comparação dos cães sadios com os portadores da DMVM, bem como para investigar diferenças atribuídas aos diferentes estágios da DMVM, empregou-se análise de variância (ANOVA) e o teste de Tukey. Uma correlação positiva forte foi identificada entre VAEd (r>0,77), VAEs (r>0,73) e o peso corporal dos cães sadios. O LAV indexado pela ASC calculado para os cães portadores de DMVM foi significativamente diferente (p<0,01) daquele obtido no grupo controle. Também foram observadas diferenças significativas (p<0,05) no VAE quando as classes B2 e C, e B1 e C foram comparadas. Em conclusão, este estudo fornece uma referência para o volume atrial esquerdo e a aplicabilidade dessa técnica para avaliação da sobrecarga atrial em cães com DMVM em diferentes estágios.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Sousa P.C., Santos E.A.A., Silva A.M., Bezerra J.A.B., Souza A.L.P., Lima G.L., Oliveira M.F. & Silva A.R. 2016. Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):767-774. Laboratory of Animal Germoplasm Conservation, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: legio2000@yahoo.com The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos’ semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos’ sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.

• Sperm armadillo Euphractus sexcinctus cryopreservation semen mitochondrial tatu-peba criopreservação sêmen mitocondria

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Sousa P.C., Santos E.A.A., Silva A.M., Bezerra J.A.B., Souza A.L.P., Lima G.L., Oliveira M.F. & Silva A.R. 2016. Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation. [Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(8):767-774. Laboratory of Animal Germoplasm Conservation, Universidade Federal Rural do Semi-Árido, BR-110 Km 47, Presidente Costa e Silva, Mossoró, RN 599625-900, Brazil. E-mail: legio2000@yahoo.com O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação. Além disso, as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão revelaram que espermatozoides congelados-descongelados apresentaram membranas plasmáticas danificadas, modificações nucleares como alterações na cromatina, e alterações acrossomais relativas à capacitação espermática. Em conclusão, este estudo é a primeira tentativa de criopreservação de sêmen em uma espécie de tatu, e nos auxiliou a identificar pontos críticos no processo de congelação-descongelação, a fim de melhorar o protocolo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Echenique J.V.Z., Bandarra P.M., Brauner R.K., Soares M.P., Coimbra M.A.A. & Schild A.L. 2016. [Avipoxvirus infecction in Bubo virginianus (great horned owl).] Infecção por pox vírus e Aspergillus fumigatus em Bubo virginianus (Coruja jacurutu). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):630-633. Laboratório Regional de Diagnóstico, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão s/n, Pelotas, RS 96010-900, Brazil. E-mail: gmpsoares@gmail.com This paper describes a case of mixed infection by pox virus and Aspergillus fumigatus in Bubo virginianus (Owl Jacurutu). An adult male Bubo virginianus was referred to the Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre, Instituto de Biologia, Universidade Federal de Pelotas (NURFS/CETAS/UFPEL). The owl was active and had a good body condition but with flight disability. After three days of their admission at NURFS the owl developed crusty and verrucous lesions at the dorsal surface of their feet. Also it had nodes on the left eyelid and cera with the same aspect. The owl died 15 days after its arrival. Necropsy and histopatological examination were carried out. The warty lesions had hyperplasia of the epithelium and intracytoplasmic Bollinger-like inclusion bodies in the basal, spinal, granulosa layer and cornea. Viral particles characteristic of pox viruses were shown by electron microscopy. This case includes Bubo virginianus as a host of the avipoxvirus. There were also a mononuclear inflammatory cell infiltrate and bacterial colonies in the dermis. In the lugs, there was congestion and presence of granulomas with intralesional fungal hyphae. With the Grocott stain those structures showed dichotomous branching which was later identified in mycological culture as characteristic for A. fumigates. The diagnosis of avipoxvirus infection can contribute to studies related to the occurrence of this disease in free-living populations and as auxiliary information for the management and conservation of this raptor species. It is also suggested to include the use of X-rays in rehabilitation center protocols as screening test to diagnose aspergillosis in birds of prey with good body condition but inability to fly.

• Avipoxvirus fowlpox Aspergillus fumigatus aspergillosis Bubo virginianus great horned owl pox vírus aviário bouba aviária aspergilose coruja jacurutu

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Echenique J.V.Z., Bandarra P.M., Brauner R.K., Soares M.P., Coimbra M.A.A. & Schild A.L. 2016. [Avipoxvirus infecction in Bubo virginianus (great horned owl).] Infecção por pox vírus e Aspergillus fumigatus em Bubo virginianus (Coruja jacurutu). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):630-633. Laboratório Regional de Diagnóstico, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão s/n, Pelotas, RS 96010-900, Brazil. E-mail: gmpsoares@gmail.com Este trabalho descreve um caso de infecção mista por pox vírus e Aspergillus fumigatus em Bubo virginianus (coruja jacurutu). A ave, um macho adulto, foi encaminhada ao Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre do Instituto de Biologia da Universidade Federal de Pelotas (NURFS/CETAS/UFPEL). Apresentava bom estado corporal, estava ativa, porém com incapacidade de voo. Após três dias apresentou lesões crostosas e de aspecto verrucoso na superfície dorsal das patas. Havia, também, nódulos de mesmo aspecto na pálpebra esquerda e na cera. A ave morreu após 15 dias de sua chegada ao NURFS e foi necropsiada no Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (LRD/UFPel). Histologicamente, as lesões verrucosas caracterizavam-se por hiperplasia do epitélio e nas células das camadas basal, espinhosa, granular e córnea havia corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos do tipo Bollinger. Na microscopia eletrônica foram visualizadas partículas virais características de pox vírus, incluindo Bubo virginianus como um hospedeiro do vírus. Havia, ainda, infiltrado inflamatório de células mononucleares e focos de colônias bacterianas na derme. Nos pulmões havia congestão e presença de granulomas com hifas fúngicas, que pela técnica de Grocott, apresentaram ramificação dicotômica compatível com Aspergillus spp., identificado na cultura como A. fumigatus. O diagnóstico de infecção por avipoxvirus pode contribuir para estudos relacionados com a ocorrência desta doença nas populações de vida livre e como informação auxiliar para o manejo e conservação desta espécie. Sugere-se, ainda, a inclusão do uso de raios-X nos protocolos de centros de reabilitação como o diagnostico de aspergilose em aves rapinantes com bom estado corporal, porém incapazes de voar.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br This study evaluated the performance of three real time PCR techniques (qPCR) for the diagnosis of African Swine Fever in tissue samples. The three chosen techniques are based on amplification of viral protein VP72 gene sequences and are recommended by OIE (PSA-OIE), the United States official laboratories (PSA-USDA) and the European Union (PSA-EU). Target sequences of the viral DNA were inserted into synthetic plasmid, which served as a positive control for the standardization of techniques and optimization of reagents, determination of limits of detection and performance verification testing. To gauge repeatability and reproducibility of techniques, standard procedures were repeated on different days by two analysts and by changing mix reagents and equipment, and also by another laboratory. Analytical sensitivity tests were done with reference samples provided by an OIE reference laboratory and analytical and diagnostic specificity were tested with negative samples. The PSA-EU and PSA-USDA techniques were more advantageous to use because of lower concentration of oligos used. There were no significant differences in quantitative results varying the days of tests, analysts, equipment and the mix of reagents. The three techniques had high analytical and diagnostic specificity and sensitivity. The three qPCR techniques were considered equivalent and effective and can be adopted by any laboratory for issuing official diagnosis of African Swine Fever.

• African swine fever Peste Suína Africana

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.

Abstract in English:

ABSTACT.- Pupin R.C., Melo G.K.A., Heckler R.F., Faccin T.C., Ítavo C.C.B.F., Fernandes C.E, Gomes D.C. & Lemos R.A.A. 2016. Identification of lamb flocks susceptible and resistant against Brachiaria poisoning. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):383-388. Laboratório de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Campo Grande, MS 79074-460, Brazil. E-mail: ricardo.lemos@ufms.br This study was designed to assess the influence of genetic resistance against brachiaria poisoning in sheep. Two groups of sheep, one identified as susceptible (formed by two ewes and one ram) and the other as resistant against brachiaria poisoning (formed by three ewes and one ram) were selected. Sheep considered susceptible were those that presented clinical signs of brachiaria poisoning at any time of their life; resistant sheep were those that even raised on Brachiaria spp. pastures, did not developed any sign of the poisoning during their life. The offspring of the two flocks (15 lambs from the sensitive flock and 9 lambs from the resistant flock) were placed into brachiaria pasture (initially Brachiaria decumbens and B. brizantha,and only B. decumbens after weaning) and followed up during two years (2013-2014). The determination of protodioscin levels in B. decumbens pasture was performed only in 2014 and revealed significant amounts of the toxic principle. Eleven lambs of the susceptible group were affected to some degree of brachiaria poisoning and six died; no lamb of the resistant group was affected. Clinical signs consisted of varying degrees of subcutaneous edema of the face and, erythema and loss of hair of the ears, crusts on the skin of ears, around the eyes and on planum nasale, scar deformation of the ears, and bilateral ocular discharge; affected lambs also sought for shadowy shelters and they were poor doers. Several sheep recovered from the condition and then relapsed. Necropsy findings in six lambs included pale mucous membranes, emaciation, dermatitis, scar deformation of the ears, large yellow livers with marked lobular pattern, and moderate infestation by Haemonchus contortus. Histologically the liver lesions were similar in all necropsied lambs but with varying degrees of severity; they were consistent with brachiaria poisoning and included architectural disruption of hepatocellular trabecula, clusters of foamy macrophages occasionally forming multinucleated giant cells, swollen and vacuolated hepatocytes, crystals or negative images of crystals in the biliary system, bilestasis, bile duct proliferation and lymphoplasmacytic infiltrate in portal triads. The skin lesions were those of photodermatitis and included epidermal necrosis, hyperkeratosis and dermal neutrophilic infiltrate. The results of this study allow to conclude that there is a genetic related resistance to brachiaria poisoning in sheep since the progeny of resistant sheep did not manifest the poisoning. The use of resistant flocks in brachiaria pastures is suggested as a valuable option for the prevention of brachiaria poisoning in sheep.

• Poisonous plants Brachiara spp. saponins genetic resistance plant poisoning plantas tóxicas saponinas resistência genética intoxicação por plantas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pupin R.C., Melo G.K.A., Heckler R.F., Faccin T.C., Ítavo C.C.B.F., Fernandes C.E, Gomes D.C. & Lemos R.A.A. 2016. Identification of lamb flocks susceptible and resistant against Brachiaria poisoning. [Identificação de rebanhos de cordeiros suscetíveis e resistentes a intoxicação por braquiária.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):383-388. Laboratório de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Campo Grande, MS 79074-460, Brazil. E-mail: ricardo.lemos@ufms.br Este estudo avaliou a resistência genética na ocorrência de intoxicação por braquiária em ovinos. Foram selecionados dois grupos de ovinos, um identificado como suscetível (formado por duas ovelhas e um carneiro) e o outro como resistente (formado por três ovelhas e um carneiro). Foram considerados suscetíveis ovinos que apresentaram sinais de intoxicação por Brachiaria spp. em algum ponto de suas vidas e resistentes aqueles ovinos que, mesmo criados em pastagem de braquiária, nunca desenvolveram qualquer sinal da intoxicação. A progênie desses dois grupos (15 cordeiros do grupo suscetível e 9 no grupo resistente) foi colocada numa pastagem de braquiária (inicialmente Brachiaria decumbens e B. brizantha e, após o desmame, apenas B. decumbens) e acompanhada durante dois anos (2013-2014). A determinação dos níveis de protodioscina em B. decumbens foi realizada apenas em 2014 e foram encontradas quantidades significativas do princípio tóxico. Onze cordeiros do grupo suscetível foram afetados por algum grau de intoxicação por braquiária; nenhum cordeiro do grupo resistente foi afetado. Os sinais clínicos consistiam de graus variáveis de edema subcutâneo da face e eritema e alopecia da pele das orelhas, crostas na pele das orelhas e ao redor dos olhos e no plano nasal, retração cicatricial das orelhas, fotofobia e corrimento ocular bilateral. Três cordeiros apresentaram desenvolvimento retardado. Vários cordeiros se recuperaram da condição, mas posteriormente quando foram colocados na pastagem apresentaram recidivas. Achados de necropsia em seis cordeiros incluíam mucosas pálidas, pobre condição corporal, dermatite, deformação cicatricial das orelhas, fígado aumentado de volume, amarelo e com padrão lobular evidenciado e graus moderados de infestação por Haemonchus contortus. Histologicamente, as lesões hepáticas eram semelhantes em todos os cordeiros necropsiados, mas apresentavam vários graus de intensidade; eram consistentes com as lesões de intoxicação por braquiária e consistiam de desorganização da arquitetura trabecular dos hepatócitos, agregados de macrófagos espumosos ocasionalmente formando células gigantes multinucleadas, hepatócitos tumefeitos e vacuolizados, cristais ou imagem negativa de cristais no sistema biliar, bilestase, proliferação de ductos biliares e infiltrado linfoplasmocitário nas tríades portais. As lesões da pele eram de fotodermatite e incluíam necrose da epiderme, hiperqueratose e infiltrado neutrofílico na derme. Os resultados desse estudo permitem concluir que há uma resistência genética à intoxicação por braquiária em ovinos, uma vez que a progênie dos ovinos resistentes não manifestou a intoxicação. O uso de rebanhos resistentes em pastagens e braquiária é sugerido como uma valiosa opção para prevenir a intoxicação por braquiária em ovinos.

Abstract in English:

ABSTACT.- Rosa F.B., Rubin M.I.B., Martins T.B., Lemos R.A.A., Gomes D.C., Pupin R.C., Lima S.C. & Barros C.S.L. 2016. Spontaneous poisoning by Brachiaria decumbens in goats. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):389-396. Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: claudioslbarros@uol.com.br An outbreak of Brachiaria decumbens poisoning in goats in the state of Mato Grosso do Sul, Brazil, is described. Out of a herd of about 1,000 goats, seven goats died after showing photosensitivity (3 out 7 goats) and icterus (4/7). Other clinical signs included lethargy, dehydration and weight loss (7/7). At necropsy there was either hepatomegaly or liver atrophy; orange, yellow or gray discoloration - were observed in the liver of six goats. Two had accentuation of lobular pattern and punctate, linear or stellar fibrous depressions were randomly distributedover the capsular surface. Macroscopic changesattributedto liver failure consisting of hydropericardium (2/7) and ascites (2/7) were observed. Histologically, there was accumulation of refringent crystals in the bile ducts and infiltration of foamy macrophages in the liver of all goats. Foamy macrophages were also present in the hepatic and mesenteric lymph nodes of two goats. The diagnosis of B. decumbens poisoning was based on epidemiology, clinical signs, necropsy findings and histopathology.

• Poisonous plants Brachiara decumbens saponins photosensitization plant poisoning plantas tóxicas saponinas fotossensibilização intoxicação por plantas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rosa F.B., Rubin M.I.B., Martins T.B., Lemos R.A.A., Gomes D.C., Pupin R.C., Lima S.C. & Barros C.S.L. 2016. Spontaneous poisoning by Brachiaria decumbens in goats. [Intoxicação espontânea por Brachiaria decumbens em caprinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):389-396. Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: claudioslbarros@uol.com.br Relata-se um surto de intoxicação por Brachiaria decumbens em caprinos no estado do Mato Grosso do Sul. De um rebanho de aproximadamente 1.000 caprinos, sete cabras morreram após apresentar fotossensibilização (3 de 7 cabras) e icterícia (4/7). Outros sinais clínicos incluíam apatia, desidratação e emagrecimento (7/7). Todas as cabras tinham alteração no tamanho do fígado - cinco estavam aumentados de volume e dois, diminuídos; o fígado de 6 cabras tinha alteração na cor - dois eram alaranjados, dois amarelados e dois, acinzentados; o fígado de duas cabras tinha acentuação do padrão lobular e outros dois apresentavam depressões fibrosas puntiformes, lineares ou estreladas, brancacentas distribuídas aleatoriamente pela superfície capsular. Adicionalmente, foram observadas alterações macroscópicas atribuídas à insuficiência hepática como hidropericárdio (2/7) e ascite (2/7). Alterações histopatológicas incluíam cristais refringentes nos ductos biliares e infiltrado de macrófagos espumosos no parênquima hepático de todas as cabras. Macrófagos espumosos também foram observados nos linfonodos mesentéricos e hepáticos em duas cabras. O diagnóstico de intoxicação por braquiária foi baseado na epidemiologia, achados clínicos, de necropsia e histopatológicos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Farias T.H.V., Pereira N.L., Pádua S.B., Alves L.O., Sakabe R., Belo M.A.A. & Pilarski F. 2016. Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):431-435. Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista, Rodovia Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: lapoa_caunesp@hotmail.com The present study aimed to evaluate the effects of Na heparin and Na2EDTA on blood of Piaractus mesopotamicus (360.7±42.4g, 26.4±1.0cm). Twenty fishes were sampled in two experiment trials, ten for erythrocyte fragility analysis and ten for hematologic and plasma biochemical study. The blood collected by venous-caudal puncture was fractioned and stored in anticoagulants solution: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, Na heparin 5000 IU and Na heparin 100 IU. Plasmatic levels of calcium presented in the Na2EDTA stored samples were about 80% lower than both heparin groups. Blood samples of P. mesopotamicus stored with Na2EDTA demonstrated increase in the hematocrit and MCV, and decrease in MCHC. The dose-response effect was observed in this study. The results are reinforced by the higher levels of plasmatic protein and hemolysis presented in the Na2EDTA 10% stored blood, confirming the deleterious effect of this anticoagulant treatment on the quality of blood samples. Na2EDTA is not indicated to store P. mesopotamicus blood samples, but sodium heparin at 100 IU is the most recommended anticoagulant, since this treatment presented the lower rate of alterations in the stored blood.

• Fish hematology blood clotting Heparin Piaractus mesopotamicus hematologia de peixes coagulação sanguínea Heparina pacus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Farias T.H.V., Pereira N.L., Pádua S.B., Alves L.O., Sakabe R., Belo M.A.A. & Pilarski F. 2016. Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus. [Anticoagulante Na2EDTA danifica amostras de sangue do teleósteo Piaractus mesopotamicus.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):431-435. Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista, Rodovia Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: lapoa_caunesp@hotmail.com O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da heparina sódica e Na2EDTA no sangue de Piaractus mesopotamicus (360,7±42,4g, 26,4±1,0cm). Foram amostrados vinte peixes em dois ensaios experimentais, sendo dez peixes utilizados para análise da fragilidade dos eritrócitos e dez peixes para análise dos parâmetros hematológicos e estudo bioquímico do plasma. O sangue coletado por punção veno-caudal foi aliquotado e armazenado em diferentes soluções anticoagulantes: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, heparina sódica 5.000 UI e heparina sódica 100 UI. Níveis plasmáticos de cálcio apresentados nas amostras armazenados em Na2EDTA diminuíram cerca de 80% em relação aos dois grupos armazenados com heparina. Amostras de sangue de pacus armazenados com Na2EDTA demonstraram aumento do hematócrito e VCM, e diminuição na CHCM. O efeito dose-resposta foi observado neste estudo. Estes resultados são reforçados pelos níveis mais elevados de proteína plasmática e hemólise apresentado no sangue armazenado com Na2EDTA 10%, o que confirma o efeito deletério desse tratamento anticoagulante na qualidade de amostras de sangue. Na2EDTA não é indicada para armazenar amostras de sangue de P. mesopotamicus, e heparina sódica a 100 UI é o anticoagulante mais recomendado, uma vez que este tratamento apresentou a menor taxa de alterações no sangue armazenado.