Abstract in English:
This study aims to describe the molecular detection of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii, and Neospora caninum in brain samples obtained from bovine fetuses at a slaughterhouse in South Brazil. Brain samples from 35 fetuses of asymptomatic pregnant beef cows underwent nested polymerase chain reaction (PCR) to amplify a fragment of the 18S rRNA gene specific to S. neurona, T. gondii, and N. caninum. The amplicons were subjected to a two-step digestion process: first, with the restriction enzyme DdeI, which differentiates N. caninum from T. gondii and S. neurona; and subsequently, with the HpaII enzyme, to distinguish S. neurona from T. gondii and N. caninum. Of the 35 brain samples tested, 26 yielded positive PCR results for the 18S rRNA gene. Of these, 23 were digested with restriction enzymes, yielding 17 positive samples for S. neurona, five for N. caninum, and one for T. gondii. Specific primers for S. neurona, N. caninum, and T. gondii were employed to confirm the restriction fragment length polymorphism results. DNA sequencing and phylogenetic analysis, based on the ITS-1 region, were conducted on a positive sample for S. neurona, confirming our surprising findings. The sequence from fetus 75 exhibited a high nucleotide identity (97.79%) and clustered with S. neurona sequences available in GenBank. Molecular analyses confirmed the unprecedented detection of S. neurona, a protozoan not previously reported in cattle, in bovine fetal brain samples, thereby underscoring the necessity for further research on Apicomplexa protozoan infections in cattle.
Abstract in Portuguese:
Este estudo tem como objetivo descrever a detecção molecular de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora caninum em amostras de cérebro obtidas de fetos bovinos em um matadouro no Sul do Brasil. Amostras de cérebro de 35 fetos de vacas gestantes assintomáticas foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) aninhada para amplificar um fragmento do gene 18S rRNA específico para S. neurona, T. gondii e N. caninum. Os amplicons foram submetidos a um processo de digestão em duas etapas: primeiro, com a enzima de restrição DdeI, que diferencia N. caninum de T. gondii e S. neurona; e posteriormente, com a enzima HpaII, para distinguir S. neurona de T. gondii e N. caninum. Das 35 amostras de cérebro testadas, 26 apresentaram resultados positivos na PCR para o gene 18S rRNA. Destas, 23 foram digeridas com enzimas de restrição, resultando em 17 amostras positivas para S. neurona, cinco para N. caninum e uma para T. gondii. Primers específicos para S. neurona, N. caninum e T. gondii foram empregados para confirmar os resultados do polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição. Sequenciamento de DNA e análise filogenética, baseada na região ITS-1, foram realizados em uma amostra positiva para S. neurona, confirmando nossos resultados surpreendentes. A sequência do feto 75 apresentou uma alta identidade de nucleotídeos (97,79%) e se agrupou com sequências de S. neurona disponíveis no GenBank. As análises moleculares confirmaram a detecção inédita de S. neurona, um protozoário não anteriormente relatado em bovinos, em amostras de cérebro fetal bovino, destacando assim a necessidade de mais pesquisas sobre infecções por protozoários do filo Apicomplexa em bovinos.
Abstract in English:
Toxoplasma gondii is an intracellular protozoan parasite responsible for toxoplasmosis, with felids serving as its definitive hosts. This neglected zoonotic disease affects both humans and animals worldwide. This study aimed to perform a serological survey and spatial analysis of the occurrence of anti-T. gondii IgG antibodies in cats from the municipality of Maceió, Alagoas. Overall, blood serum samples from 337 adult cats, collected from a private laboratory (137 samples) and the Zoonosis Surveillance Unit (200 samples), were tested using the indirect immunofluorescence test to detect IgG antibodies, with a cutoff dilution of 1:16. Samples with peripheral tachyzoite fluorescence were considered positive. Spatial distribution maps of Maceió’s neighborhoods and Health Districts were designed, and additional factors such as age, sex, and breed were analyzed. Serological analysis revealed that 33.53% (113/337) of the samples were seropositive, with 57.52% (65/113) originating from the private laboratory. The neighborhoods with the highest positivity rates were Ponta Verde, with 14.15% (16/113), and Benedito Bentes, with 11.50% (13/113). Health District I, a coastal and affluent area, had the highest positivity rate at 31.86% (36/113). Age analysis indicated that 60.20% (68/113) of seropositive cats were older than two years, with males comprising 55.75% of the positive cases. Most seroreactive cats were of undefined breed, with 91.15% (103/113). This study seems to be the first serological survey of T. gondii in cats from Maceió, and its findings are consistent with those from other states in northeastern Brazil. Furthermore, it highlights the need to acknowledge the relationship between the occurrence of infection and social vulnerability.
Abstract in Portuguese:
Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular responsável pela toxoplasmose, tendo os felídeos como seus hospedeiros definitivos. Essa doença zoonótica negligenciada afeta tanto humanos quanto animais em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento sorológico e uma análise espacial da ocorrência de anticorpos anti-T. gondii IgG em gatos do município de Maceió, Alagoas. No total, 337 amostras de soro sanguíneo de gatos adultos, coletadas de um laboratório privado (137 amostras) e da Unidade de Vigilância de Zoonoses (200 amostras), foram testadas utilizando o teste de imuno fluorescência indireta para detectar anticorpos IgG, com uma diluição de corte de 1:16. Amostras com fluorescência periférica de taquizoítos foram consideradas positivas. Mapas de distribuição espacial dos bairros e distritos de saúde de Maceió foram elaborados, e fatores adicionais, como idade, sexo e raça, foram analisados. A análise sorológica revelou que 33,53% (113/337) das amostras foram soropositivas, sendo 57,52% (65/113) provenientes de laboratório privado. Os bairros com as maiores taxas de positividade foram Ponta Verde (14,15%; 16/113) e Benedito Bentes (11,50%; 13/113). O Distrito de Saúde I, uma área litorânea e de alto poder aquisitivo, apresentou a maior taxa de positividade, com 31,86% (36/113). A análise etária indicou que 60,20% (68/113) dos gatos soropositivos tinham mais de dois anos de idade, sendo que os machos representaram 55,75% dos casos positivos. A maioria dos gatos sororreativos era de raça indefinida (91,15%; 103/113). Este parece ser o primeiro levantamento sorológico de T. gondii em gatos de Maceió, e seus achados são consistentes com os de outros estados do nordeste do Brasil. Além disso, destaca a necessidade de reconhecer a relação entre a ocorrência da infecção e a vulnerabilidade social.
Abstract in English:
Toxoplasmosis is a disease caused by the obligate intracellular protozoan Toxoplasma gondii, which infects animals and humans worldwide. Felids are definitive hosts that eliminate oocysts, contaminating the environment, food, and water. Among carnivores, cats are the most important hosts for the epidemiology of the disease since a single individual can shed millions of oocysts. Wild canids are considered sentinels and play an essential role in the epidemiology of toxoplasmosis due to tissue cysts in muscle cells, representing a source of infection for carnivores through predation, while environmental contamination is mainly due to oocyst shedding by felids. Free-ranging felids are more likely to be infected by T. gondii than felids living in captivity. The free-living wild canids have lower seropositivity compared to canids in captivity. This review article presents epidemiological data on toxoplasmosis in domestic and wild carnivores in Brazil, targeting professionals in clinical practice, veterinary pathology, diagnostics, and One Health. Therefore, we understand the importance of disseminating diagnoses, epidemiological investigations and animal health programs to control, prophylaxis and treat toxoplasmosis in domestic and wild carnivores.
Abstract in Portuguese:
A toxoplasmose é uma doença causada pelo protozoário intracelular obrigatório Toxoplasma gondii, responsável por infectar animais e seres humanos em todo o mundo. Os felinos são hospedeiros definitivos e eliminam oocistos que contaminam o ambiente, alimentos e água. Dentre os carnívoros, os felinos são os hospedeiros mais importantes para a epidemiologia da doença, visto que um único indivíduo é capaz de excretar milhões de oocistos. Canídeos selvagens são considerados sentinelas e desempenham um papel essencial na epidemiologia da toxoplasmose, pois os cistos teciduais presentes nas células musculares representam uma fonte de infecção para carnívoros por meio da predação, enquanto a contaminação ambiental ocorre principalmente pela eliminação de oocistos por felídeos. Os felinos de vida livre têm maior probabilidade de serem infectados por T. gondii do que os felinos mantidos sob cuidados humanos. Os canídeos silvestres de vida livre apresentam menor soropositividade em comparação aos canídeos em cativeiro. Este artigo de revisão apresenta dados sobre a epidemiologia da toxoplasmose em carnívoros domésticos e silvestres no Brasil focado para profissionais da área clínica, patologia veterinária, diagnóstico e Saúde Única. Portanto entendemos a importância de divulgação de métodos de diagnósticos, investigações epidemiológicas e programas de saúde animal para contribuir com o controle, profilaxia e tratamento da toxoplasmose em carnívoros domésticos e silvestres.
Abstract in English:
Toxoplasma gondii can be eliminated in bovine semen. Cryopreserved semen is often used due to the fact that artificial insemination in dairy and beef cattle provides benefits in terms of production. However, little is known regarding the viability and infectivity of T. gondii tachyzoites in cryopreserved bovine semen. In the present study, cattle semen negative for T. gondii were contaminated with 1 x 106 tachyzoites (RH strain) and cryopreserved with and without different cryoprotectants, such as DMSO (concentrations of 2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and glycerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% and 10.0%), followed by freezing in liquid nitrogen (-196°C). After 24 hours, the samples were thawed and inoculated in 10 mice per cryoprotectant concentration. The mice were evaluated for clinical signs of toxoplasmosis (rough coat, diarrhea, hypoactivity and sudden death) as well as serum titers of IgM and IgG and the presence of tachyzoites in the peritoneal lavage. The results revealed that T. gondii remained infective in all samples. Clinical signs of toxoplasmosis were observed in the mice beginning with the 6th day post-inoculation (DPI) and 100% lethality was found between the 7th and 9th DPI. Viable tachyzoites were recovered from peritoneal exudate of dead mice (except for the control group), with higher mean of tachyzoite counts in the intraperitoneal lavage for 5% DMSO (±3.32 x 106), 8% DMSO (±3.53 x 106), 3% glycerol (±4.75 x 106), 7.5% glycerol (±6.26 x 106) and the absence of cryoprotectant (±3.11 x 106). Seroconversion occurred in the treated groups, with titers of IgG from 1:16 to 1:128 and IgM from 1:16 to 1:512. T. gondii viability and infectivity were maintained in cattle semen during 24 hours of cryopreservation at -196°C with and without cryoprotectant. However, further studies are necessary to determine whether cryopreserved semen contributes to the spread of toxoplasmosis through artificial insemination.
Abstract in Portuguese:
Sabe-se que Toxoplasma gondii pode ser eliminado no sêmen bovino. A inseminação artificial em bovinos leiteiros e de corte proporcionou avanços e benefícios nas produções e para isso o sêmen criopreservado é frequentemente utilizado. No entanto, pouco se sabe sobre a viabilidade e infectividade dos taquizoítos de T. gondii em sêmen bovino criopreservado. Para isso o sêmen bovino, negativo para T. gondii, foi contaminado com 1x106 taquizoítos (cepa RH), criopreservados com ou sem diferentes crioprotetores como DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% e 10.0%) e Glicerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% e 10.0%) e congelados em nitrogênio líquido (-196°C). Após 24 horas, essas amostras foram descongeladas e inoculadas em 10 camundongos por diluente de concentração de crioprotetor. Os camundongos foram avaliados quanto a sinais clínicos de toxoplasmose (pele áspera, diarreia, hipoatividade e morte súbita), títulos séricos de IgM e IgG e presença de taquizoítos no lavado peritoneal. Os resultados mostraram que T. gondii se manteve infectante em todas as amostras, inclusive naquelas sem crioprotetor. Sinais clínicos de toxoplasmose foram observados nos camundongos a partir do 6º dia pós-inoculação (DPI) e 100% de letalidade foi verificada entre o 7º ao 9º DPI. Nos camundongos mortos, exceto no grupo controle, taquizoítos viáveis foram recuperados do exsudato peritoneal, com maior média de taquizoítos quantificados na lavagem intraperitoneal para DMSO a 5% (±3.32x106), 8% (±3.53x106) e glicerol 3% (±4.75x106), 7,5% (±6.26x106) e livre de crioprotetor (±3.11x106). A soroconversão ocorreu nos grupos tratados com títulos de IgG (1:16 a 1:128) e IgM (1:16 a 1:512). A viabilidade e infectividade do T. gondii no sêmen bovino durante as 24 horas de criopreservação a -196°C foram mantidas com ou sem crioprotetor. No entanto, mais estudos são necessários para verificar se o sêmen criopreservado contribui para a disseminação da toxoplasmose na inseminação artificial.
Abstract in English:
Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. are parasites detected in tissues of domestic and wild animals. Birds are relevant in the life cycle and epidemiology of protozoa due to the wide variety of bird species, feeding and migratory habits. The aim of this study was the molecular detection of T. gondii, N. caninum and Sarcocystis spp. in several species of naturally infected birds. Therefore, samples of brain and heart tissue were collected from birds received and necropsied at the Central Laboratory for the Diagnosis of Avian Pathologies (LCDPA), undergoing DNA extraction and amplification by the polymerase chain reaction (PCR) of the 18S rRNA gene to Sarcocystis spp., NC5 gene for N. caninum and repetitive gene 529 base pairs for T. gondii. N. caninum was detected in two birds (02/65, 3.07%), in a brain sample of Rupornis magnisrostris (accession number: ON182081, 267pb) and in a brain and heart sample of Dendrocygna bicolor (accession number: ON211312, 267pb). DNA of the genus Sarcocystis was detected in three birds (03/65, 4.62%), and in the genetic sequencing Sarcocystis spp. (accession number: MW463929) in brain of Nymphicus hollandicus and Sarcocystis speeri (accession number: MW464125) in brain and heart of Amazona aestiva. Phylogenetic analysis revealed that Sarcocystis spp. formed a clade with Sarcocystis spp. that use skunk (Didelphis aurita) as definitive host and Sarcocystis falcatula that use Moluccan loris (Trichoglossus moluccanus) as intermediate host. S. speeri formed a clade with S. speeri that used Mus musculus as an experimental intermediate host and formed a clade with Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti and Sarcocystis sp. that affect bird species. T. gondii DNA was not detected in any tissue. This is the first report of DNA detection of N. caninum, Sarcocystis spp. and S. speeri in tissue samples for these bird species extending the list of intermediate hosts.
Abstract in Portuguese:
Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. são parasitas detectados em tecidos de animais domésticos e selvagens. As aves são relevantes no ciclo de vida e epidemiologia dos protozoários devido à grande variedade de espécies de aves, hábitos alimentares e migratórios. O objetivo deste estudo foi a detecção molecular de T. gondii, N. caninum e Sarcocystis spp. em diversas espécies de aves naturalmente infectadas. Portanto, amostras de tecido de cérebro e coração foram coletados de aves recebidas e necropsiadas no Laboratório Central de Diagnóstico de Patologias Aviárias (LCDPA), sendo submetidas a extração de DNA e amplificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene 18S rRNA para Sarcocystis spp., gene NC5 para N. caninum e gene repetitivo 529 pares de bases para T. gondii. N. caninum foi detectado em duas aves (02/65; 3,07%), em amostra de cérebro de Rupornis magnisrostris (número acesso: ON182081, 267pb) e em amostras de cérebro e coração de Dendrocygna bicolor (número acesso: ON211312, 267pb). DNA do genero Sarcocystis spp. foi detectado em três aves (03/65; 4,62%), sendo que no sequenciamento genético foram identificados Sarcocystis spp. (número acesso: MW463929) em cérebro de Nymphicus hollandicus e Sarcocystis speeri (número acesso: MW464125) em cérebro e coração de Amazona aestiva. A análise filogenética revelou que Sarcocystis spp. formou um clado com Sarcocystis spp. que utilizam gambá (Didelphis aurita) como hospedeiro definitivo e S. falcatula que utilizam Lóris-molucano (Trichoglossus moluccanus) como hospedeiro intermediário. S. speeri formou um clado com S. speeri que utilizou Mus musculus como hospedeiro intermediário experimental e formou um clado com Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti e Sarcocystis sp. que afetam espécies de aves. O DNA de T. gondii não foi detectado em nenhum tecido. Este é o primeiro relato de detecção de DNA de N. caninum, Sarcocystis spp. e S. speeri em amostras de tecido para essas espécies de aves estendendo a lista de hospedeiros intermediários.
Abstract in English:
The objective was to determine, through indirect immunofluorescence reaction (RIFI, 1:64), the occurrence of IgG antibodies to Toxoplasma gondii and the risk factors associated with infection in goats in the state of Sergipe. To this study were used 675 samples of blood of animals from 41 farms of the three state mesoregions from 2013 to 2014. The occurrence of seropositive goats was 30.07%, with 90.24% of farms with seropositive animals. The distribution of titers obtained was 37.93%, 11.82%, 17.24%, 18.22%, and 17.77% for 64, 128, 512 and 1024 respectively. The risk factors observed were farms that did not have facilities (p=0.000, OR=2.30, CI 95%=1.41-3.74), with flooded soils (p=0.011, OR=2.94, CI 95%=1.27-6.79), which provided feed on the ground (p=0.032, OR=1.69, CI 95%=1.04-2.74), in uncovered cages (p=0.032, OR=1.69, CI 95%=1.04-2.74), pasture-based feed (p=0.003, OR=3.52, CI 95%=1.53-8.09), with access from cats to (p=0.031, OR=1.45, CI 95%=1.03-2.04) and introduced new breeders in the last five years (p=0.036, OR=1.58, CI 95%=1.02-2.74).
Abstract in Portuguese:
O objetivo desse estudo foi determinar, através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI, 1:64), a ocorrência de anticorpos IgG para o Toxoplasma gondii e os fatores de risco associados à infecção em rebanhos caprinos do estado de Sergipe, a partir de 675 amostras de sangue de animais de 41 propriedades das três mesorregiões do estado entre os anos de 2013 e 2014. A ocorrência de caprinos soropositivos foi de 30,07% com 90,24% de propriedades com animais soropositivos. A distribuição dos títulos obtidos foi de 37,93%, 11,82%, 17,24%, 18,22% e 17,77% para 64, 128, 512 e 1024 respectivamente. Os fatores de riscos observados foram propriedades que não possuíam instalações (p=0,000, OR=2,30, IC 95%=1,41-3,74), com terrenos alagados (p=0,011, OR=2,94, IC 95%=1,27-6,79), que disponibilizam a ração no chão (p=0,032, OR=1,69, IC 95%=1,04-2,74), em cochos descobertos (p=0,000, OR=1,97, IC 95%=1,32-2,94), alimentação à base de pastagem (p=0,003, OR=3,52, IC 95%=1,53-8,09), com acesso de gatos à fonte de água (p=0,031, OR=1,45, IC 95%=1,03-2,04) e que introduziram novos reprodutores nos últimos cinco anos (p=0,036, OR=1,58, IC 95%=1,02-2,74).
Abstract in English:
The objective was to evaluate the occurrence, clinical signs and risk factors associated with seropositivity to Toxoplasma gondii and Neospora caninum in sheep. We used 294 sheep with history of reproductive disorders from 28 farms located in the state of São Paulo, southeastern Brazil. Producers were interviewed, and blood samples were collected to perform indirect immunofluorescence tests (1:64 and 1:50 respectively). The frequency of T. gondii infection was found to be 29.9% (88/294), the frequency of N. caninum was 18% (53/294), and 3.7% (11/294) of the sheep were seropositive for both. We observed the following risk factors associated with T. gondii infection: crossbred sheep (p=0.04), Santa Inês breed (p=0.006), pasture supply (p<0.001) or associated with concentrate (p<0.001), exclusive use of natural breeding (p=0.002), and presence of birds on farms (p=0.001). For N. caninum the factors were: female sheep (p=0.031), absence of barns (p<0.001), and semi-intensive system (p<0.001). In relation to the history of reproductive problems, N. caninum and T. gondii infected sheep presented a reduction in the risk of having an abortion (p=0.044) and repeated estrus (p=0.025) respectively. T. gondii was more serologically present than N. caninum in sheep with a history of reproductive disorders and, despite their similarities, differed epidemiologically in aspects related to breeding characteristics such as race, sex, breeding system, type of feeding and reproductive management.
Abstract in Portuguese:
Objetivou-se avaliar a ocorrência, sinais clínicos e fatores de risco associados a soropositividade para Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos. Foram utilizados 294 animais com histórico de distúrbios reprodutivos de 28 fazendas do estado de São Paulo, Brasil, diagnosticados através da imunofluorescência indireta (1:64 e 1:50). A ocorrência de T. gondii foi de 29,9% (88/294) e de N. caninum 18% (53/294), sendo 3,7% (11/294) dos ovinos soropositivos para ambos. Observou-se com maiores chances à infecção pelo T. gondii: ovinos mestiços (p=0,04), Santa Inês (p=0,006), fornecimento de pastagem (p<0,001) ou associada a concentrado (p<0,001), uso exclusivamente de monta natural (p=0,002, OR=2,28 e IC95%=1,37-3,79) e a presença de aves nas propriedades (p=0,001). Na infecção por N. caninum essa chance aumentou em: fêmeas (p=0,031), propriedades sem aprisco (p<0,001) e sistema de criação semi-intensivo (p<0,001). Em relação ao histórico de problemas reprodutivos, ovelhas infectadas pelo N. caninum e T. gondii apresentaram redução da chance de apresentarem abortamento (p=0,044) e repetição de estro (p=0,025) respectivamente. O T. gondii esteve mais presente sorologicamente que o N. caninum em ovinos com histórico de distúrbios reprodutivos e apesar de suas semelhanças, diferiram epidemiologicamente em aspectos relacionados as características da criação como raça, sexo, sistema de criação, tipo de alimentação e manejo reprodutivo.
Abstract in English:
Samples of 303 horses from 56 ranches of Rorainópolis municipality, state of Roraima, were evaluated by means of the Indirect Immunofluorescence Test (IFAT) to detect antibodies against Sarcocystis spp., Toxoplasma gondii and Neospora spp. A subset of positive sample (n=15) against Sarcocystis spp. was evaluated by Western Blotting (WB) with crude antigen of S. neurona. From the serological result, possible risk factors were evaluated against individual or farming variables. The prevalence of anti-Sarcocystis spp. antibodies was estimated to be 43.2% (37.6-49.0%), anti-Neospora sp. was 26.7% (21.9-32.2%), and anti-T. gondii was 18.5% (14.3-23.4%). Fourteen samples (14/15) evaluated by WB were positive for S. neurona antigens. From the ranches, 76.8% (43/56) presented at least one positive horse for Sarcocystis spp., 69.6% (39/56) for Neospora spp., and 55.4% (31/56) for T. gondii. Thirteen (14.3%) horses had antibodies against all agents, 50 (16.5%) had antibodies against Sarcocystis spp. and Neospora spp., 10 (3.3%) for Neospora spp. and T. gondii, and eight (2.6%) for Sarcocystis spp. and T. gondii. Associated variables (P≤0.05) for antibodies against Neospora spp. were not found in horses fed on rented pastures, not in horses without veterinary assistance and stables, and not in herds up to 5 horses; while they were associated for T. gondii by contact with cats, in the Lavradeiro breed with use of stables, in horses raise with cattle, and in herds up to 5 horses. There were no variables associated with the presence of antibodies against S. neurona. Antibodies against S. neurona, Neospora spp. and T. gondii were reported in horses from the state of Roraima, Northern Brazilian Amazon, highlighting to the elevate prevalence on ranches.
Abstract in Portuguese:
Amostras de sangue de 303 equinos provenientes de 56 propriedades do município de Rorainópolis, Roraima, foram avaliadas por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIF) para pesquisa de anticorpos contra Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp. Algumas amostras de soros positivos para Sarcocystis spp. foram avaliadas pelo Western Blotting (WB) utilizando antígenos crus de S. neurona. A partir dos resultados sorológicos, possíveis fatores de risco foram avaliados frente a variáveis individuais e de propriedade. A prevalência de anticorpos anti-Sarcocystis spp. foi estimada em 43,2% (37,6-49,0%), anti-Neospora sp. em 26,7% (21,9-32,2%) e anti-T. gondii de 18,5% (14,3-23,4%). Quatorze amostras (14/15) testadas por WB resultaram positivas para antígenos de S. neurona. Das propriedades, 76,8% (43/56) apresentaram pelo menos um equino positivo para Sarcocystis spp.; 69,6% (39/56) para Neospora spp. e 55,4% (31/56) para T. gondii. Dos equinos, 13 (4,3%) apresentarem anticorpos para os três agentes, 50 (16,5%) para Sarcocystis spp. e Neospora spp., 10 (3,3%) para Neospora spp. e T. gondii, e oito (2,6%) para Sarcocystis spp. e T. gondii. As variáveis associadas (P≤0,05) à presença de anticorpos foram: para Neospora spp. não pastejar em áreas alugadas, ausência de assistência veterinária na propriedade, sexo masculino, não estabular animais e plantel equino acima de 5 animais; enquanto para T. gondii foram o contato com felinos, animais da raça lavradeiro, animal estabulado, criação de bovinos na propriedade e plantel equino acima de 5 animais. Não houveram variáveis associadas a presença de anticorpos contra S. neurona. Relata-se no presente estudo a primeira detecção de anticorpos anti-S. neurona, Neospora spp. e T. gondii em equinos do estado de Roraima, localizado na Amazônia Setentrional Brasileira, ressaltando para a elevada frequência de fazendas com equinos soropositivos.
Abstract in English:
Toxoplasma gondii is an apicomplex protozoan that infects warm-blooded animals and can be considered a major parasite capable of infecting humans. Domestic chickens can be easily infected by protozoa, since they can ingest oocysts found in the soil and are considered good indicators of environmental contamination by T. gondii. The aim of this study was to determine the presence of anti-T. gondii antibodies in free range chickens and to evaluate the risks factors associated with the protozoan in rural area of Santa Maria, RS, Brazil. From March 2013 to February 2014, 597 blood samples from domestic chickens were collected from 74 farms, from nine layers representing each district in the rural area. To evaluate the risk factors, in these farms an epidemiological questionnaire was applied to the residents. Serum samples were tested by indirect immunofluorescence and 49.2% (294/597) were positive for anti-T.gondii antibodies, with titres varying from 16 to 4096. Of the 74 analyzed farms, 63 (85.1%) reported that cats had access to food deposits, with a significant association when positive chickens were present (p = 0.04) and the OR of 4.07. The variable “slaughter of animals” (poultry and cattle) in 51 (68.9%) of the farms was reported the slaughter of cattle and birds in the farm, with significant p value (p = 0.05). Most farms 59 (79.7%) reported the presence of domestic cats, which could be associated with the high seroprevalence found in chickens and the rate of environmental contamination. The high prevalence of antibodies found in this study, in addition to the high frequency of farms with positive cases, suggests a great environmental contamination in the studied districts, thus being a potential risk to human and animal health.
Abstract in Portuguese:
Toxoplasma gondii é um protozoário apicomplexa que infecta animais de sangue quente, podendo ser considerado um dos principais parasitas capazes de infectar os seres humanos. Galinhas domésticas podem ser facilmente infectadas por protozoários, uma vez que estas podem ingerir oocistos encontrados no solo, sendo consideradas boas indicadoras de contaminação ambiental por T. gondii. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-T. gondii em galinhas domésticas criadas extensivamente e avaliar os fatores de risco associados ao protozoário, na zona rural de Santa Maria, RS, Brasil. No período de março de 2013 a fevereiro 2014 foram coletadas 597 amostras de sangue de galinhas domésticas em 74 propriedades, oriundas de nove estratos que representam cada distrito da zona rural. Para avaliar os fatores de risco, nessas propriedades foi aplicado um questionário epidemiológico aos moradores. As amostras de soro foram testadas por imunofluorescência indireta, e 49,2% (294/597) foram positivas para anticorpos anti-T. gondii, com títulos variando de 16 a 4096. Das 74 propriedades analisadas, em 63 (85,1%) houve relatos que os gatos têm acesso ao deposito de alimentos, com associação significativa quando associado à presença de galinhas positivas (p=0,04) e o OR de 4,07. A variável “abate de animais” (aves e bovinos), em 51 (68,9%) das propriedades foi relatado o abate de bovinos e aves na propriedade, com valor de p significativo (p=0,05). A maioria das propriedades 59 (79,7%) foi relatada a presença de gatos domésticos, o que poderia estar associada com a alta soroprevalência encontrada em galinhas e a taxa de contaminação ambiental. A elevada prevalência de anticorpos encontrada neste estudo, além da alta frequência de propriedades com casos positivos, sugere uma grande contaminação ambiental nos distritos pesquisados, sendo assim um risco potencial para a saúde humana e animal.
Abstract in English:
The protozoan Toxoplasma gondii has the ability to infect several animal species, usually causing reproductive disorders. Four different isolates of T. gondii - Pains #1 (P1), Pains #2 (P2), Santa Flora #1 (SF1) and Santa Flora #306 (SF306) were evaluated with prior genotyping. Their virulence and multiplication capacity were analyzed in vitro (Vero cells) and in vivo (mice). For each isolate, three passages were performed with dose inoculation 1x104 tachyzoites at each passage. The mice were daily observed to verify of clinical signs and occurrence of mortality after tachyzoites inoculation. The SF1 isolate and SF306 isolate, presented the highest multiplication of the total tachyzoites number in each of the 3 different passages performed in vitro and in vivo. The initial clinical signs in mice were observed between 5 and 11 days, and occurring mortality between 6 and 15 days, after inoculation. Thus, the parasitic multiplication of theses isolates is similar in vitro and in vivo; different isolates within the same genotype have a similar virulence and the SF1 isolate is the most virulent for mice.
Abstract in Portuguese:
O protozoário Toxoplasma gondii possui a capacidade de infectar diversas espécies animais, geralmente causando distúrbios reprodutivos. Quatro diferentes isolados de T. gondii - Pains #1 (P1), Pains #2 (P2), Santa Flora #1 (SF1) e Santa Flora #306 (SF306) - foram avaliados, após prévia genotipagem. A capacidade de multiplicação e virulência destes isolados foi analisada in vitro (células Vero) e in vivo (camundongos), sendo realizadas 3 passagens para cada isolado em cada modo avaliado, sendo sempre inoculada a dose de 1x104 taquizoítos em todas as passagens. Os camundongos eram observados diariamente, quanto à presença de sinais clínicos e ocorrência de mortalidade após inoculação dos taquizoítos. Os isolados SF1 e SF306, foram os que apresentaram maior multiplicação média do número total de taquizoítos em cada uma das 3 diferentes passagens realizadas para cada um dos isolados tanto in vitro quanto in vivo. Os primeiros sinais clínicos observados nos camundongos ocorreram entre os dias 5 a 11, após inoculação, com mortalidade acontecendo entre os dias 6 a 15, após inoculação. Assim, a multiplicação parasitária in vitro é semelhante à multiplicação in vivo destes isolados de T. gondii; diferentes isolados com o mesmo genótipo apresentam comportamento de virulência semelhante, caracterizando o isolado SF1 como mais virulento para camundongos.