PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Souza W.L., Moraes E.A., Costa J.M.S., Souza P.H.F., Lopes Junior E.S., Oliveira R.P. & Toniolli R. 2016. [Effect of different concentrations of melatonin to ram spermatozoa on oxidative stress after cryopreservation.] Efeito de diferentes concentrações de melatonina em espermatozoides de carneiros sobre estresse oxidativo após criopreservação. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):657-664. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Fundação Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia 407 Km 12, Lote 543, Projeto Nilo Coelho C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: wilde@zootecnista.com.br The aim was to evaluate the effect of adding different concentrations of melatonin in ram semen diluted after cryopreservation. Ten ejaculates were collected0 from three adult ram (n=30) by means of artificial vagina for sheep. The collected samples were diluted in Tris-egg yolk, to a final concentration 200x106 sptz/mL kept in water bath at 32°C, and melatonin added as treatments: control; 100pM; 100nM; 100&#956;M and 1mM melatonin. Then, the samples were cooled in a cold chamber at 5°C for two hours, in straws of 0.5mL and sealed. They were stored under the liquid nitrogen vapor for 15 minutes to 8cm of liquid blade and frozen with liquid nitrogen. Samples were analyzed for sperm motility, membrane integrity, acrosomal membrane, mitochondrial activity, oxidative stress and quantification of the binding capacity. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared by Tukey test at 5% probability. The total and progressive motility of thawed sperm were higher in samples treated with 100pM melatonin (62.99 and 45.07%, respectively; P<0.05) when compared to other treatments. The addition of different concentrations of melatonin in semen diluted with the exception of 1mM concentration, a higher percentage of cells with intact plasma membrane, as compared with the control (P<0.05). The percentage of sperm with acrosome membrane integrity was higher in the semen with 100pM melatonin (P<0.05) than the other treatments. The high mitochondrial activity was higher in spermatozoa treated with 100pM melatonin (69.30%; P<0.05). Addition of 100nM melatonin reduced the amount of TBARS after cryopreservation (2.84, P<0.05) when compared with the other treatments. After thawing, the number of sperm which bind to the perivitelline membrane was higher in the melatonin treated with 100pM (155,73; P<0.05). Therefore, melatonin addition the semen diluted can be useful to enhance the cryopreservation of sheep semen, improving fertilization rates through artificial insemination.

• Melatonin antioxidant freezing spermatozoa stress melatonina congelamento

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Souza W.L., Moraes E.A., Costa J.M.S., Souza P.H.F., Lopes Junior E.S., Oliveira R.P. & Toniolli R. 2016. [Effect of different concentrations of melatonin to ram spermatozoa on oxidative stress after cryopreservation.] Efeito de diferentes concentrações de melatonina em espermatozoides de carneiros sobre estresse oxidativo após criopreservação. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):657-664. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Fundação Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia 407 Km 12, Lote 543, Projeto Nilo Coelho C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: wilde@zootecnista.com.br Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído de carneiros após criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Os ejaculados coletados foram diluídos em Tris-Gema de ovo, para a concentração final de 200x106 sptz/mL, mantidos em banho maria a 32°C, e a melatonina adicionada conforme os tratamentos: Controle; 100pM; 100nM; 100&#956;M e 1mM de melatonina. Então, as amostras foram resfriadas em câmara fria a 5°C por duas horas, envasadas em palhetas de 0,5 mL e lacradas. Logo após, foram acondicionadas sob vapores do nitrogênio liquido, por 15 minutos, a 8cm da lâmina líquida e congeladas com nitrogênio líquido. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática, membrana acrossomal, atividade mitocondrial, quantificação do estresse oxidativo e a capacidade de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A motilidade total e progressiva dos espermatozoides descongelados foi maior nas amostras tratadas com 100pM de melatonina (62,99 e 45,07% respectivamente; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. A adição das diferentes concentrações de melatonina no sêmen diluído, com exceção da concentração de 1 mM, apresentou maior percentual de células com membrana plasmática íntegra, quando comparadas com o controle (P<0,05). O percentual de espermatozoides com integridade da membrana do acrossoma foi maior no sêmen tratado com 100 pM de melatonina (P<0,05) do que nos demais tratamentos. A alta atividade mitocondrial foi maior nos espermatozoides tratados com 100 pM de melatonina (69,30%; P<0,05). A adição de 100 nM de melatonina reduziu a quantidade de TBARS após a criopreservação (2,84; P<0,05) quando comparado aos demais tratamentos. Após o descongelamento, o número de espermatozoides que se ligaram à membrana perivitelina foi maior nos tratados com 100 pM de melatonina (155,73; P<0,05). Portanto, a adição de melatonina no sêmen diluído pode ser útil para aperfeiçoar a criopreservação do sêmen de ovinos, melhorando as taxas de fertilização por meio da inseminação artificial.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pazinato F.M., Curcio B.R., Fernandes C.G., Feijó L.S., Schmith R.A. & Nogueira C.E.W. 2016. Histological features of the placenta and their relation to the gross and data from Thoroughbred mares. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):665-670. Departamento de Clínicas Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Universitário s/n, Capão do Leão, RS 96160-000, Brazil. E-mail: fernandampazinato@yahoo.com.br The placenta is a transitory organ that originates from maternal and fetal tissues, the function of which is transporting nutrients from the mother to the fetus. The aim of this study was describe the histological features of placentas in healthy Thoroughbred mares at foaling and evaluate their relation with the gross placental and data of these mares. For this study 188 Thoroughbred mares were used. It was performed clinical observation for signs of placentitis during daily health checks and ultrasonic examination monthly to assess the fetus and placenta. All of the mares that exhibited clinical signs of placentitis were treated during gestation. The parturition was assisted, the placentas were grossly evaluated and samples were collected immediately after expulsion. The following data were considered for each mare: age, gestational age, number of parturition, time for placental expulsion, umbilical-cord length, placental weight and clinical signs of placentitis. Histological evaluation of the placentas revealed extensive cytoplasmic vacuolization of the epithelial areolar cells, presence of inflammatory infiltrates and hypoplasia-atrophy of the microcotyledons. Most of the gross placental findings were consistent with the histological results. In conclusion the mares with a vacuolated placental chorionic epithelium were older and had experienced a larger number of births. Great part of the mares with inflammatory infiltrates did not showed any clinical signs of placentitis during gestation.

• Placenta Thoroughbred mares éguas Puro Sangue Inglês

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pazinato F.M., Curcio B.R., Fernandes C.G., Feijó L.S., Schmith R.A. & Nogueira C.E.W. 2016. Histological features of the placenta and their relation to the gross and data from Thoroughbred mares. [Achados histológicos da placenta e sua relação com seus aspectos macroscópicas e dados de éguas Puro Sangue Inglês.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):665-670. Departamento de Clínicas Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Universitário s/n, Capão do Leão, RS 96160-000, Brazil. E-mail: fernandampazinato@yahoo.com.br A placenta é um órgão transitório originado do tecido fetal e materno, com função de transportar nutrientes da mãe para o feto. O objetivo deste estudo foi descrever os achados histológicos das placentas de éguas Puro Sangue Inglês (PSI) a termo e avaliar sua relação com a macroscopia da placenta e dados dessas éguas. O estudo utilizou 188 éguas PSI. Foram realizadas observações clinicas diárias para presença de sinais clínicos de placentite e ultrassonografia mensal para avaliar saúde do feto e placenta. As éguas que apresentaram sinais clínicos de placentite durante a gestação foram tratadas. Os partos foram assistidos, as placentas avaliadas macroscopicamente e coletadas imediatamente após sua expulsão. Como dados das éguas foram considerados: idade, tempo de gestação, número de partos, tempo de eliminação da placenta, comprimento de cordão umbilical, peso da placenta e sinais clínicos de placentite. A avaliação histológica das placentas demonstrou extensiva vacuolização citoplasmática das células do epitélio coriônico das regiões areolares, presença de infiltrados inflamatórios e hipoplasia-atrofia de microcotilédones. A maior parte dos achados macroscópicos da placenta foram condizentes com os resultados de histologia. Como conclusão, a vacuolização do epitélio coriônico foi característica de éguas mais velhas e com maior número de partos. Grande parte das éguas com infiltrados inflamatórios não demonstraram sinais clínicos de placentite.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Karam R.G., Cury F.S., Ambrósio C.E. & Mançanares C.A.F. 2016. [Gliceryn can replace formaldehyde for anatomic conservation.] Uso da glicerina para a substituição do formaldeído na conservação de peças anatômicas. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):671-675. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 17, Piso Superior, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508 270, Brazil. E-mail: fcury@usp.br The formalization is the main form of body and anatomic conservation, mainly due to its low cost. The technique is based on the use of formaldehyde (5-20%) as fixative and preservative. However there are several negative factors on their use, unpleasant smell, browning, weight gain and stiffness of parts and serious environmental problems if disposed of incorrectly, and is a product classified by the International Agency for Research on Cancer as highly carcinogenic. There are several options to replace formaldehyde and glicerinação is one of them, whose which will be treated in this work. Glycerin dehydrates the cell and acts as antifungal and antibacterial, and has many advantages compared to formaldehyde. But its cost is still high and this explains their limited use in the anatomy lab. This work aims to show the advantages of using glycerin in relation to formaldehyde and propose a possible replacement of this carcinogen to preserve the health of students, staff and teachers within the laboratory, and allows a more pleasant environment for learning.

• Glycerination formalization glicerinação formalização

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Karam R.G., Cury F.S., Ambrósio C.E. & Mançanares C.A.F. 2016. [Gliceryn can replace formaldehyde for anatomic conservation.] Uso da glicerina para a substituição do formaldeído na conservação de peças anatômicas. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):671-675. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 17, Piso Superior, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508 270, Brazil. E-mail: fcury@usp.br A formalização é a principal forma de conservação de corpos e peças anatômicas, devido principalmente ao seu baixo custo. A técnica baseia-se na utilização do formaldeído (5-20%) como fixador e conservador. Entretanto existem vários fatores negativos à sua utilização, como odor desagradável, escurecimento, aumento de peso e rigidez das peças e sérios problemas ambientais quando descartada de forma incorreta, além de ser um produto classificado pela Agência Internacional de Pesquisas em Câncer como altamente cancerígeno. Existem várias opções para substituir o formaldeído, a glicerinação é uma delas, cujo será tratada neste trabalho. A glicerina atua como antifúngico e bactericida, além de ter muitas vantagens em relação ao formol, tratando-se de odor, textura e coloração, além de não ser prejudicial a saúde. Porém o seu custo ainda é elevado e isso explica sua pouca utilização em laboratórios de anatomia. Este trabalho tem como objetivo mostrar as vantagens do uso da glicerina em relação ao formol e propor uma possível substituição deste produto cancerígeno para preservar a saúde dos alunos, funcionários e professores dentro do laboratório, além de permitir um ambiente mais agradável para o aprendizado.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Yamada A.L.M., Alvarenga M.L., Brandão J.S., Watanabe M.J., Rodrigues C.A., Hussni C.A. & Alves A.L.G. 2016. [PRP-gel scaffold associated with mesenchymal stem cells: use in experimental chondral defect of equine models.] Arcabouço de PRP-gel associado a células tronco mesenquimais: uso em lesões condrais em modelo experimental equino. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):461-467. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: anaalves@fmvz.unesp.br The platelet-rich plasma (PRP) is characterized by its anabolic, anti-inflammatory and gelling capability. Nowadays, the PRP is considered effective in the repair of cartilage defects, and its gelling capability is proper to filling chondral defects. So, the aim of this study was to investigate the use of activated PRP as a fibrin gel scaffold, such as support for the use with mesenchymal stem cells (MSC), on the treatment of experimentally chondral articular defects. Twelve horses were subjected to an arthroscopic surgery at time zero of the experiment (T0). A chondral defect of 15 mm diameter was created on the medial femoral trochlea and these 12 joints were divided into two groups each with six joints in each group (GA and GB). The joints of the GA were treated with implantation of MSC and PRP-gel. GB joints were the control group. MSCs were cultivated from adipose tissue and PRP-gel was obtained by double centrifugation protocol followed by addition of lyophilized thrombin. After five months (T150) was performed new arthroscopy for macroscopic evaluation of the defect local, collect samples of tissue repair for electron microscopy assessment and also was implemented a magnetic resonance images and computed tomography on GA. It was observed that the PRP-gel associated with CTMs showed a suitable treatment of experimental chondral defects in horses. GA showed a better macroscopic and microscopic appearance of the tissue repair. GB showed smaller number of chondrocytes and increased collagen fibers disorganization. At the magnetic resonance and computed tomography imaging only the local of chondral defect was viewed. The PRP-gel scaffold was satisfactory to use and support MSCs implantation. It showed an easy handling and it was effective, showing a promising results in the repair of induced chondral defects.

• Mesenchymal stem cells platelet-rich plasma scaffold stem cells células tronco mesenquimais plasma rico em plaquetas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Yamada A.L.M., Alvarenga M.L., Brandão J.S., Watanabe M.J., Rodrigues C.A., Hussni C.A. & Alves A.L.G. 2016. [PRP-gel scaffold associated with mesenchymal stem cells: use in experimental chondral defect of equine models.] Arcabouço de PRP-gel associado a células tronco mesenquimais: uso em lesões condrais em modelo experimental equino. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):461-467. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: anaalves@fmvz.unesp.br O plasma rico em plaquetas (PRP) é conhecido por apresentar propriedades anabólicas, anti-inflamatórias e capacidade de gelificação. Atualmente o PRP é considerado eficaz na reparação da cartilagem, sendo sua capacidade de formação de gel indicada para o preenchimento de defeitos condrais. O objetivo desse estudo foi analisar o uso do PRP ativado, no formato de arcabouço, como suporte para o implante de células tronco mesenquimais (CTM), no preenchimento e tratamento de lesões condrais induzidas em equinos. Doze equinos foram submetidos a uma cirurgia artroscópica no tempo zero do experimento (T0), onde foi induzida uma lesão condral de 15 mm de diâmetro na tróclea medial femoral dos membros pélvicos direito. As 12 articulações foram divididas em dois grupos distintos com seis articulações cada (GA e GB). As articulações do GA foram submetidas ao tratamento com o implante de CTM em gel de PRP. As articulações de GB foram o grupo controle do experimento. As CTMs foram extraídas do tecido adiposo e o PRP em gel foi obtido por protocolo de dupla centrifugação seguido da adição de trombina liofilizada. Após cinco meses (T150) foi realizada nova artroscopia para avaliação macroscópica do local, coleta de amostras do tecido de reparação para análises de microscopia eletrônica, sendo realizadas imagens ressonância magnética e tomografia computadorizada no local do implante no GA. Observamos que o gel de PRP associado às CTM demonstrou ser adequado no tratamento de defeitos condrais experimentais dos equinos. GA evidenciou um melhor aspecto macroscópico e microscópico do tecido de reparação, sendo que GB mostrou maior desorganização das fibras colágenas. Nas imagens de ressonância magnética e tomografia computadorizada apenas foi relevante o local da lesão condral. O arcabouço de gel de PRP demonstrou ser apropriado no suporte do tratamento com as CTMs, sendo de fácil aplicação e efetivo, demonstrando resultados promissores na reparação de lesões condrais induzidas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Olinda R.G., Maia L.A., Cargnelutti J.F., Gois R.C.S., Batista J.S., Dantas A.F.M., Flores E.F. & Riet-Correa F. 2016. Swinepox dermatitis in backyard pigs in Northeastern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):468-472. Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Hospital Veterinário, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos, Patos, PB 58700-000, Brazil. E-mail: rgumes@hotmail.com This article describes five outbreaks of swinepox in backyard pigs in Northeastern Brazil. It affected backyard pigs from herds of poor hygienic-sanitary conditions with severe fly and lice infestations. The morbidity ranged from 33.3 to 100% among affected herds, with mortality reaching up to 60%. The affected pigs developed multifocal to coalescent gray to white papules and blisters in the skin, with eventual eruptions, evolving to erosions and crusts. In addition to skin lesions, affected piglets presented apathy, anorexia and fever. The disease was auto-limiting, resolving within 15 to 25 days. Histological examination revealed proliferative and ulcerative vesiculopustular dermatitis with ballooning degeneration of epithelial cells, perivascular inflammatory infiltrates of lymphocytes, plasma cells, neutrophils, eosinophils and some macrophages in the dermis. Intracytoplasmic eosinophilic inclusions were consistently observed in keratinocytes. Total DNA extracted from fresh tissue fragments obtained from one outbreak and formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue from the other four outbreaks was submitted to polymerase chain reaction (PCR) for Swinepox virus (SWPV) and Vaccinia virus (VACV). Genetic SWPV material was identified by PCR in fresh material from one outbreak. Nucleotide sequencing and phylogenetic analysis of the PCR amplicons (viral polymerase gene) demonstrated 100% homology with sequences from SWPV. All tissues were PCR negative for VACV. Swine poxvirus is present in backyard pigs in Northeastern Brazil, indicating the need of including SWPV in the differential diagnosis of dermatitis in pigs.

• Poxvirus dermatitis varíola dermatite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Olinda R.G., Maia L.A., Cargnelutti J.F., Gois R.C.S., Batista J.S., Dantas A.F.M., Flores E.F. & Riet-Correa F. 2016. Swinepox dermatitis in backyard pigs in Northeastern Brazil. [Varíola em suínos no Nordeste do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):468-472. Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, Hospital Veterinário, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos, Patos, PB 58700-000, Brazil. E-mail: rgumes@hotmail.com Em cinco surtos de varíola em suínos no Nordeste do Brasil foram acometidos leitões e suínos adultos, de rebanhos domésticos criados em condições higiênico-sanitárias precárias, que apresentavam graves infestações por moscas e piolhos. A morbidade variou de 33,3-100% entre os rebanhos afetados e a mortalidade atingindo 60%. Os animais afetados desenvolveram pápulas cinzentas ou esbranquiçadas coalescentes e vesículas, que evoluíram para erosões e crostras. Além das lesões de pele, os leitões afetados apresentavam apatia, anorexia e febre. A doença foi autolimitante, com resolução em 15 a 25 dias. Histologicamente, observou-se dermatite proliferativa e ulcerativa com degeneração balonosa das células do epitélio, infiltrado inflamatório perivascular de linfócitos, plasmócitos, neutrófilos, eosinófilos e escassos macrófagos na derme. Inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas foram consistentemente observadas em queratinócitos. DNA total extraído a partir de fragmentos de tecido frescos obtidos a partir de um surto, e de tecido fixado em formol e embebido em parafina dos outros quatro surtos, foram submetidos à reação em cadeia da polimerase (PCR) para o vírus da varíola suína (SWPV) e o vírus vaccínia (VACV). Material genético do SWPV foi identificado por PCR em material fresco de um surto. O sequenciamento e análise filogenética dos produtos de amplificação da PCR (gene da polimerase viral) demonstraram 100% de homologia com sequências do SWPV. Todos os fragmentos de tecidos foram negativos para VACV na PCR. Este artigo relata a circulação de poxvírus suíno no Nordeste do Brasil, indicando a necessidade de incluir SWPV no diagnóstico diferencial de dermatite em suínos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br This study evaluated the performance of three real time PCR techniques (qPCR) for the diagnosis of African Swine Fever in tissue samples. The three chosen techniques are based on amplification of viral protein VP72 gene sequences and are recommended by OIE (PSA-OIE), the United States official laboratories (PSA-USDA) and the European Union (PSA-EU). Target sequences of the viral DNA were inserted into synthetic plasmid, which served as a positive control for the standardization of techniques and optimization of reagents, determination of limits of detection and performance verification testing. To gauge repeatability and reproducibility of techniques, standard procedures were repeated on different days by two analysts and by changing mix reagents and equipment, and also by another laboratory. Analytical sensitivity tests were done with reference samples provided by an OIE reference laboratory and analytical and diagnostic specificity were tested with negative samples. The PSA-EU and PSA-USDA techniques were more advantageous to use because of lower concentration of oligos used. There were no significant differences in quantitative results varying the days of tests, analysts, equipment and the mix of reagents. The three techniques had high analytical and diagnostic specificity and sensitivity. The three qPCR techniques were considered equivalent and effective and can be adopted by any laboratory for issuing official diagnosis of African Swine Fever.

• African swine fever Peste Suína Africana

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Castro B.G., Souza M.M.S., Regua-Mangia A.H. & Bittencourt A.J. 2016. Genetic relationship between Escherichia coli strains isolated from dairy mastitis and from the stable fly Stomoxys calcitrans. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):479-484. Universidade Federal de Mato Grosso, Campus Universitário de Sinop, Av. Alexandre Ferronato 1200B, Setor Industrial, Sinop, MT 78557-270, Brazil. E-mail: castrobg@ufmt.br The stable fly Stomoxys calcitrans (Linnaeus, 1758) has been described as a potential spreader of infectious agents to cattle herds. Among the agents transmitted by this fly, Escherichia coli has attracted attention due to its potential to cause gastrointestinal disorders as well as environmental mastitis in dairy cows. Therefore, the aim of this study was to isolate and to assess the genetic diversity and the clonal relatedness among E. coli isolates from the milk of dairy mastitis and from stable flies anatomical sites by the Random Amplification of Polymorphic DNA (RAPD-PCR) technique. The molecular typing revealed a high degree of genetic polymorphism suggesting that these microorganisms have a non-clonal origin. Identical electrophoretic profiles were observed between E. coli isolates from different flies, different mammary quarters of the same cow and from cows on a single farm. These results reveal the circulation of the same bacterial lineages and suggest the role of the stable fly in bacterial dispersion. Considering the high pathogenic potential of this bacterial species, our findings alert to a more effective health surveillance.

• Stable fly mastitis mosca dos estábulos mastite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Castro B.G., Souza M.M.S., Regua-Mangia A.H. & Bittencourt A.J. 2016. Genetic relationship between Escherichia coli strains isolated from dairy mastitis and from the stable fly Stomoxys calcitrans. [Caracterização genotípica de Escherichia coli isolados de leite com mastite e da mosca dos estábulos Stomoxys calcitrans.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):479-484. Universidade Federal de Mato Grosso, Campus Universitário de Sinop, Av. Alexandre Ferronato 1200B, Setor Industrial, Sinop, MT 78557-270, Brazil. E-mail: castrobg@ufmt.br A mosca dos estábulos Stomoxys calcitrans é descrita como um importante dispersor de agentes infecciosos aos bovinos. Dentre os agentes veiculados por esta mosca a bactéria Escherichia coli ganha relevância devido ao seu potencial em desenvolver alterações gastroentéricas, bem como mastite bovina ambiental. Desta forma, objetiva-se com este estudo isolar e acessar a diversidade genética e relação de clonalidade entre isolados de E. coli provenientes de casos de mastite e de moscas dos estábulos utilizando a técnica da Amplificação Randômica do DNA Polimórfico (RAPD). A tipagem molecular revelou elevado polimorfismo genético sugerindo que esses microrganismos têm origem não clonal. Perfis eletroforéticos idênticos entre si foram observados entre amostras isoladas de diferentes moscas, quartos mamários de uma mesma vaca, bem como de diferentes vacas dentro de uma mesma propriedade. Esses resultados revelam a circulação de uma mesma linhagem bacteriana e sugerem o papel da Stomoxys calcitrans na dispersão bacteriana. Considerando o elevado potencial patogênico dessa espécie bacteriana, nossos achados alertam para uma vigilância sanitária mais efetiva.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Seino C.H., Bombardelli J.A., Reis G.A., Santos R.B., Shecaira C.L., Azedo M.R. & Benesi F.J. 2016. [Ultrassonographic avaliation of the inflamed umbilical structures in Holstein calves during their first 30 days of life.] Avaliação ultrassonográfica de componentes umbilicais inflamados em bezerros da raça Holandesa com até 30 dias de vida. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):492-502. Departamento de Clínica Médica. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: caroline.seino@gmail.com Umbilical disorders deserve mention among the illnesses affecting calves in the first month of life. The high incidence during this phase of life of newborns and relevant economic losses arising from mortality, cost of treatment and veterinary care, beyond sequelae may determine lower weight gain and milk production. The diagnosis of these diseases is often hampered by the difficulty to detect the involvement of intra-abdominal umbilical structures, which negatively affect the choice of the most appropriate treatment and the actual outcome for each calf. In the present study, we performed ultrasound examinations of calves with inflammation/infection in the umbilical components and observed some characteristics related with measurements and echogenicity present in umbilical affected components. From these evaluation it was concluded that the wall thickness of the umbilical vessels is the more reliable standard to determine changes in these components, as compared with that of the diameter of the umbilical vessels. Furthermore, from this study we observed some peculiarities of involution of the intra-abdominal umbilical cord components in healthy Holstein calves used for the control group to characterize the behavior of the umbilical structures during the progress of the age in the newborns. It is noteworthy that the comparison of these results with those found in the rare literature available showed notable differences.

• Navel illness onfalopatia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Seino C.H., Bombardelli J.A., Reis G.A., Santos R.B., Shecaira C.L., Azedo M.R. & Benesi F.J. 2016. [Ultrassonographic avaliation of the inflamed umbilical structures in Holstein calves during their first 30 days of life.] Avaliação ultrassonográfica de componentes umbilicais inflamados em bezerros da raça Holandesa com até 30 dias de vida. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):492-502. Departamento de Clínica Médica. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: caroline.seino@gmail.com As afecções umbilicais merecem destaque entre as enfermidades que acometem bezerros no primeiro mês de vida, pela alta incidência durante essa fase da vida dos neonatos e pelas relevantes perdas econômicas, decorrentes da mortalidade, custos de tratamento e atendimento veterinário, além de sequelas que poderão determinar menores ganho de peso e produção leiteira. O diagnóstico dessas enfermidades muitas vezes é prejudicado pela dificuldade em se detectar os acometimentos das estruturas intra-abdominais do umbigo, o que afetará negativamente a escolha do tratamento mais adequado e o estabelecimento do real prognóstico para cada animal. No presente estudo, realizou-se a análise ultrassonográfica dos animais com inflamação/infecção dos componentes umbilicais sendo possível observar algumas características em relação a mensurações e ecogenicidade, presentes nos componentes umbilicais acometidos. A partir dessas avaliações concluiu-se que a medida mais adequada para identificar animais com possíveis processos inflamatórios nos componentes umbilicais é a espessura da parede dos vasos umbilicais quando comparada ao diâmetro dos mesmos. Ainda, o estudo possibilitou verificar algumas particularidades do comportamento dos componentes do cordão umbilical em bezerros sadios da raça Holandesa, bem como determinar que os vasos umbilicais intra-abdominais iniciam uma involução em porção mais interna e progridem para as extremidades próximas ao anel umbilical com o evoluir da idade. Destaca-se que o confronto desses resultados com aqueles poucos descritos na literatura disponível mostrou-se com notáveis diferenças.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moraes D.M.C., Andrade M.A, Duarte S.C., Bastos T.S.A., Arnhold E., Jayme V.S. & Nunes J.A. 2016. Phenotypic and molecular detection of Salmonella sp. on growing, rearing and production phases in a commercial group of laying hens. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):503-508. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Goiás, Campus Samambaia, Avenida Esperança s/n, Campus Universitário, Goiânia, GO 74690.900, Brazil. E-mail: tsabvet@gmail.com This present study was developed with the objective of detect Salmonella sp. by conventional bacteriology and qPCR techniques in samples of flooring material from transport crates (meconium); raising environment (swab of cages and drinking fountains); cloacal swab; food and insects from growing, rearing and production phases in a commercial group of laying hens. A total of 864 samples were collected, among whom 248 originated from growing, 392 from rearing and 224 from production phase. Among the 864 samples, 2,8% where positives in bacteriologic technique and 15.3% in qPCR. Contamination was higher in growing and rearing phases and declined in production phase. Twenty four isolations of Salmonella where typified as Salmonella Agona (41.7%), Salmonella Livingstone (33.3%), Salmonella Cerro (16.7%), Salmonella Senftenberg (4.2%) and Salmonella Schwarzengrund (4.2%). During growing phase Salmonella Livingstone was identified. These findings suggest vertical contamination in the group. During rearing and production phases, isolated materials belong to serovars Agona, Cerro, Senftenberg and Schwarzengrund, pointing to horizontal contamination. It is possible to conclude that both vertical and horizontal contaminations are important during the cycle of commercial egg production and contamination in rearing phase is higher than in growing and production phases.

• Alphitobius diaperinus Salmonella sp.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Moraes D.M.C., Andrade M.A, Duarte S.C., Bastos T.S.A., Arnhold E., Jayme V.S. & Nunes J.A. 2016. Phenotypic and molecular detection of Salmonella sp. on growing, rearing and production phases in a commercial group of laying hens. [Detecção fenotípica e molecular de Salmonella sp. nas fases de cria, recria e produção em lote de poedeiras comerciais.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):503-508. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Goiás, Campus Samambaia, Avenida Esperança s/n, Campus Universitário, Goiânia, GO 74690.900, Brazil. E-mail: tsabvet@gmail.com O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de detectar Salmonella sp. pelas técnicas de bacteriologia convencional e PCR em tempo real em amostras de forros de caixas de transporte (mecônio), de ambientes de criação (suabes de gaiola e de bebedouro), suabes de cloaca, ração e insetos oriundos das fases de cria, recria e produção de um lote de poedeiras comerciais. Foram coletadas 864 amostras das quais 248 foram originadas da cria, 392 da recria e 224 da produção. Das 864 amostras 2,8% foram positivas na técnica bacteriológica e 15,3% no PCR em tempo real. A contaminação aumentou da fase de cria para a recria e declinou na fase de produção. Vinte e quatro isolados de Salmonella foram tipificados como Salmonella Agona (41,7%), Salmonella Livingstone (33,3%), Salmonella Cerro (16,7%), Salmonella Senftenberg (4,2%) e Salmonella Schwarzengrund (4,2%). Na fase de cria identificou-se Salmonella Livingstone. Esses achados sugerem a contaminação vertical do lote. Nas fases de recria e produção os isolados pertenceram aos sorovares Agona, Cerro, Senftenberg e Schwarzengrund apontando para a contaminação horizontal. Pode-se concluir com este estudo que tanto a contaminação vertical como a horizontal são importantes no ciclo de produção de ovos comerciais e que a contaminação na fase de recria é maior que na fase de cria e de produção.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Franco R.P., Massufaro C.R., Martineli J., Girotto C.H., Hirota I.N., Zache E. & Hataka A. 2016. [Serum lactate values and its correlation with clinical parameters evaluated at veterinary ambulatorial exam.] Valores de lactato sérico e sua correlação com parâmetros clínicos de cães saudáveis, mensurados durante atendimento ambulatorial veterinário. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):509-515. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hataka@fmvz.unesp.br The measurement of serum lactate is used in the medical routine as a prognosis marker of emergency patients. Its interpretation should not be done disconnectedly from the other clinical parameters once metabolical or environmental stress as well as restraint and/or manipulation of patients can interfere. Thus we tried to measure the levels of serum lactate and clinical parameters of healthy dogs, as their correlation during veterinarian outpatient clinical care. For that we evaluated 80 dogs, males and females, with age ranging from one to eight years, met for polyvalent annual revaccination. We considered to be healthy those dogs that had no clinical events in the last 60 days or alteration in physical exams, blood exam values and serum glycemia. We initially measured body weight, heart rate (HR) and respiratory (RR), capillary refill time, mucosa’s coloring, rectal temperature (RT), peripheral temperature (PT) and the difference between RT and PT, Delta T°C. Finally we did the blood exam and the serum glycemia, as well as the serum lactate measurement. For that we used a portable lactimeter, using the blood sample taken from the cephalic vein. Furthermore, when there was correlation between the serum lactate values and the body weight, we divided the dogs according to the calculation of 33 and 66 percentile. Evaluated dogs showed average values of 18.3±12.1 kg of body weight and 3.0±1.9 of age; with HR of 126.6±29.1bpm, RR of 66±24mpm, RT of 38.9±0.4°C, PT of 31.5±1,0°C, Delta T°C of 7.3±1.0°C and serum lactate of 3.2±0.4mmol/L; with the latter showing range of 3.1-3.3mmol/L with 95% of reliability and significant correlation (p<0.05) between its values and the body weight (r=0.6) and the heart rate (r=0.4). The serum lactate values obtained were compared between the dogs’ groups according to their body weight, showing distinguished differences between them. Thereby we concluded that the serum lactate values in dogs under outpatient care is 3.2mmol/L, with a trust gap of 3.1-3.3mmol/L, highlighting the influence that HR and body weight can have on its values.

• Serum lactate lactatemia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Franco R.P., Massufaro C.R., Martineli J., Girotto C.H., Hirota I.N., Zache E. & Hataka A. 2016. [Serum lactate values and its correlation with clinical parameters evaluated at veterinary ambulatorial exam.] Valores de lactato sérico e sua correlação com parâmetros clínicos de cães saudáveis, mensurados durante atendimento ambulatorial veterinário. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):509-515. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Rubião Jr s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: hataka@fmvz.unesp.br A mensuração do lactato sérico é utilizada na rotina médica como marcador prognóstico de pacientes em estado de emergência. Sua interpretação não deve ser feita de forma isolada, mas conjunta aos demais parâmetros clínicos, pois seus valores podem sofrer interferência do estresse metabólico ou ambiental, contenção física e/ ou manipulação dos pacientes. Assim, buscou-se mensurar os valores do lactato sérico e parâmetros clínicos de cães saudáveis, bem como as suas correlações, durante o atendimento clínico ambulatorial veterinário. Para isso, foram avaliados 80 cães, machos ou fêmeas, com idade de um a oito anos, atendidos para revacinação anual polivalente. Foram considerados cães saudáveis os que não apresentaram intercorrências clínicas nos últimos 60 dias e alterações nos exames físicos e nos valores de hemograma e glicemia sérica. Foram mensurados inicialmente o peso corporal, a frequência cardíaca (FC) e respiratória (FR), tempo de preenchimento capilar (TPC), coloração de mucosas, temperatura retal (TR), periférica (TP) e a diferença entre TR e a TP, o Delta T°C. Por último, realizaram-se os exames de hemograma e glicemia sérica, juntamente com a mensuração do lactato sérico, utilizando para isso um lactímetro portátil, por meio da amostra sanguínea obtida da veia cefálica. Além disso, havendo a correlação dos valores do lactato séricos com o peso corporal os cães foram divididos conforme o cálculo do 33° e 66° percentil. Os cães avaliados evidenciaram valores médios de 18,3±12,1 kg de peso corporal e 3,0±1,9 anos de idade; FC de 126,6±29,1bpm, FR de 66±24mpm, TR de 38,9±0,4°C, TP de 31,5±1,0°C, Delta TºC de 7,3±1,0°C e lactato sérico de 3,2±0,4mmol/L; com este último, evidenciando intervalo de confiança a 95% de 3,1-3,3mmol/L e correlação significativa (p<0,05) dos seus valores com o peso corporal (r=0,6) e a frequência cardíaca (r=0,4). Os valores do lactato sérico obtidos foram comparados entre os grupos de cães conforme o peso corporal, evidenciando diferenças significativas (p<0,05) entre eles. Dessa forma, pode se concluir que os valores do lactato sérico em cães hígidos sob atendimento ambulatorial é de 3,2mmol/L, com o intervalo de confiança de 3,1-3,3mmol/L, ressaltando a influência que a FC e o peso corporal podem exercer nos seus valores.