PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Galiza G.J.N., Tochetto C., Rosa F.B., Panziera W., Silva T.M., Caprioli R.A. & Kommers G.D. 2014. [Usage of three immunohistochemical methods in the detection of aspergillosis and zygomycosis in animals.] Utilização de três métodos imuno-histoquímicos na detecção de aspergilose e zigomicose em animais. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(7):637-642. Laboratório de Patologia Veterinária, Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: glaukommers@yahoo.com Aiming to optimize the usage of the immunohistochemical technique (IHC) in the detection of Aspergillus spp. and zygomycetes (members of the Mucoraceae family), two fungal-specific monoclonal antibodies were used in tissue fragments (formalin-fixed paraffin-embedded), previously diagnosed by histomorphology as aspergillosis and zygomycosis. Tissues were submitted to three different detection systems (two biotinilated and one non biotinilated). Both antibodies showed high specificity and sensitivity in the examined tissues. No cross-reactions were observed between the antibodies used and the agents evaluated (including cases of aspergillosis, zygomycosis, candidiasis and pythiosis). However, nonspecific reactions in hyphae were observed in some cases, but were eliminated by mean of one of the detection systems used. In the aspergillosis cases, with the streptavidin-biotin-alkaline phosphatase method, nonspecific reactions were not observed. In the zygomycosis cases, nonspecific reactions did not occur using a polymer (nonbiotinilated). The IHC technique showed to be a useful tool detecting and confirming aspergillosis and zygomycosis in this retrospective study.

• Aspergillosis zygomycosis mycoses aspergilose zigomicose micoses

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Galiza G.J.N., Tochetto C., Rosa F.B., Panziera W., Silva T.M., Caprioli R.A. & Kommers G.D. 2014. [Usage of three immunohistochemical methods in the detection of aspergillosis and zygomycosis in animals.] Utilização de três métodos imuno-histoquímicos na detecção de aspergilose e zigomicose em animais. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(7):637-642. Laboratório de Patologia Veterinária, Departamento de Patologia, Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: glaukommers@yahoo.com Visando a otimização do uso da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) na detecção de Aspergillus spp. e zigomicetos (membros da família Mucoraceae), utilizaram-se dois anticorpos monoclonais fungo-específicos em fragmentos de tecidos de animais (fixados em formol e embebidos em parafina) com diagnóstico histomorfológico prévio de aspergilose e zigomicose, os quais foram submetidos a três sistemas de detecção diferentes (dois biotinilados e um não biotinilado). Os dois anticorpos apresentaram alta especificidade e sensibilidade nos tecidos examinados. Não ocorreram reações cruzadas entre os anticorpos utilizados e os agentes etiológicos avaliados (incluindo casos de aspergilose, zigomicose, candidíase e pitiose). No entanto, reações inespecíficas foram observadas nas hifas em alguns casos, as quais puderam ser eliminadas através de um dos métodos de detecção utilizados. Para a aspergilose, o método da estreptavidina-biotina-fosfatase alcalina não apresentou reações inespecíficas nas hifas. Enquanto que nos casos de zigomicoses, as reações inespecíficas não ocorreram no método por polímero (não biotinilado). A técnica de IHQ mostrou-se uma ferramenta muito útil na detecção e confirmação dos casos de aspergilose e zigomicose neste estudo retrospectivo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Caitano M.A.B., Soares C.O., Ramos C.A.N., Ferraz A.L.J., Sanches C.C. & Rosinha G.M.S. 2014. [Detection of Brucella abortus in bovine tissue using PCR and qPCR.] Detecção de Brucella abortus em tecidos bovinos utilizando ensaios de PCR e qPCR. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(6):497-502. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Felinto Müller 2443, Ipiranga, Campo Grande, MS 79070-900, Brazil. E-mail: gracia.rosinha@embrapa.br The aim of the study was to evaluate the technical polymerase chain reaction (PCR) and Real-Time PCR (qPCR) to detect Brucella abortus from bovine tissues with suggestive lesions of brucellosis. For this, 21 fragments of bovine tissues collected at abattoirs of Mato Grosso do Sul were processed and subjected to microbiological culture and extraction of genomic DNA to perform the PCR reactions and qPCR. Eight samples of microbiological culture showed bacterial growth and five samples were confirmed as B. abortus by PCR. DNA of Brucella (IS711 primers) was detected in 13 (61.9%) directly from tissue samples and 17 (81%) from tissue homogenate samples. With the species-specific set of primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, 14 (66%) tissue samples and 18 (85.7%) tissue homogenate samples were positive. Six positive samples in the species-specific PCR were sequenced and the best hit in the BLASTn analysis was B. abortus. By qPCR, 21 (100%) tissue samples and 19 (90.5%) tissue homogenate samples were positive for B. abortus. Ten samples of DNA from bovine blood from an accredited-free herd were used as negative control in PCR and qPCR analysis using the primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, and no one amplified by PCR, whereas two samples were amplified by qPCR (20%). In conclusion, both techniques detect the presence of B. abortus directly from tissues and homogenized, but the qPCR showed high sensitivity. The results indicate that qPCR can represent an alternative tool for faster and more accurate detection of B. abortus directly from tissues, and use in health surveillance programs by presenting satisfactory sensitivity and specificity.

• Brucellosis Brucella abortus brucelose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Caitano M.A.B., Soares C.O., Ramos C.A.N., Ferraz A.L.J., Sanches C.C. & Rosinha G.M.S. 2014. [Detection of Brucella abortus in bovine tissue using PCR and qPCR.] Detecção de Brucella abortus em tecidos bovinos utilizando ensaios de PCR e qPCR. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(6):497-502. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Felinto Müller 2443, Ipiranga, Campo Grande, MS 79070-900, Brazil. E-mail: gracia.rosinha@embrapa.br Objetivou-se no presente estudo avaliar as técnicas reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em Tempo Real (qPCR) para detectar Brucella abortus, a partir de tecidos bovinos com lesões sugestivas de brucelose. Para isto, 21 fragmentos de tecidos bovinos coletados em abatedouros de Mato Grosso do Sul foram processados e submetidos ao cultivo microbiológico e extração do DNA genômico para realização das reações de PCR e qPCR. No cultivo microbiológico, oito amostras apresentaram crescimento bacteriano e cinco foram confirmadas como B. abortus por PCR. Diretamente das amostras de tecido, DNA do gênero Brucella (oligonucleotídeos IS711) foi detectado em 13 (61,9%) amostras de tecido e 17 (81%) amostras de homogeneizado. Já com os oligonucleotídeos espécie-específicos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R, 14 (66%) amostras de tecido e 18 (85,7%) amostras de homogeneizado foram amplificadas. Seis amostras positivas na PCR espécie-específica foram sequenciadas e o best hit na análise BLASTn foi B. abortus. Na qPCR, 21 (100%) amostras de tecidos e 19 (90,5%) amostras de homogeneizado foram positivas para B. abortus. Dez amostras de DNA de sangue bovino de rebanho certificado livre foram utilizadas como controle negativo nas análises de PCR e qPCR utilizando-se os oligonucleotídeos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R. Na PCR nenhuma amostra amplificou, enquanto que na qPCR 2 (20%) amplificaram. Conclui-se que as duas técnicas detectam a presença de B. abortus diretamente de tecidos e homogeneizados, porém a qPCR apresentou maior sensibilidade. Os resultados obtidos indicam que a qPCR pode representar uma alternativa rápida e precisa para a detecção de B. abortus diretamente de tecidos, e ser utilizada em programas de vigilância sanitária, por apresentar sensibilidade e especificidade satisfatórias.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Robles B.F., Nóbrega D.B., Guimarães F.F., Wanderley G.G. & Langoni H. 2014. Beta-lactamase detection in Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus isolated from bovine mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):325-328. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-900, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br The objectives of the study were to evaluate the presence/production of beta-lactamases by both phenotypic and genotypic methods, verify whether results are dependent of bacteria type (Staphylococcus aureus versus coagulase-negative Staphylococcus - CNS) and verify the agreement between tests. A total of 200 bacteria samples from 21 different herds were enrolled, being 100 CNS and 100 S. aureus. Beta-lactamase presence/detection was performed by different tests (PCR, clover leaf test - CLT, Nitrocefin disk, and in vitro resistance to penicillin). Results of all tests were not dependent of bacteria type (CNS or S. aureus). Several S. aureus beta-lactamase producing isolates were from the same herd. Phenotypic tests excluding in vitro resistance to penicillin showed a strong association measured by the kappa coefficient for both bacteria species. Nitrocefin and CLT are more reliable tests for detecting beta-lactamase production in staphylococci.

• Beta-lactamase blaZ coagulase-negative Staphylococcus aureus coagulase negativa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Robles B.F., Nóbrega D.B., Guimarães F.F., Wanderley G.G. & Langoni H. 2014. Beta-lactamase detection in Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus isolated from bovine mastitis. [Detecção de beta-lactamase em Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase negativa isolados de mastite bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):325-328. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-900, Brazil. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br Os objetivos do presente estudo foram avaliar a presença/produção de beta-lactamases por ambos os métodos fenotípicos e genotípicos, verificar se os resultados são dependentes do tipo de bactéria (Staphylococcus aureus contra Staphylococcus coagulase negativa - CNS) e verificar a concordância entre os testes. Um total de 200 amostras bactérianas oriundas de 21 rebanhos distintos foram incluídos, sendo 100 CNS e 100 S. aureus. A presença/detecção de beta-lactamase foi realizada por diferentes testes (PCR, teste trevo (clover leaf test) - CLT, disco Nitrocefin e resistência in vitro à penicilina). Os resultados de todos os testes não foram dependentes do tipo de bactérias (CNS ou S. aureus). Vários isolados de S. aureus produtores de beta-lactamase eram de um mesmo rebanho. Testes fenotípicos excluindo resistência in vitro à penicilina mostraram uma forte associação medida pelo coeficiente kappa para ambas as espécies de bactérias. Nitrocefina e CLT são testes mais confiáveis para detectar a produção de beta-lactamase em estafilococos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Marassi C.D, Zarden C., Oelemann W. & Lilenbaum W. 2014. Detection of specific antibodies in cows after injection of PPD. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(3):241-243. Laboratório de Bacteriologia Veterinária, Departamento de Bacteriologia e Parasitológica, Universidade Federal Fluminense, Rua Professor Hernani Mello 101, Lab. 309, Niterói, RJ 24210-130, Brazil. E-mail: carladray@yahoo.com.br The diagnosis of bovine tuberculosis aims to identify the immune response against mycobacterial antigens. Although Single Intradermal Comparative Cervical Tuberculin test (SICCT) is broadly used for first identification of the disease, the performance of ELISAs has been investigated for diagnosis improvement. The present study expected to find out the influence of intradermal skin tests on the results of ELISAs using the recombinant proteins MPB70 and MPB83 as antigens on cows from a naturally infected herd. Results were analyzed by the F-test, Mann-Whitney and Friedman tests Although comparable to both proteins, results showed that positive animals presented a tendency of augment reactivity to MPB70, representing a tendency for a booster effect, but not to MPB83.

• Tuberculosis tuberculose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Marassi C.D, Zarden C., Oelemann W. & Lilenbaum W. 2014. Detection of specific antibodies in cows after injection of PPD. [Detecção de anticorpos específicos em vacas após a injeção de PPD.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(3):241-243. Laboratório de Bacteriologia Veterinária, Departamento de Bacteriologia e Parasitológica, Universidade Federal Fluminense, Rua Professor Hernani Mello 101, Lab. 309, Niterói, RJ 24210-130, Brazil. E-mail: carladray@yahoo.com.br O diagnóstico da tuberculose bovina baseia-se na identificação da resposta imune do animal frente aos antígenos de Mycobacterium bovis. Embora o teste intradérmico comparativo cervical seja o mais empregado como primeiro teste diagnóstico, outras técnicas, como ELISA, tem sido investigadas para aumentar a detecção de animais infectados. O presente estudo analisou se os testes intradérmicos influenciariam os resultados de ELISAs que utilizaram as proteínas MPB70 e MPB83 como antígenos de captura em um rebanho naturalmente infectado. Os resultados foram analisados por meio de testes estatísticos de comparação e correlação de resultados: teste-F, Mann-Whitney e Friedman. O desempenho de ambos os ELISAs foi comparável; no entanto, os resultados demonstraram que entre os animais positivos, houve um aumento de reatividade ao MPB70, dado este que não foi observado junto ao ELISA-MPB83.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva J.B., Lopes C.T.A., Souza M.G.S., Gibson A.F.B., Vinhote W.M.S., Fonseca A.H., Araújo F.R. & Barbosa-Neto J.D. 2014. [Serological and molecular detection of Anaplasma marginale in water buffaloes on Marajó Island, State of Pará, Brazil.] Detecção sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos na Ilha de Marajó, Pará. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):11-14. Departamento de Epidemiologia e Saúde Pública, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR-465 Km 7, Seropédica, RJ 23890-000, Brazil. E-mail: jenevaldo@hotmail.com The aim of the study was to test the molecular and serological prevalence of Anaplasma marginale in water buffaloes of the Marajó Island, State of Pará, Brazil. For serologic research were randomly selected 800 buffaloes and for molecular research 50 of these animals were randomly chosen. To quantify the serological prevalence we used the indirect enzyme linked immunosorbent assay (iELISA) with total antigen containing proteins outer surface. To quantify the prevalence molecular was used the polymerase chain reaction (PCR) involving gene amplification fragment larger surface protein 5 (MSP5). The prevalence of positive animals in iELISA was 25% (200/800). In the PCR we detected the presence of A. marginale in 2% (1/50) of animals. Although only one animal was positive in PCR, we found that it was negative in ELISA. The presence of the agent, even in low prevalence, shows that buffaloes can act as an important reservoir for transmission of the pathogen to cattle in northern Brazil.

• Anaplasma marginale anaplasmose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva J.B., Lopes C.T.A., Souza M.G.S., Gibson A.F.B., Vinhote W.M.S., Fonseca A.H., Araújo F.R. & Barbosa-Neto J.D. 2014. [Serological and molecular detection of Anaplasma marginale in water buffaloes on Marajó Island, State of Pará, Brazil.] Detecção sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos na Ilha de Marajó, Pará. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):11-14. Departamento de Epidemiologia e Saúde Pública, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR-465 Km 7, Seropédica, RJ 23890-000, Brazil. E-mail: jenevaldo@hotmail.com O objetivo do estudo foi testar a prevalência sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos do municipio de Soure, Ilha de Marajó, estado do Pará, Brasil. Para a pesquisa sorologica foram selecionados randomicamente 800 animais e para a pesquisa molecular 50 destes animais foram aleatoriamente escolhidos. Para quantificar a prevalência sorológica utilizou-se o ensaio de imunoadsorção enzimático indireto (iELISA) com antígeno total contendo proteínas de superfície externa e para quantificar a prevalência molecular utilizou-se a reação em cadeia da polimerase (PCR), envolvendo a amplificação de fragmento gênico da proteína de superfície maior 5 (MSP5). A prevalência de animais positivos no ELISA para A. marginale foi de 25% (200/800). Na PCR foi detectada a presença de A. marginale em 2% (1/50) dos animais. Embora apenas um animal tenha sido positivo na PCR, observou-se que o mesmo foi negativo no ELISA. A presença do agente, mesmo em baixa prevalência, mostra que os bubalinos podem funcionar como um importante reservatório desse patógeno para os rebanhos bovinos da região norte do Brasil.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Borges K.A., Furian T.Q., Borsoi A., Moraes H.L.S., Salle C.T.P. & Nascimento V.P. 2013. Detection of virulence-associated genes in Salmonella Enteritidis isolates from chicken in Southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1416-1422. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Avenida Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: karen.borges@ufrgs.br Salmonella spp. are considered the main agents of foodborne disease and Salmonella Enteritidis is one of the most frequently isolated serovars worldwide. The virulence of Salmonella spp. and their interaction with the host are complex processes involving virulence factors to overcome host defenses. The purpose of this study was to detect virulence genes in S. Enteritidis isolates from poultry in the South of Brazil. PCR-based assays were developed in order to detect nine genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH and spvC) associated with the virulence in eighty-four isolates of S. Enteritidis isolated from poultry. The invA, hilA, sivH, sefA and avrA genes were present in 100% of the isolates; lpfA and sopE were present in 99%; agfA was present in 96%; and the spvC gene was present in 92%. It was possible to characterize the isolates with four different genetic profiles (P1, P2, P3 and P4), as it follows: P1, positive for all genes; P2, negative only for spvC; P3, negative for agfA; and P4, negative for lpfA, spvC and sopE. The most prevalent profile was P1, which was present in 88% of the isolates. Although all isolates belong to the same serovar, it was possible to observe variations in the presence of these virulence-associated genes between different isolates. The characterization of the mechanisms of virulence circulating in the population of Salmonella Enteritidis is important for a better understanding of its biology and pathogenicity. The frequency of these genes and the establishment of genetic profiles can be used to determine patterns of virulence. These patterns, associated with in vivo studies, may help develop tools to predict the ability of virulence of different strains.

• Salmonella Enteritidis

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Borges K.A., Furian T.Q., Borsoi A., Moraes H.L.S., Salle C.T.P. & Nascimento V.P. 2013. Detection of virulence-associated genes in Salmonella Enteritidis isolates from chicken in Southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1416-1422. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Avenida Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: karen.borges@ufrgs.br Salmonella spp. estão entre os principais agentes causadores de doenças transmitidas por alimentos, e o sorovar Salmonella Enteritidis é o mais frequentemente isolado no mundo. A virulência de Salmonella spp. e a sua interação com o hospedeiro são processos complexos que envolvem fatores de virulência para sobreviver às defesas do hospedeiro. O objetivo deste estudo foi detectar genes de virulência em cepas de S. Enteritidis isoladas a partir de fontes avícolas no sul do Brasil. Ensaios de PCR foram desenvolvidos para a detecção de nove genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH e spvC) associados à virulência em oitenta e quatro amostras de S. Enteritidis. Os genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA estavam presentes em 100% dos isolados; lpfA e sopE estavam presentes em 99%; agfA em 96%; e o gene spvC estava presente em 92%. Foi possível caracterizar os isolados em quatro perfis genéticos distintos (P1, P2, P3 e P4), sendo P1 positivo para todos os genes; P2 negativo apenas para spvC; P3 negativo para agfA e P4 negativo para lpfA, spvC e sopE. O perfil de maior frequência foi P1, presente em 88% dos isolados. Apesar de todos os isolados pertencerem ao mesmo sorovar, foi possível observar variações na presença de genes associados à virulência entre os mesmos. A caracterização dos mecanismos de virulência circulantes na população de Salmonella Enteritidis é importante para um maior entendimento da sua biologia e patogenicidade. A frequência destes genes e o estabelecimento de perfis genéticos podem ser utilizados para determinar os padrões de virulência dos isolados. Estes padrões, associados a estudos in vivo, podem auxiliar na elaboração de ferramentas que permitam predizer a capacidade de virulência das diferentes cepas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Guerra N.R., Monteiro M.F.M., Sandes H.M.M., Cruz N.L.N., Ramos C.A.N., Santana V.L.A., Souza M.M.A. & Alves L.C. 2013. [Detection of IgG antibodies against Trypanosoma vivax in cattle by indirect immunofluorescence test.] Detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos através do teste de Imunofluorescência indireta. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1423-1426. Laboratório de Doenças Parasitárias dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manuel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: leucioalves@gmail.com Trypanosoma vivax infects a wide range of wild and domestic ungulates, causing important losses for the livestock industry. The aim of the present study was to assess the detection of IgG antibodies against T. vivax in cattle from the state of Pernambuco, Brazil. Therefore, we analyzed 2.053 blood serum samples from cattle herds of municipalities in Pernambuco, what was made by Immunofluorescence Assay. The overall seroprevalence of IgG antibodies against T. vivax in cattle was 13.93% (286/2053). The frequencies, by region, varied from 11.90% to 15.99%. Thus, the data obtained allowed to characterize the state of Pernambuco as an area of enzootic instability for T. vivax. The frequency herein reported (i.e., 13.93%) indicates that Pernambuco is an endemic area for T. vivax, this parasite being spread throughout the state.

• Trypanosoma vivax trypanosomiasis tripanossomíase

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Guerra N.R., Monteiro M.F.M., Sandes H.M.M., Cruz N.L.N., Ramos C.A.N., Santana V.L.A., Souza M.M.A. & Alves L.C. 2013. [Detection of IgG antibodies against Trypanosoma vivax in cattle by indirect immunofluorescence test.] Detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos através do teste de Imunofluorescência indireta. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1423-1426. Laboratório de Doenças Parasitárias dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manuel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: leucioalves@gmail.com Trypanosoma vivax infecta uma grande variedade de animais ungulados selvagens e domésticos, podendo causar grande impacto na produção de ruminantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar a detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos provenientes do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, foram analisadas 2,053 amostras de soro sanguíneo de bovinos provenientes de rebanhos de municípios do estado de Pernambuco, os quais foram analisados através da Reação de Imunofluorescência Indireta. Das amostras testadas 13,93% (286/2.053) foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax. As freqüências, por mesorregião, variaram de 11,90% a 15,99%. Assim, os dados obtidos permitiram a caracterização do estado de Pernambuco como uma área de instabilidade enzoótica e sugere que o estado Pernambuco é área endêmica para Trypanosoma vivax e este parasito está distribuído por todo o estado.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silveira M.M., Paula D.A.J., Silva M.C., Pitchenin L.C., Cruz R.A.S., Colodel E.M., Dutra V. & Nakazato L. 2013. Development and application of polymerase chain reaction test for detection of Conidiobolus lamprauges. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1448-1452. Departamento de Clínica Médica Veterinária, Faculdade de Agronomia, Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2673, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78068-900, Brazil. E-mail: lucnak@ufmt.br Conidiobolomycosis is a granulomatous disease caused by the fungus Conidiobolus spp. in humans and animals. Traditional technique for diagnosis of the disease is isolation of the agent associated with the presence of typical clinical signs and pathological conditions. The aim of this study was to describe the development of a specific polymerase chain reaction (PCR) test for Conidiobolus lamprauges to detect the fungus in clinical samples. Samples from suspected animals were collected and submitted to isolation, histopathological analysis and amplification by PCR. DNA from tissues was subjected to PCR with fungi universal primers 18S rDNA gene, and specific primers were designed based on the same gene in C. lamprauges that generated products of about 540 bp and 222 bp respectively. The culture was positive in 26.6% of clinical samples. The PCR technique for C. lamprauges showed amplification of DNA from fresh tissues (80%) and paraffin sections (44.4%). In conclusion, the PCR technique described here demonstrated a high sensitivity and specificity for detection of fungal DNA in tissue samples, providing a tool for the rapid diagnosis of C. lamprauges.

• Conidiobolus lamprauges

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silveira M.M., Paula D.A.J., Silva M.C., Pitchenin L.C., Cruz R.A.S., Colodel E.M., Dutra V. & Nakazato L. 2013. Development and application of polymerase chain reaction test for detection of Conidiobolus lamprauges. [Desenvolvimento e aplicação da reação em cadeia da polimerase para detecção de Conidiobolus lamprauges.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1448-1452. Departamento de Clínica Médica Veterinária, Faculdade de Agronomia, Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2673, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78068-900, Brazil. E-mail: lucnak@ufmt.br A conidiobolomicose é uma doença granulomatosa causada pelo fungo Conidiobolus spp., observada em humanos e animais. As técnicas tradicionais de diagnóstico da doença são o isolamento do agente associado à presença de sinais clínicos típicos e condições patológicas. O objetivo deste trabalho é descrever o desenvolvimento de um teste da reação em cadeia da polimerase (PCR) específico para Conidiobolus lamprauges em amostras clínicas. As amostras de animais suspeitos foram coletadas e submetidas ao isolamento, análise histopatológica e amplificação pela PCR. O DNA de tecidos foi submetido a PCR com os iniciadores universais de fungos baseados no gene 18S rDNA e iniciadores específicos foram concebidos com base no mesmo gene em C. lamprauges que gerou produtos de aproximadamente 540 pb e 222 pb, respectivamente. A cultura foi positiva em 26,6% das amostras clínicas. A técnica de PCR para C. lamprauges mostrou a amplificação de DNA a partir de tecidos frescos (80%) e secções de parafina (44,4%). Em conclusão, a técnica de PCR aqui descrita demonstrou elevada sensibilidade e especificidade na detecção de DNA de fungos em amostras de tecido, proporcionando uma ferramenta rápida para o diagnóstico de C. lamprauges.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ávila L.A., Perez A.M., Ferreira Neto S.J., Ferreira F., Telles O.E., Dias A.R., Amaku M. & Gonçalves V.S.P. 2009. [Cluster detection analyses for temporal-spatial characterization of bovine tuberculosis in Bahia, Brazil.] Análise de detecção de cluster na caracterização espaço-temporal da tuberculose bovina no Estado da Bahia. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1313-1318. Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Bovina, Agência Estadual de Defesa Agropecuária da Bahia, Secretaria de Agricultura do Estado da Bahia, Av. Ademar de Barros 967, Salvador, BA 40170-110, Brazil. E-mail: luciana.avila@adab.ba.gov.br Bovine tuberculosis (BTB) is a disease caused by the infection with Mycobacterium bovis that affects humans and several mammalian species. BTB is important, because it inflicts far-reaching economic losses to infected regions, and due to its impact on public health. Epidemiological surveys were conducted in the State of Bahia between 2008 and 2010 with the objective to estimate the prevalence and to assess the spatial distribution of the disease. The State of Bahia has been stratified into four regions, each of them representing a set of homogeneous epidemiological and demographic characteristics, referred to as Production Circuits. A total of 18,810 more than 2-year-old cattle in 1,305 herds, ranging from 320 to 370 ones per region, and 20 to 40 cattle per herd were randomly selected. A cervical comparative test was applied to each selected animal; reactive cattle and cattle with two consecutive inconclusive tests were considered BTB-positive, whereas non-reactive cattle were considered BTB-negative. Positive herds were classified as those with &#8805;20 sampled cattle and at least one BTB-positive, as well as those with 40 cattle sampled with &#8805;2 BTB-positive animals. Latitude and longitude were recorded for each sampled herd with a generic Global Positioning System (GPS). The Cuzick-and-Edwards’ test and the spatial scan statistic were used to assess whether BTB was spatially clustered. Herd-level prevalence, as indicated by the proportion of case-herds, was 1.6% (range 0.3 to 2.9% per region). No significant evidence (P<0.05) of spatial clustering was detected, most likely due to the low disease prevalence in the region. Results here suggest that BTB is low prevalent in the State of Bahia and that under these conditions epidemiological outbreaks found cannot be explained by spatially-structured factors.

• Tuberculosis tuberculose bovina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ávila L.A., Perez A.M., Ferreira Neto S.J., Ferreira F., Telles O.E., Dias A.R., Amaku M. & Gonçalves V.S.P. 2009. [Cluster detection analyses for temporal-spatial characterization of bovine tuberculosis in Bahia, Brazil.] Análise de detecção de cluster na caracterização espaço-temporal da tuberculose bovina no Estado da Bahia. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1313-1318. Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Bovina, Agência Estadual de Defesa Agropecuária da Bahia, Secretaria de Agricultura do Estado da Bahia, Av. Ademar de Barros 967, Salvador, BA 40170-110, Brazil. E-mail: luciana.avila@adab.ba.gov.br A tuberculose bovina (BTB) é uma enfermidade causada pela infecção pelo Mycobacterium bovis que acomete o homem e diversas espécies de mamíferos. A BTB tem grande importância por causar prejuízos econômicos nas regiões infectadas e por seu impacto na saúde pública. Foi realizado inquérito epidemiológico no Estado da Bahia, entre 2008 e 2010, com o objetivo de estimar a prevalência e conhecer a distribuição espaço temporal da enfermidade. O Estado foi estratificado em quatro regiões, cada uma com características epidemiológicas e demográficas homogêneas representativas de formas de produção pecuária. Um total de 18.810 cabeças com idade superior a 2 anos foi amostrado em 1350 propriedades. O teste cervical comparativo foi aplicado em cada animal selecionado, sendo considerados positivos os animais reagentes positivos ou duas vezes inconclusivos. Latitude e Longitude foram tomadas para cada propriedade amostrada com o auxilio do aparelho de Global Positioning System (GPS). O teste de Cuzick-and-Edwards e a análise de rastreio espacial (spatial scan statistic) foram utilizados para identificar qualquer agrupamento espacial de BTB. A prevalência de rebanho na Bahia, indicando a proporção de propriedades foco, foi de 1,6% (IC 95%: 1,0% – 2,69% por região). Nenhuma evidência significativa (P<0.05) de aglomeração espacial ou clustering foi detectada, possivelmente devido à baixa prevalência da doença. Estes resultados sugerem que a BTB tem baixa prevalência no estado da Bahia e que, nestas condições epidemiológicas, os focos encontrados não podem ser explicados por fatores espacialmente estruturados.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Zhang H., Zhu L., Zhou Y.C., Ji H.W., Dai H.B., Guo W.Z. & Xu Z.W. 2013. Rapid and sensitive detection of Bordetella bronchiseptica by loop-mediated isothermal amplification (LAMP). Pesquisa Veterinária Brasileira 33(10):1222-1226. Key Laboratory of Animal Biotechnology Center of Sichuan Province, College of Veterinary Medicine of Sichuan Agricultural University, Ya’an, Sichuan, 625014, PR China. E-mail: abtcxzw@126.com Bordetella bronchiseptica causes acute and chronic respiratory infections in diverse animal species and occasionally in humans. In this study, we described the establishment of a simple, sensitive and cost-efficient loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the detection of B. bronchiseptica. A set of primers towards a 235 bp region within the flagellum gene of B. bronchiseptica was designed with online software.. The specificity of the LAMP assay was examined by using 6 porcine pathogens and 100 nasal swabs collected from healthy pigs and suspect infected pigs. The results indicated that positive reactions were confirmed for all B. bronchiseptica and no cross-reactivity was observed from other non-B. bronchiseptica. In sensitivity evaluations, the technique successfully detected a serial dilutions of extracted B. bronchiseptica DNA with a detection limit of 9 copies, which was 10 times more sensitive than that of PCR. Compared with conventional PCR, the higher sensitivity of LAMP method and no need for the complex instrumentation make this LAMP assay a promising alternative for the diagnosis of B. bronchiseptica in rural areas and developing countries where there lacks of complex laboratory services.

• Bordetella bronchiseptica

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Zhang H., Zhu L., Zhou Y.C., Ji H.W., Dai H.B., Guo W.Z. & Xu Z.W. 2013. Rapid and sensitive detection of Bordetella bronchiseptica by loop-mediated isothermal amplification (LAMP). Pesquisa Veterinária Brasileira 33(10):1222-1226. Key Laboratory of Animal Biotechnology Center of Sichuan Province, College of Veterinary Medicine of Sichuan Agricultural University, Ya’an, Sichuan, 625014, PR China. E-mail: abtcxzw@126.com Bordetella bronchiseptica causes acute and chronic respiratory infections in diverse animal species and occasionally in humans. In this study, we described the establishment of a simple, sensitive and cost-efficient loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the detection of B. bronchiseptica. A set of primers towards a 235 bp region within the flagellum gene of B. bronchiseptica was designed with online software.. The specificity of the LAMP assay was examined by using 6 porcine pathogens and 100 nasal swabs collected from healthy pigs and suspect infected pigs. The results indicated that positive reactions were confirmed for all B. bronchiseptica and no cross-reactivity was observed from other non-B. bronchiseptica. In sensitivity evaluations, the technique successfully detected a serial dilutions of extracted B. bronchiseptica DNA with a detection limit of 9 copies, which was 10 times more sensitive than that of PCR. Compared with conventional PCR, the higher sensitivity of LAMP method and no need for the complex instrumentation make this LAMP assay a promising alternative for the diagnosis of B. bronchiseptica in rural areas and developing countries where there lacks of complex laboratory services.