PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Miani M., Lorenson M.S., Guizzo J.A., Espíndola J.P., Rodríguez-Ferri E.F., Gutiérrez-Martín C.B., Kreutz L.C. & Frandoloso R. 2017. Antimicrobial susceptibility patterns of Brazilian Haemophilus parasuis field isolates. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(11):1187-1192. Laboratório de Microbiologia e Imunologia Avançada, Universidade de Passo Fundo, Campus I, Edifício G3, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: rfran@upf.br Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glässer’s disease (GD), an ubiquitous infection of swine characterized by systemic fibrinous polyserositis, polyarthritis and meningitis. Intensive use of antimicrobial agents in swine husbandries during the last years triggered the development of antibiotic resistances in bacterial pathogens. Thus, regular susceptibility testing is crucial to ensure efficacy of different antimicrobial agents to this porcine pathogen. In this study, 50 clinical isolates from South Brazilian pig herds were characterized and analyzed for their susceptibility to commonly used antibiotic. The identification and typing of clinical isolates was carried out by a modified indirect hemagglutination assay combined with a multiplex PCR. The susceptibility of each isolate was analyzed by broth microdilution method against a panel of 21 antimicrobial compounds. We found that field isolates are highly resistance to gentamycin, bacitracin, lincomycin and tiamulin, but sensitive to ampicillin, clindamycin, neomycin, penicillin, danofloxacin and enrofloxacin. Furthermore, an individual susceptibility analysis indicated that enrofloxacin is effective to treat clinical isolates with the exception of those classified as serovar 1. The results presented here firstly demonstrate the susceptibility of Brazilian clinical isolates of H. parasuis to antimicrobials widely used by swine veterinary practitioners and strengthen the need to perform susceptibility test prior to antibiotic therapy during GD outbreaks. In addition, because only six antimicrobial drugs (28.6%) were found effective against field isolates, a continuous surveillance of the susceptibility profile should be of major concern to the swine industry.

• Haemophilus parasuis antimicrobial susceptibility swine susceptibilidade antimicrobiana suínos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Miani M., Lorenson M.S., Guizzo J.A., Espíndola J.P., Rodríguez-Ferri E.F., Gutiérrez-Martín C.B., Kreutz L.C. & Frandoloso R. 2017. Antimicrobial susceptibility patterns of Brazilian Haemophilus parasuis field isolates. [Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de isolados clínicos brasileiros de Haemophilus parasuis.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(11):1187-1192. Laboratório de Microbiologia e Imunologia Avançada, Universidade de Passo Fundo, Campus I, Edifício G3, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: rfran@upf.br Haemophilus parasuis é o agente etiológico da doença de Glässer (GD), um processo infeccioso que acomete suínos e que se caracteriza por poliserosites fibrinosas sistêmicas, poliartrites e meningites. O uso intensivo de agentes antimicrobianos na produção de suínos, durante os últimos anos, tem disparado a seleção de cepas bacterianas resistentes a antibióticos. Desta maneira, a avaliação rotineira de susceptibilidade torna-se crucial para assegurar a correta seleção de um antimicrobiano eficaz contra este patógeno. Neste estudo, analisou-se a susceptibilidade antimicrobiana de 50 isolados clínicos de H. parasuis procedentes de granjas localizadas na região sul do Brasil. A identificação e tipificação dos isolados clínicos foi realizada através de uma PCR multiplex combinada com o teste de hemaglutinação indireta modificada. A susceptibilidade de cada isolado foi analisada pelo método de microdiluição em caldo utilizando-se um painel composto por 21 agentes antimicrobianos. Os resultados deste estudo indicam que as cepas clínicas de H. parasuis apresentam alta resistência à gentamicina, bacitracina, lincomicina e tiamulina, no entanto, são susceptíveis a ampicilina, clindamicina, neomicina, penicilina, enrofloxacina e danofloxacina. A análise de susceptibilidade realizada dentro de cada grupo de cepas de um mesmo sorovar indicou que a enrofloxacina é o antibiótico mais efetivo para tratar todos isolados clínicos com exceção daqueles pertencentes ao sorovar 1. Em termos gerais, neste trabalho, demonstra-se o perfil de susceptibilidade de isolados clínicos de H. parasuis aos antimicrobianos comumente utilizados pelos médicos veterinários especialistas em suínos, e reforça-se a necessidade da realização de testes de susceptibilidade antes do início da terapia com antibióticos durante surtos de DG. Além disso, como somente seis antimicrobianos (28.6%) foram efetivos contra os isolados clínicos, uma vigilância contínua do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos deve ser de grande preocupação para a indústria de suínos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva J.M., Clementino E.L., Carneiro da Cunha M.N., Porfírio K.P.S., Mota R.A., Teixeira M.F.S., Porto T.S., Porto A.L.F. & Porto C.S. 2016. [Antimicrobial activity of bioactive molecules produced by Streptomyces parvulus DPUA 1573 against Staphylococcus spp. multi-drug resistant isolates from mastitis buffalo.] Atividade antimicrobiana de moléculas bioativas produzidas por Streptomyces parvulus DPUA 1573 frente a Staphylococcus spp. multirresistentes de mastite bubalina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(9):805-810. Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: analuporto@yahoo.com.br Mastitis is an inflammation in one or more mammary glands which can lead to reduction in production and quality of milk causing economic losses to dairy farming. The use of antibiotics is the key for the treatment of this disease, but in many cases ineffective due to bacterial resistance already known for this condition. The aim of this study was to select strains of Streptomyces spp. producing biomolecules with antimicrobial activity against multidrug-resistant Staphylococcus isolated from buffaloes with mastitis, as well as to determine the best production parameters to the evaluation of simultaneous production of clavulanic acid. Thirty species of Streptomyces spp. were used to selecting the greatest producer spectrum of antimicrobial activity (agar block technique), with selection of Streptomyces parvulus DPUA 1573, and 7 multidrug-resistant Staphylococcus spp. sensitive to its biocompounds. The selected strain of Streptomyces parvulus DPUA 1573 was cultured in different conditions predetermined by the factorial design 24, where the independent variables were: soybean concentration (0.5, 1.0, 1.5%), glucose (0, 0.5, 1g/L), agitation (150, 200, 250rpm) and temperature (28, 32, 37°C); all the tests were monitored up to 120 hours of cultivation. All independent variables influenced positively the cell growth, while for antimicrobial activity only the variables temperature and agitation showed positive effects. The antimicrobial bio compounds showed activity against seven multidrug-resistant Staphylococcus spp under the conditions: temperature 37°C, agitation 250rpm, with 72 hours of production process. In the tests which showed antimicrobial activity, was also assessed the production of clavulanic acid along with the cultivation. The highest concentration of clavulanic acid was 269.84g/L obtained under the conditions of 1.5% of soybean flour and absence of glucose in 96 hours. The strain Streptomyces parvulus DPUA 1573 was effective against multidrug-resistant strains of Staphylococcus spp. of mastitis from buffaloes, still showing concomitantly production of clavulanic acid for pharmaceutical use.

• Streptomyces parvulus Staphylococcus spp. antimicrobial mastitis multi-drug resistance antimicrobiano mastite multirresistência

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva J.M., Clementino E.L., Carneiro da Cunha M.N., Porfírio K.P.S., Mota R.A., Teixeira M.F.S., Porto T.S., Porto A.L.F. & Porto C.S. 2016. [Antimicrobial activity of bioactive molecules produced by Streptomyces parvulus DPUA 1573 against Staphylococcus spp. multi-drug resistant isolates from mastitis buffalo.] Atividade antimicrobiana de moléculas bioativas produzidas por Streptomyces parvulus DPUA 1573 frente a Staphylococcus spp. multirresistentes de mastite bubalina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(9):805-810. Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: analuporto@yahoo.com.br A mastite é uma inflamação na glândula mamária que pode acarretar perdas na produção e na qualidade do leite, gerando prejuízos econômicos para a pecuária leiteira. O tratamento é baseado na utilização de antibióticos, sendo, em muitos casos, ineficazes devido à resistência bacteriana já conhecida para esta doença. O objetivo deste trabalho foi selecionar linhagens de Streptomyces spp. produtoras de biocompostos com atividade antimicrobiana frente a isolados do gênero Staphylococcus multirresistentes de búfalas com mastite. Bem como, determinar os melhores parâmetros de produção, e avaliar a produção simultânea de ácido clavulânico. A seleção de Streptomyces spp. com capacidade de produzir compostos com atividade antimicrobiana foi realizada através da técnica bloco de gelose. Dentre as 30 espécies de Streptomyces spp. testadas, o micro-organismo Streptomyces parvulus DPUA 1573 apresentou melhores resultados, sendo capaz de inibir o crescimento de 7 isolados Staphylococcus spp. multirresistentes. Posteriormente, a espécie selecionada Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi cultivada em diferentes condições pré-determinadas pelo planejamento fatorial 24, onde as variáveis independentes foram: concentração de soja (0,5; 1,0; 1,5%), glicose (0; 0,5; 1g/L), agitação (150; 200; 250rpm) e temperatura (28; 32; 37°C) e todos os ensaios do planejamento foram monitorados até 120 horas de cultivo. Todas as variáveis independentes influenciaram positivamente no crescimento celular, enquanto que para atividade antimicrobiana apenas as variáveis temperatura e agitação apresentaram efeitos significativos positivos. O líquido metabólito produzido por Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi capaz de inibir o crescimento de sete Staphylococcus spp. multirresistentes. As melhores condições de cultivo para a produção de moléculas bioativas por este micro-organismo foi a 37°C, com 250rpm de agitação por período de 72 horas. Nos ensaios que apresentaram atividade antimicrobiana, foi avaliada a produção de ácido clavulânico ao longo do cultivo. A maior concentração de ácido clavulânico foi de 269,84g/L obtidas nas condições de 1,5% de farinha de soja em ausência de glicose no tempo de 96 horas. A linhagem Streptomyces parvulus DPUA 1573 foi eficiente contra Staphylococcus spp. multirresistentes isolados de mastite em búfalas, ainda apresentando concomitantemente produção de ácido clavulânico com o potencial uso farmacêutico.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Spanamberg A., Ferreiro L., Machado G., Fraga C.F. & Araujo R. 2016. Identification and characterization of Aspergillus fumigatus isolates from broilers. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):591-594. Laboratório de Micologia, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: spanamberg.ad@gmail.com Aspergillosis is one of the main causes of mortality in birds. The pulmonary system is most frequently affected, with lesions observed in the air sacs and lungs of a wide variety of bird species. The aim of this study was to confirm by molecular methods the identification and the genetic diversity of Aspergillus fumigatus isolates of lung’s samples from healthy broilers (Galus galus domesticus). Forty-four (9.5%) isolates of lung’s samples were confirmed as A. fumigatus by polymerase chain reaction (PCR) multiplex (amplification of β-tub and rodA gene fragments). Microsatellite typing for A. fumigatus was used to analyse all avian isolates. Among them, 40 genotypes (90.9%) were observed only one time. The results showed a high variability and multiple genotypes of de A. fumigatus collected from lung’s samples of broilers.

• Aspergillus fumigatus genotyping genotipagem

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Spanamberg A., Ferreiro L., Machado G., Fraga C.F. & Araujo R. 2016. Identification and characterization of Aspergillus fumigatus isolates from broilers. [Identificação e caracterização de Aspergillus fumigatus isolados de frangos de corte. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):591-594. Laboratório de Micologia, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: spanamberg.ad@gmail.com Aspergilose é uma das principais causas de mortalidade em aves. O sistema pulmonar de uma grande variedade de espécies de aves é o mais frequentemente afetado, com lesões nos sacos aéreos e pulmões. Objetivou-se confirmar por métodos moleculares a identificação e a diversidade genética de Aspergillus fumigatus isolados de amostras pulmonares de frangos de corte sadios (Galus galus domesticus). Quarenta e quatro (9,5%) isolados foram confirmados como A. fumigatus através de reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex (amplificação de fragmentos dos genes β-tub e rodA). Todos isolados foram tipificados, sendo quarenta (90,9%) observados apenas uma vez. Os resultados mostram uma alta variabilidade e múltiplos genótipos de A. fumigatus obtidos de amostras pulmonares de frangos, de corte.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ferreira M.R.A., Silva T.S., Stella A.E., Conceição F.R., Reis E.F. & Moreira C.N. 2015. Detection of virulence factors and antimicrobial resistance patterns in Shiga toxin-producing Escherichia coli isolates from sheep. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(9):775-780. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Goiás, Regional Jataí, Rodovia BR-364 Km 192 nº3.800, Parque Industrial, Cx. Postal 3, Jataí GO 75801-615, Brazil. E-mail: cissanm@yahoo.com.br In order to detect virulence factors in Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) isolates and investigate the antimicrobial resistance profile, rectal swabs were collected from healthy sheep of the races Santa Inês and Dorper. Of the 115 E. coli isolates obtained, 78.3% (90/115) were characterized as STEC, of which 52.2% (47/90) carried stx1 gene, 33.3% (30/90) stx2 and 14.5% (13/90) both genes. In search of virulence factors, 47.7% and 32.2% of the isolates carried the genes saa and cnf1. According to the analysis of the antimicrobial resistance profile, 83.3% (75/90) were resistant to at least one of the antibiotics tested. In phylogenetic classification grouped 24.4% (22/90) in group D (pathogenic), 32.2% (29/90) in group B1 (commensal) and 43.3% (39/90) in group A (commensal). The presence of several virulence factors as well as the high number of multiresistant isolates found in this study support the statement that sheep are potential carriers of pathogens threatening public health.

• Escherichia coli

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ferreira M.R.A., Silva T.S., Stella A.E., Conceição F.R., Reis E.F. & Moreira C.N. 2015. Detection of virulence factors and antimicrobial resistance patterns in Shiga toxin-producing Escherichia coli isolates from sheep. [Detecção de fatores de virulência e de resistência antimicrobiana em isolados produtores de toxina Shiga de ovinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(9):775-780. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Goiás, Regional Jataí, Rodovia BR-364 Km 192 nº3.800, Parque Industrial, Cx. Postal 3, Jataí GO 75801-615, Brazil. E-mail: cissanm@yahoo.com.br A fim de detectar os fatores de virulência em isolados de E. coli produtoras de toxina Shiga (STEC) e investigar o perfil de resistência aos antimicrobianos, swabs retais foram coletados em ovelhas saudáveis das raças Santa Inês e Dorper. Dos 115 isolados de E. coli obtidos, 78,3% (90/115) foram caracterizados como STEC, dos quais 52,2% (47/90) possuíam o gene stx1, 33,3% (30/90) stx2 e 14,5% (13/90) ambos os genes. Em busca de fatores de virulência, 47,7% e 32,2% dos isolados apresentaram genes saa e cnf1. De acordo com a análise do perfil de resistência a antimicrobianos, 83,3% (75/90) eram resistentes a pelo menos um dos antibióticos testados. Na classificação filogenética, os isolados foram agrupados 24,4% (22/90) no grupo D (patogênico), 32,2% (29/90) no grupo B1 (comensal) e 43,3% (39/90) no grupo A (comensal). A presença de vários fatores de virulência, bem como o elevado número de isolados multirresistentes encontrados neste estudo apoia a afirmação de que as ovelhas são portadoras potenciais de patógenos que ameaçam a saúde pública.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Poppi L.B., Rivaldi J.D., Coutinho T.S., Astolfi-Ferreira C.S., Ferreira A.J.P. & Mancilha I.M. 2015. Effect of Lactobacillus sp. isolates supernatant on Escherichia coli O157:H7 enhances the role of organic acids production as a factor for pathogen control. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):353-359. Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: ajpferr@usp.br Many attempts have been made to establish the control of foodborne pathogens through Lactobacillus isolates and their metabolism products with success being obtained in several situations. The aim of this study was to investigate the antagonistic effect of eight Lactobacillus isolates, including L. casei subsp. pseudoplantarum, L. plantarum, L. reuteri and L. delbrueckii subsp. delbrueckii, on the pathogenic Escherichia coli strain O157:H7. The inhibitory effect of pure cultures and two pooled cultures supernatants of Lactobacillus on the growth of pathogenic bacteria was evaluated by the spot agar method and by monitoring turbidity. Antimicrobial activity was confirmed for L. reuteri and L. delbrueckii subsp. delbrueckii and for a pool of lactic acid bacteria. The neutralized supernatant of the pool exerted a higher antimicrobial activity than that of the individual strains. Furthermore, D-lactic acid and acetic acid were produced during growth of the Lactobacillus isolates studied.

• Lactobacillus Escherichia coli

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Poppi L.B., Rivaldi J.D., Coutinho T.S., Astolfi-Ferreira C.S., Ferreira A.J.P. & Mancilha I.M. 2015. Effect of Lactobacillus sp. isolates supernatant on Escherichia coli O157:H7 enhances the role of organic acids production as a factor for pathogen control. [Efeito do sobrenadante de isolados de Lactobacillus sp. sobre Escherichia coli O157:H7 reforça o papel da produção de ácidos orgânicos como fator de controle patogênico.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):353-359. Departamento de Patologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: ajpferr@usp.br Muitas tentativas têm sido feitas para se estabelecer o controle de patógenos de origem alimentar através do uso de estirpes de Lactobacillus e dos seus produtos de metabolismo, com sucesso sendo sucedido em várias situações. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito antagônico do sobrenadante de culturas de oito isolados de Lactobacillus, incluindo L. casei subsp. pseudoplantarum, L. plantarum L. reuteri e L. delbrueckii subsp. delbrueckii, sobre Escherichia coli amostra O157:H7. Os efeitos inibidores de culturas puras e de dois “pools” de cultura de Lactobacillus sobre o crescimento da bactéria foram avaliados através do método de inibição em ágar e através do monitoramento da turbidez da cultura bacteriana. A atividade antimicrobiana foi confirmada para Lactobacillus reuteri e Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii e para o “pool” de bactérias acido-láctica. O sobrenadante neutralizado do “pool” de Lactobacillus exerceu uma atividade antimicrobiana mais elevada do que aquela das estirpes individuais. Além disso, ácido D-láctico e ácido acético foram produzidos durante o crescimento dos Lactobacillus estudados.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rodrigues C.G., Melo R.T., Fonseca B.B., Martins P.A., Ferreira F.A., Araújo M.B.J. & Rossi D.A. 2015. Occurrence and characterization of Campylobacter spp. isolates in dogs, cats and children. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):365-370. Laboratório de Biotecnologia Animal Aplicada, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Rua Ceará s/n, Bloco 2D, Sala 43, Bairro Umuarama, Uberlândia, MG 38402-018, Brazil. E-mail: bialucas@yahoo.com.br To improve the understanding of implications of Campylobacter spp. infections in pets and children of different environments were analysed 160 faecal samples from children and 120 from pets (103 dogs and 17 cats). Campylobacter spp. were detected in 6.87% of the children and in 18.3% of the dogs and cats. From 33 stool samples positive for Campylobacter spp., 57.6% were identified as C. jejuni, and 33.4% were identified as C. coli. More than 50% of the isolates in pets were resistant to ceftiofur, sulphazotrim, norfloxacin and tetracycline. In humans, most of the isolates were resistant to amoxicillin, cefazolin, ceftiofur, erythromycin and norfloxacin. From 19 isolates of C. jejuni, 11 isolates from children and 5 from dogs contained two to four of the virulence genes flaA, pldA, cadF or ciaB. We found an association between the presence of virulence genes and diarrhoea. Furthermore, an association was observed between the presence of Campylobacter spp. and diarrhoea in dewormed pets with blood picture suggestive of bacterial infection, and the therapeutic use of antibiotics was associated with more positive detection of Campylobacter spp. in the faeces of pets. Our data indicate that virulent strains of Campylobacter spp. can be risk factor to diarrhoea in animals, and that high resistance to antimicrobial agents is common in pets.

• Campylobacter spp. diarrhoea diarreia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rodrigues C.G., Melo R.T., Fonseca B.B., Martins P.A., Ferreira F.A., Araújo M.B.J. & Rossi D.A. 2015. Occurrence and characterization of Campylobacter spp. isolates in dogs, cats and children. [Ocorrência e caracterização de isolados de Campylobacter spp. em cães, gatos e crianças.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):365-370. Laboratório de Biotecnologia Animal Aplicada, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Rua Ceará s/n, Bloco 2D, Sala 43, Bairro Umuarama, Uberlândia, MG 38402-018, Brazil. E-mail: bialucas@yahoo.com.br Com o objetivo de melhorar o entendimento das infecções por Campylobacter spp. em cães, gatos e crianças no Brasil, foram avaliadas 160 amostras fecais de crianças e 120 swabs retais de pets (103 cães e 17 gatos). Do total das amostras das crianças, 6,87% foram positivas para Campylobacter spp. e em cães e gatos a positividade foi de 18,3%. Das 33 amostras positivas para Campylobacter spp., 57,6% foram identificadas como C. jejuni e 33,4% foram identificadas como C. coli. Mais de 50% das amostras isoladas de pets foram resistentes a ceftiofur, sulphazotrim, norfloxacina e tetraciclina. Em crianças, a maioria das amostras foi resistente a amoxilina, cefazolina, ceftiofur, eritromicina e norfloxacina. De 19 isolados de C. jejuni, 11 isolados de crianças e cinco (5) de cães tinham dois (2) dos quatro (4) genes de virulência flaA, pldA, cadF or ciaB. Associação positiva entre a presença de Campylobacter spp. e diarreia em cães e gatos foi observada em animais desverminados e com hemograma sugestivo de infecção bacteriana. Também houve associação positiva entre a presença dos genes de virulência e a ocorrência de diarreia, e entre o uso de antibióticos e a positividade para Campylobacter spp. em suabes fecais de pets. Os dados desse trabalho indicam que cepas virulentas de Campylobacter spp. são fatores de risco para diarreia em cães e a resistência antimicrobiana é comum em isolados de cães.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Korb A., Nazareno E.R., Costa L.D., Nogueira K.S., Dalsenter P.R., Tuon F.F.B. & Pomba M.C. 2015. [Molecular typing and antimicrobial resistance in isolates of Escherichia coli from poultry and farmers in the Metropolitan Region of Curitiba, Paraná.] Tipagem molecular e resistência aos antimicrobianos em isolados de Escherichia coli de frangos de corte e de tratadores na Região Metropolitana de Curitiba, Paraná. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):258-264. Departamento de Enfermagem, Universidade do Estado de Santa Catarina, Rua Sete de Setembro 91D, Chapecó, SC 89801-140, Brazil. E-mail: arnildo.korb@udesc.br This study examined the profile of antimicrobial resistance among isolates of Escherichia coli from poultry intensive farming and free-range systems and their farmers. For technique of Gel Electrophoresis Pulsed Field (PFGE) examined the similarity between isolates from poultry intensive farming and their farmers. From 60 samples of poultry feces from intensive farming systems, 60 of free-range extensive systems and 20 of farmers of each segment, the E. coli was isolated and submitted to the test of susceptability to 12 antimicrobials. 24 isolates of E. coli of poultry from intensive farming systems and eight E. coli isolates from farmers poultry intensive farming were analyzed via technique of PFGE. In intensive farming systems poultry, 100% resistence to ampicillin was verified, 43% to cefotaxime, 48% to ceftriaxone, 62% to nalidixic acid, 23% to enrofloxacin, 23% to ciprofloxacin, 83% to tetracycline and 45% to trimetroprim-sulfametoxazol. In the strains of free-range extensive systems, resistance was 20%, 0%, 0%, 5%, 2%, 4%, 33% and 8%, respectively. Resistance to fosfomycin and to nitrofuratoin was found in isolates of poultry from free-range extensive systems. In farmers from intensive farming systems, the resistance to ampicillin was 60%, 25% to ciprofloxacin and 45% to tetracycline, whereas in farmers from free-range extensive systems, it was 20%, 5% and 30%, respectively. In the isolates of E. coli poultry from free-range extensive systems, 46.6% (28/60) presented themselves as susceptible to all tested antimicrobials in comparison to intensive farming systems in which 81,6% (49/60) were multiresistant. Seven clusters of isolates from poultry showed similarity above 80%. Out of these, two clusters of isolates of poultry from different aviaries presented superior clonality to 95%. Furthermore three clusters isolates of poultry and farmers showed similarity greater than 80%, but only one cluster isolate of attendant and poultry were from the same aviary.

• Escherichia coli molecular typing tipagem molecular

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Korb A., Nazareno E.R., Costa L.D., Nogueira K.S., Dalsenter P.R., Tuon F.F.B. & Pomba M.C. 2015. [Molecular typing and antimicrobial resistance in isolates of Escherichia coli from poultry and farmers in the Metropolitan Region of Curitiba, Paraná.] Tipagem molecular e resistência aos antimicrobianos em isolados de Escherichia coli de frangos de corte e de tratadores na Região Metropolitana de Curitiba, Paraná. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):258-264. Departamento de Enfermagem, Universidade do Estado de Santa Catarina, Rua Sete de Setembro 91D, Chapecó, SC 89801-140, Brazil. E-mail: arnildo.korb@udesc.br Este estudo verificou o perfil de resistência aos antimicrobianos entre isolados de Escherichia coli de frangos de corte de criação intensiva e de subsistência e dos respectivos tratadores e a similaridade genotípica entre isolados de E.coli de frangos de corte de criação intensiva e isolados de E. coli de tratadores de frangos de criação intensiva pela técnica de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). 60 amostras de fezes de frangos de criação intensiva, 60 de frangos de corte de criação de subsistência (caipira) e 20 amostras dos tratadores de frangos de criação intensiva e 20 de tratadores de frangos de criação de subsistência. E. coli foram isoladas, identificadas e submetidas ao teste de suscetibilidade a 12 antimicrobianos. Pela PFGE foram analisados 24 isolados de E. coli de frangos de corte de criação intensiva e oito de tratadores. Em isolados E. coli de frangos de criação intensiva a resistência para a ampicilina foi de 100%, cefotaxima 43%, ceftriaxona 48%, ácido nalidíxico 62%, enrofloxacina 23%, ciprofloxacina 23%, tetraciclina 83% e 45% para trimetoprim-sulfametoxazol. Nos isolados de frangos de criação de subsistência foi de 20%, 0%, 0%, 5%, 2%, 4%, 33% e 8%, respectivamente. Resistência à fosfomicina e à nitrofurantoína foi encontrada em isolados de frangos de criação de subsistência. Em isolados de E. coli de tratadores de frangos de corte de criação intensiva a resistência para ampicilina foi de 60%, para ciprofloxacina 25% e para tetraciclina 45%, enquanto nos tratadores de subsistência foram de 20%, 5% e 30%, respectivamente. Isolados de E. coli de frangos em criação de subsistência apresentaram 46,6%(28/60) de suscetibilidade a todos os antimicrobianos testados enquanto que na criação intensiva 81%(49/60) foram multirresistentes. Sete clusters de isolados de E. coli de frangos de diferentes aviários apresentaram similaridade acima de 80%, e dois destes foram superiores a 95%. Três clusters de isolados de frangos e de tratadores apresentaram similaridade superior a 80%. Somente um destes clusters foi de isolado de tratador e de frango do mesmo aviário.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rocha D.T., Salle F.O., Perdoncini G., Rocha S.L.S., Fortes F.B.B., Moraes H.L.S., Nascimento V.P. & Salle C.T.P. 2015. Classification of antimicrobial resistance using artificial neural networks and the relationship of 38 genes associated with the virulence of Escherichia coli isolates from broilers. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(2):137-140. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: cdpa@ufrgs.br Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) is responsible for various pathological processes in birds and is considered as one of the principal causes of morbidity and mortality, associated with economic losses to the poultry industry. The objective of this study was to demonstrate that it is possible to predict antimicrobial resistance of 256 samples (APEC) using 38 different genes responsible for virulence factors, through a computer program of artificial neural networks (ANNs). A second target was to find the relationship between (PI) pathogenicity index and resistance to 14 antibiotics by statistical analysis. The results showed that the RNAs were able to make the correct classification of the behavior of APEC samples with a range from 74.22 to 98.44%, and make it possible to predict antimicrobial resistance. The statistical analysis to assess the relationship between the pathogenic index (PI) and resistance against 14 antibiotics showed that these variables are independent, i.e. peaks in PI can happen without changing the antimicrobial resistance, or the opposite, changing the antimicrobial resistance without a change in PI.

• Escherichia coli antimicrobials agents agentes antimicrobianos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rocha D.T., Salle F.O., Perdoncini G., Rocha S.L.S., Fortes F.B.B., Moraes H.L.S., Nascimento V.P. & Salle C.T.P. 2015. Classification of antimicrobial resistance using artificial neural networks and the relationship of 38 genes associated with the virulence of Escherichia coli isolates from broilers. [Utilização de redes neurais artificiais para a classificação da resistência a antimicrobianos e sua relação com a presença de 38 genes associados a virulência isolados de amostras de Escherichia coli provenientes de frangos de corte.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(2):137-140. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: cdpa@ufrgs.br Escherichia coli patogênica (APEC) para as aves é responsável por vários processos patológicos em aves, sendo considerado como uma das principais causas de morbidade e mortalidade, associado com perdas econômicas para a indústria avícola. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar que é possível predizer a resistência antimicrobiana de 256 amostras de APEC utilizando 38 genes responsáveis por distintos fatores de virulência, através de um programa computacional de redes neurais artificiais (RNAs). O segundo objetivo foi verificar por análise estatística a relação entre o índice de patogenicidade (IP) e a resistência aos 14 antimicrobianos. Os resultados demostraram que as RNAs foram capazes de realizar a classificação correta do comportamento das amostras APEC com uma amplitude de 74,22 a 98,44%, desta forma tornando possível predizer a resistência antimicrobiana. A análise estatística realizada para verificar a relação entre o IP e a resistência aos antimicrobianos demostrou que estas variáveis são independentes, ou seja, podem haver picos no IP sem alteração na resistência, ou até mesmo o contrário, alteração na resistência antimicrobiana sem mudança no IP.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moraes D.F.S.D., Brandão L.N.S., Pitchenin L.C., Filho J.X.O., Morés N., Nakazato L. & Dutra V. 2014. [Occurrence of tad genes associated with biofilm formation in isolates of Pasteurella multocida from lungs of pigs with pneumonia.] Ocorrência de genes tad associados à formação de biofilme em isolados de Pasteurella multocida de pulmões de suínos com pneumonia. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(12):1147-1152. Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular, Universidade Federal do Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2367, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78060-900, Brazil. E-mail: valdutra@ufmt.br Nowadays pig intensive production systems increase microbial selection pressure favoring spread of respiratory diseases. The bacteria Pasteurella multocida is associated with various respiratory diseases in pigs under farming conditions causing high economic losses. In vitro biofilm formation has been described in P. multocida which role is described in tissue colonization, enhancing resistance to host defenses and antibiotics. The aims of this study were to analyze the occurrence of P. multocida in pig pneumonia and health lung microbiota, and occurrence of tad locus genes in these isolates. Seventy isolates of P. multocida were analyzed which sixty seven were from lungs with lesion and three from healthy lungs. Serotype A occurred mainly in lung lesion (85.71%), in healthy lung, instead, only serotype D was observed. Genes tadA, tadB, tadC, tadD, tadE, tadF and tadG were present in 89.55% isolates from lesion lung. Genes tadA, tadB and tadC were present in all isolates from healthy lungs but, tadD, tadE tadF and tadG were present in 0%, 33.3%, 33,3% and 66.6%, respectively. This work associated tadD, tadE and tadF gene positive isolates of P. multocida to lung pneumonic lesions.

• Pasteurella multocida pneumonia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Moraes D.F.S.D., Brandão L.N.S., Pitchenin L.C., Filho J.X.O., Morés N., Nakazato L. & Dutra V. 2014. [Occurrence of tad genes associated with biofilm formation in isolates of Pasteurella multocida from lungs of pigs with pneumonia.] Ocorrência de genes tad associados à formação de biofilme em isolados de Pasteurella multocida de pulmões de suínos com pneumonia. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(12):1147-1152. Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular, Universidade Federal do Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa 2367, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78060-900, Brazil. E-mail: valdutra@ufmt.br Os atuais sistemas de criação intensiva de suínos aumentam a pressão de seleção microbiana propiciando a disseminação de doenças respiratórias. A bactéria Pasteurella multocida é associada a diversas patologias respiratórias em animais submetidos a esse tipo de criação, causando grandes perdas econômicas. A formação de biofilme foi descrita in vitro em P. multocida e fatores analisados indicaram a facilitação na colonização dos tecidos, aumentando a resistência às defesas do hospedeiro e aos antibióticos. Os objetivos deste trabalho foram analisar a ocorrência de P. multocida em pneumonias de suínos e na microbiota de pulmões sem lesão e a ocorrência dos genes do lócus tad nestes isolados. Foram analisados 70 isolados de P. multocida de pulmões, sendo sessenta e sete com lesão e três sem lesão. Isolados do sorotipo A ocorreram principalmente em pulmões com lesões (85,71%), enquanto em pulmões sem lesão observou-se somente o sorotipo D. Os genes tadA, tadB, tadC, tadD, tadE tadF e tadG estavam presentes em 89,55% dos isolados de pulmões com lesões. Os genes tadA, tadB e tadC estavam presentes em todos os isolados de pulmões sem lesão, porém os genes tadD, tadE, tadF e tadG estavam presentes em 0%, 33,3%, 33,3% e 66,6%, dos isolados sem lesão, respectivamente. Neste trabalho observou-se a associação da ocorrência dos genes tadD, tadE e tadF em isolados de P. multocida e a presença de lesões em pulmões.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Alzamora Filho F., Vasoncellos S.E.G., Gomes H.M., Cavalcante M.P., Suffys P.N. & Costa J.N. 2014. [Multiple strains of Mycobacterium bovis isolates identified by molecular typing of bovine animals slaughtered in slaughterhouse.] Multiplas estirpes de isolados de Mycobacterium bovis identificados por tipagem molecular em bovinos abatidos em matadouros-frigoríficos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(2):103-108. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, Universidade Estadual de Santa Cruz, Rodovia Jorge Amado Km 16, Bairro Salobrinho, Ilhéus, BA 45662-900, Brazil. E-mail: alzafilho@yahoo.com.br The aim of this study was to use bacteriological and molecular methods to identify Mycobacterium bovis in lesions observed in cattle carcasses during routine post-mortem inspection in slaughterhouses with official inspection service. It was accompanied the slaughter and inspection of 825,394 cattle, healthy ante mortem examination by the official inspection service in ten slaughterhouses in the state of Bahia. Carcasses of 180 cattle presented lesions suggestive of tuberculosis and other lymphadenitis. In bacterial isolation, 25 samples showed dysgonic growth of colonies of creamy-yellow in medium-Stonebrink Leslie. From these isolates, 14 were identified as M. bovis and the multiplex PCR technique spoligotyping was discriminated against eight different spoligotypes of M. bovis, seven previously described in the literature and a new spoligotypes without former description. The major spoligotypes was SB0121, with five samples which has been described in Brazil and other countries, followed by two clusters, SB295 and SB1055, with two isolates each. The SB1145 and SB1648 spoligotypes were reported only in Brazil and Denmark, respectively. The spoligotypes SB140 has been found in Brazil, Argentina, Uruguay and Paraguay. These results demonstrate that the spoligotypes obtained are shared, so far, among Brazilian states and among Latin America and Europe. Thus, molecular discrimination of isolates of M. bovis by Spoligotyping constitutes a tool for epidemiological studies of bovine tuberculosis in the state of Bahia.

• Mycobacterium bovis tuberculosis tuberculose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Alzamora Filho F., Vasoncellos S.E.G., Gomes H.M., Cavalcante M.P., Suffys P.N. & Costa J.N. 2014. [Multiple strains of Mycobacterium bovis isolates identified by molecular typing of bovine animals slaughtered in slaughterhouse.] Multiplas estirpes de isolados de Mycobacterium bovis identificados por tipagem molecular em bovinos abatidos em matadouros-frigoríficos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(2):103-108. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, Universidade Estadual de Santa Cruz, Rodovia Jorge Amado Km 16, Bairro Salobrinho, Ilhéus, BA 45662-900, Brazil. E-mail: alzafilho@yahoo.com.br O objetivo do presente trabalho foi utilizar métodos bacteriológicos e moleculares para a identificação do Mycobacterium bovis em lesões observadas em carcaças de bovinos durante a inspeção post mortem de rotina em matadouros-frigoríficos com serviço de inspeção oficial. Foi acompanhado o abate e a inspeção de 825.394 bovinos, sadios ao exame ante mortem pelo serviço de inspeção oficial em dez matadouros-frigoríficos do estado da Bahia. Carcaça de 180 bovinos apresentaram lesões sugestivas de tuberculose e por outras linfadenites. No isolamento bacteriano, 25 amostras apresentaram crescimento disgônico de colônias de coloração creme-amareladas em meio de cultura Stonebrink-Leslie. Desses isolados, 14 foram identificados como M. bovis PCR multiplex e pela técnica do spoligotyping foram discriminados oito diferentes espoligotipos do M. bovis, sendo sete descritos na literatura e um novo spoligotipo sem descrição anterior. O espoligotipo majoritário foi o SB0121, com cinco amostras, sendo descrito no Brasil e em outros países, seguidos por dois clusters, SB295 e SB1055, com dois isolados cada. O espoligotipo SB1145 e SB1648 foram referidos apenas no Brasil e Dinamarca, respectivamente. O espoligotipo SB140 já foi encontrado no Brasil, Argentina, Uruguai e Paraguai. Estes resultados demonstram que os espoligotipos obtidos são compartilhados, até o momento, entre estados brasileiros e entre países da América Latina e Europa. Sendo assim, a discriminação molecular de isolados de M. bovis através do Spoligotyping constitui-se numa ferramenta para estudos epidemiológicos da tuberculose bovina no Estado da Bahia.