PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Oliveira S.T.L., Veneroni-Gouveia G., Santos A.C., Sousa S.M.N., Veiga M.L., Krewer C.C. & Costa M.M. 2014. Ascophyllum nodosum in the diet of tilapia (Oreochromis niloticus) and its effect after inoculation of Aeromonas hydrophila. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(5):403-408. Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Campus Ciências Agrárias, Colegiado Acadêmico de Zootecnia, Rodovia BR-407 Km 12, Lote 543, Projeto de Irrigação Nilo Coelho s/n, C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: mateus.costa@univasf.edu.br The objective of this study was to evaluate the effect of Ascophyllum nodosum brown seaweed meal (FAM) on the health of Nile tilapia submitted to inoculation with Aeromonas hydrophila. The experiment was conducted for a period of 40 days using 120 Nile tilapia fingerlings, with age of 40 days, distributed in 20 tanks. A diet including Ascophyllum nodosum seaweed meal at 20g.kg-1 and a control diet (without FAM) were provided which constituted the treatments. Thirty days after beginning the experiment, A. hydrophila was inoculated by bacterial inoculum diluted in sterile saline solution at a concentration of 106 CFU ml-1. Except for the width, which was greater for the treatment with the provision of FAM (P<0.05), there was no influence on the performance parameters of the fingerlings, but the occurrence of lesions in animals inoculated with A. hydrophila and fed with FAM was lower and they also exhibited a decline in the lesions in a shorter period of time than the control group. FAM prevents hepatopancreatic congestion in infected animals. Ascophyllum nodosum brown seaweed meal reduced the number of lesions in fish in a shorter time when compared to the control group.

• Oreochromis niloticus tilapia Ascophyllum nodosum antimicrobials Aeromonas hydrophila aquaculture tilapia antimicrobianos aquicultura

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Oliveira S.T.L., Veneroni-Gouveia G., Santos A.C., Sousa S.M.N., Veiga M.L., Krewer C.C. & Costa M.M. 2014. Ascophyllum nodosum in the diet of tilapia (Oreochromis niloticus) and its effect after inoculation of Aeromonas hydrophila. [Ascophyllum nodosum na dieta de tilapia (Oreochromis niloticus)e o efeito dela depois da inoculação com Aeromonas hydrophila.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(5):403-408. Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Campus Ciências Agrárias, Colegiado Acadêmico de Zootecnia, Rodovia BR-407 Km 12, Lote 543, Projeto de Irrigação Nilo Coelho s/n, C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: mateus.costa@univasf.edu.br O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da farinha de alga marinha marrom Ascophyllum nodosum (FAM) em alevinois de tilápias do Nilo sob desafio sanitário com inoculação de Aeromonas hydrophila. O experimento foi realizado durante um período de 40 dias com a utilização de 120 alevinos de tilápia do Nilo, distribuídos em 20 aquários. Foi fornecida uma ração com inclusão da farinha da alga marinha Ascophyllum nodosum a 20g.kg ração-1 e uma ração testemunha (sem FAM), que constituiram os tratamentos. Após 30 dias experimentais foi realizada a inoculação de Aeromonas hydrophila por meio de um preparado de inóculo bacteriano com diluição em solução salina estéril a concentração de 106 UFC/ml. Exceto para a largura, que foi maior para o tratamento com o fornecimento da FAM (P<0,05), não houve influência sobre parâmetros de desempenho dos alevinos, mas a ocorrência de lesões nos animais inoculados com A. hydrophila e alimentados com FAM foi menor e, eles também exibiram um declínio das lesões em um menor período de tempo em relação ao grupo controle. FAM impediu a congestão hepatopancreática em animais infectados. A farinha de alga marinha marrom Ascophyllum nodosum reduziu o número de lesões nos peixes em menor tempo quando comparado ao controle.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro G., Massoco C.O. & Lacerda Neto J.C. 2013. Culture of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue–derived stromal vascular fraction cells in different media. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(Supl.1):20-24. Departamento de Patologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: gesiane@usp.br The objective of this study was to evaluate the culture of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue–derived stromal vascular fraction cells in two different cell culture media. Five adult horses were submitted to bone marrow aspiration from the sternum, and then from the adipose tissue of the gluteal region near the base of the tail. Mononuclear fraction and stromal vascular fraction were isolated from the samples and cultivated in DMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum or in AIM-V medium. The cultures were observed once a week with an inverted microscope, to perform a qualitative analysis of the morphology of the cells as well as the general appearance of the cell culture. Colony-forming units (CFU) were counted on days 5, 15 and 25 of cell culture. During the first week of culture, differences were observed between the samples from the same source maintained in different culture media. The number of colonies was significantly higher in samples of bone marrow in relation to samples of adipose tissue.

• Bone marrow adipose tissue medula óssea tecido adiposo

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro G., Massoco C.O. & Lacerda Neto J.C. 2013. Culture of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue–derived stromal vascular fraction cells in different media. [Cultivo de células da fração mononuclear da medulla óssea e da fração vascular stromal do tecido adipose de equinos em diferentes meios.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(Supl.1):20-24. Departamento de Patologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: gesiane@usp.br O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo de células da fração mononuclear da medula óssea e da fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos em dois diferentes meios. Cinco cavalos foram submetidos à aspiração da medula óssea do esterno e à coleta de tecido adiposo da região glútea, próxima à inserção da cauda. A fração mononuclear e a fração vascular estromal foram obtidas das amostras e cultivadas em meio DMEM suplementado com soro fetal bovino a 10% ou em meio AIM-V. As culturas foram observadas uma vez por semana com um microscópio de luz invertida, com o intuito de se realizar uma análise qualitativa das características morfológicas das células, bem como do aspecto geral do cultivo celular. As unidades formadoras de colônia (CFU) foram contadas nos dias 5, 15 e 25 do cultivo celular. Durante a primeira semana, foram observadas diferenças entre amostras obtidas de mesma origem mantidas em diferentes meios. O número de colônias foi significativamente maior nas amostras de medula óssea em relação às amostras de tecido adiposo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Crepaldi C.R., Merighe G.K.F., Laure H.J., Rosa J.C., Meirelles F.V. & Cerqueira César M. 2013. [Isolation and culture of neurons and neurospheres from chicken brain cortex.] Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(Supl.1):45-50. Laboratório de Neurociência e Proteômica, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-mail: mccesar@usp.br Cell culture methods are used for studies of protein interactions in neural cells, helping to detect the interactome of proteins linked to generation of central nervous system diseases. For this reason, neural cells and neurospheres isolated from cortical chicken brain are a current model for studies of neurological diseases, such as epilepsy. Chicken brain has key characteristics on its proteome, with a differential expression of proteins linked to energy metabolism, some of them (VDAC 1 and VDAC 2) play an important role in understanding mechanism of refractory epilepsy. Using the methods described, we found neurospheres, in which cells grow in structures with the ideal diameter of 100-200µm within seven days after isolation. Neurospheres differentiation was obtained after adhesion of these cells to surfaces coated with poly-D-Lysine, detected by migration of fibers inside them. Unlike neurospheres, neurons extended neurites after 11 days of isolation. Here we describe a method to isolate and culture neurons and neurospheres from chicken cerebral cortex. Such “in vitro” model can be utilized on studies of neuronal protein differential expression and interaction. Cultures of isolated neurons represent an accessible model on studies of apoptosis and channel blockers of key proteins linked to brain metabolism.

• Brain cortex neuron neurosphere córtex cerebral neurônio neuroesferas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Crepaldi C.R., Merighe G.K.F., Laure H.J., Rosa J.C., Meirelles F.V. & Cerqueira César M. 2013. [Isolation and culture of neurons and neurospheres from chicken brain cortex.] Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(Supl.1):45-50. Laboratório de Neurociência e Proteômica, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-mail: mccesar@usp.br Métodos de cultivo celular são convenientes na realização de análises funcionais de alterações/interações protéicas das células neuronais, auxiliando a decifrar o interactoma de proteínas chaves na neurogênese de doenças do Sistema Nervoso Central. Por esse motivo, culturas de neurônios e neuroesferas isolados do córtex cerebral aviar representam um modelo acessível para o estudo de diversas doenças neurológicas, tal como a epilepsia. A espécie aviar apresenta peculiaridades em seu proteoma neuronal, visto a presença de uma expressão diferenciada de proteínas chaves no metabolismo energético cerebral, algumas destas (VDAC1 e VDAC2) desempenham papel importante na compreensão do mecanismo da epilepsia refratária. A metodologia estabelecida no presente estudo obteve cultivo de neuroeferas, onde as células cresceram tipicamente em aglomerados atingindo, dentro de 7 dias, o diâmetro ideal de 100-200 µm. A diferenciação celular das neuroesferas foi obtida após a aderência destas às placas tratadas com poli-D-lisina, evidenciada pela migração de fibras do interior da neuroesfera. Ao contrário das neuroesferas, os neurônios em cultivo extenderam seus neuritos após 11 dias de isolamento. Tal modelo in vitro pode ser utilizado com sucesso na identificação das variáveis neuroproteômicas, propiciando uma avaliação global das alterações dinâmicas e suas interações protéicas. Tal modelo pode ter aplicações em estudos dos efeitos de indutores da morte celular e bloqueadores de canais de membrana mitocondriais em proteínas chaves do metabolismo energético cerebral.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rebouças M.F., Loureiro D., Bastos B.L., Moura-Costa L.F., Hanna S.A., Azevedo V., Meyer R. & Portela R.W. 2013. Development of an indirect ELISA to detect Corynebacterium pseudotuberculosis specific antibodies in sheep employing T1 strain culture supernatant as antigen. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1296-1302. Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia, Av. Reitor Miguel Calmon s/n, Vale do Canela, Salvador, BA 40110-100, Brazil. E-mail: rwportela@gmail.com Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of caseous lymphadenitis (CLA), a chronic disease that affects goats and sheep, characterized by granuloma formation in subcutaneous and internal lymph nodes. CLA causes significant economic losses to commercial goat herds. In this study, we aimed to test secreted antigens secreted from T1 strain bacteria grown in brain heart infusion (BHI) broth in an indirect ELISA system to determine the presence of specific immunoglobulins against C. pseudotuberculosis. We analyzed the BHI antigen electrophoretic profile and the recognition pattern by infected sheep sera samples. The ELISA results were compared with multiplex PCR assay and IFN-gamma production. The ELISA was able to discriminate between negative and positive animals, with a sensitivity of 89% and a specificity of 99%, using microbiological isolation as gold standard. When this assay was compared with multiplex PCR and specific IFN-gamma quantification, six discrepant results were found among thirty-two samples. We concluded that the ELISA using antigens secreted from C. pseudotuberculosis T1 strain growth in BHI broth culture can be used for the serodiagnosis of CLA in sheep.

• Caseous lymphadenitis Corynebacterium pseudotuberculosis linfadenite caseosa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rebouças M.F., Loureiro D., Bastos B.L., Moura-Costa L.F., Hanna S.A., Azevedo V., Meyer R. & Portela R.W. 2013. Development of an indirect ELISA to detect Corynebacterium pseudotuberculosis specific antibodies in sheep employing T1 strain culture supernatant as antigen. [Desenvolvimento de ELISA indireto para detectar anticorpos específicos contra Corynebacterium pseudotuberculosis em ovinos utilizando o supernadante de cultura da cepa T1 como antígeno.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1296-1302. Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia, Av. Reitor Miguel Calmon s/n, Vale do Canela, Salvador, BA 40110-100, Brazil. E-mail: rwportela@gmail.com Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC) uma doença crônica que afeta ovinos e caprinos caracterizada pela formação de granulomas em linfonodos. A LC causa perdas econômicas significativas em criações de pequenos ruminantes. Este trabalho teve como objetivo testar antígenos secretados da cepa T1 da bactéria em um sistema de ELISA indireto para detecção de anticorpos específicos contra C. pseudotuberculosis. O perfil eletroforético do antígeno foi analisado, bem como o padrão de reconhecimento por soros de animais infectados. Os resultados do ELISA foram comparados com ensaio de multiplex PCR e com teste de indução de produção específica de IFN-gama. O ELISA foi capaz de discriminar animais positivos de animais negativos, com sensibilidade de 89% e especificidade de 99%, usando o isolamento microbiológico como padrão ouro. Quando o ensaio foi comparado com o multiplex PCR e a produção específica de IFN-gama, somente seis resultados discrepantes foram encontrados em trinta e duas amostras. Pode-se concluir que o ensaio de ELISA desenvolvido pode ser utilizado com alto grau de confiança para o diagnóstico da LC em ovinos.

Abstract in English:

The aim of this study was to describe the hematological parameters and histopathologic alterations in cobia infected by Amyloodinium ocellatum. A group of 27 fish were anesthetized to collect blood samples and euthanatized to collect mucus and tissue fragments of skin and gills. The prevalence and parasitic intensity of the infection, besides hematologic parameters and histopathologic alterations, was measured. Parasite prevalence in the gills was 100% and in the mucus 80.8%, and the average intensity of infection in gills and skin was 683.5 e 67.1 respectively. The mean values of hematological parameters were: erythrocytes 4.3x106μL; PCV 26%, MCV 64.2 fL, plasma protein 5.8mg/dL, thrombocytes 5.2x103/μL and leukocytes 3.6x103/μL . Furthermore was found hyperplasia of the respiratory epithelium accompanied by lamellar fusion, detachment of the epithelium, venous sinus dilatation, aneurysm formation and rupture of the lamellar epithelium, hemorrhage, necrosis and lymphocytic inflammatory reaction. The parasite was observed between the gills lamellae, the AMV ranged from mild to severe and AHI values were 76.8. The study assumes importance because it is the first study in Rachycentron canadum, a fish that stands out with potential for growing.

• Amyloodinium ocellatum cobia Rachycentron canadum aquaculture parasite

Abstract in Portuguese:

O objetivo do trabalho foi descrever os parâmetros hematológicos e as alterações histopatológicas em bijupirás infectados por Amyloodinium ocellatum. Um grupo de 27 peixes foi anestesiado para coleta de amostras de sangue e eutanasiados para coleta de muco e fragmentos de tecido cutâneo e branquial. Foram avaliadas a prevalência e a intensidade parasitária da infecção, assim como os valores de parâmetros hematológicos e alterações histopatológicas. A prevalência parasitária nas brânquias foi de 100% e no muco foi de 80,8% e as intensidades parasitárias médias foram de 683,5 nas brânquias, e 67,1 no muco cutâneo. Os valores médios dos parâmetros hematológicos foram: eritrócitos 4,3x106µL; VG 26%; VGM 64,2fL; proteína plasmática 5,8mg/dL; trombócitos 5,2 x103/µL e leucócitos 3,6 x103/µL. Além disso, foram verificadas hiperplasia do epitélio respiratório acompanhada de fusão lamelar, descolamento do epitélio, dilatação do seio venoso, formação de aneurisma, ruptura do epitélio lamelar, hemorragia, necrose, reação inflamatória linfocítica. O parasito foi observado nas lamelas branquiais, o VMA variou do grau discreto ao severo e o IAH foi de 76,8. A pesquisa assume importância por se tratar dos primeiros estudos em Rachycentron canadum, um peixe que se destaca com potencial ao cultivo.

• Amyloodinium ocellatum bijupirá Rachycentron canadum aquicultura parasito

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva U.A.T., Cottens K., Ventura R., Boeger W.A. & Ostrensky A. 2012. Different pathways in the larval development of the crab Ucides cordatus (Decapoda, Ocypodidae) and their relation with high mortality rates by the end of massive larvicultures. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):284-288. Grupo Integrado de Aquicultura e Estudos Ambientais, Universidade Federal do Paraná, Rua dos Funcionários 1540, Curitiba, PR 80035-050, Brazil. E-mail: ubiratansilva@gmail.com One of the most limiting factors affecting the larval rearing of Ucides cordatus in the laboratory is a period of high mortality, which usually occurs late in the course of the larviculture during the metamorphosis from the zoeal to the megalopal phase. The objective of the present research was to analyze the post-embryonic development of U. cordatus on an individual basis and, in particular, to search for patterns linking disturbances in the molting process to the high larval death rates observed in massive larvicultures. A total of 50 larvae were individually reared from hatching to metamorphosis into the megalopal phase under controlled conditions, fed a combination of microalgae and rotifers. The survivorship rate was 70% until zoea V. The 35 surviving zoea V larvae followed two different pathways. Eleven underwent metamorphosis directly to megalopa, eighteen molted to zoea VI and six died as zoea V. In the last molting event, only two zoea VI larvae reached the megalopal stage, while the remaining sixteen died. In further observation under microscope, 13 of the dead zoea VI showed characteristics of the pre-molt stage and pereiopods disproportionably large in relation to the carapace. The observed pattern resembles the Molt Death Syndrome (MDS) described for other decapod species, in which larvae die in the late pre-molt phase of the molting cycle. We suggest that U. cordatus larvae develop disturbances in the molting process similar to the MDS described for other species and that these disturbances are related to a more complex pathway involving the emergence of larval stage zoea VI.

• Ucides cordatus larviculture mangrove crab Molt death syndrome larvicultura caranguejo do mangue síndrome da morte na muda

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva U.A.T., Cottens K., Ventura R., Boeger W.A. & Ostrensky A. 2012. Different pathways in the larval development of the crab Ucides cordatus (Decapoda, Ocypodidae) and their relation with high mortality rates by the end of massive larvicultures. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(4):284-288. Grupo Integrado de Aquicultura e Estudos Ambientais, Universidade Federal do Paraná, Rua dos Funcionários 1540, Curitiba, PR 80035-050, Brazil. E-mail: ubiratansilva@gmail.com Um dos fatores mais limitantes que afetam o cultivo larval de Ucides cordatus (Linnaeus, 1763) em laboratório é um período de alta mortalidade, o qual usualmente ocorre no fim do curso da larvicultura durante a metamorfose da fase de zoea para a de megalopa. O objetivo da presente pesquisa foi analisar o desenvolvimento pósembrionário de U. cordatus em uma base individual e, em particular, procurar por padrões ligando distúrbios no processo de muda com as altas taxas de mortalidade observadas nas larviculturas massivas. Um total de 50 larvas foram cultivadas individualmente da eclosão até a fase de megalopa em condições controladas, alimentadas com uma combinação de microalgas e rotíferos. A taxa de sobrevivência foi de 70% até zoea V. As 35 larvas zoea V sobreviventes seguiram dois diferentes caminhos. Onze realizaram a metamorfose diretamente para megalopa, dezoito mudaram para zoea VI e seis morreram como zoea V. No último evento de muda, apenas duas larvas zoea VI atingiram a fase de megalopa, enquanto as dezesseis restantes morreram. Em investigação posterior sob microscópio, 13 das zoea VI mortas mostravam características de estágio de prémuda e pereiópodes desproporcionalmente grandes em relação à carapaça. O padrão observado lembra a Síndrome da Morte na Muda (MDS) descrita para outras espécies de decápodes, na qual larvas morrem no fim da fase de prémuda do ciclo de mudas. Nós sugerimos que larvas de U. cordatus desenvolvem distúrbios no processo de muda similares à MDS descrita para outras espécies e que esses distúrbios são relacionados a um caminho mais complexo que envolve a ocorrência do estágio larval zoea VI.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Schmidt C., Cargnelutti J.F., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2012. [Experimental vaccine produced in tissue culture confers partial protection against contagious ecthyma in sheep.] Vacina experimental produzida em cultivo celular confere proteção parcial contra o ectima contagioso em ovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(1):11-16. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Contagious ecthyma, also known as orf, is a debilitating disease of sheep and goats caused by the parapoxvirus, orf virus (ORFV). Vaccination has been used with relative success to reduce the losses caused by the disease, yet the current vaccines contain virulent virus, are empirically produced through skin scarification of live lambs, and present questionable efficacy. Therefore, the present study aimed at developing and testing an experimental ORFV vaccine produced in tissue culture. The ORFV strain IA-82 was submitted to 21 passages in BHK-21 cells and then used to immunize lambs (n=30) through skin scarification of the internal face of the hind limb. Vaccination produced localized pustules and scabs lesions in 16 out of 30 animals, indicating an adequate replication of the vaccine virus. Ninety days after vaccination, vaccinated (n=16) and control lambs (n=16) were inoculated with a virulent ORFV strain (106,9TCID50/ml) in the labial commissure. Vaccinated and control lambs developed typical orf lesions, characterized by hyperemia, vesicles, pustules and scab formation. Nonetheless, vaccinated animals developed milder lesions compared to controls and the clinical scores were significantly lower (p<0.05) between days 10 and 22 post-challenge. In addition, the mean duration of clinical disease was significantly reduced in vaccinated animals (p<0.05). Furthermore, vaccinated animals excreted much less virus (p<0.05) and for a significantly shorter period of time than did the controls (13 days versus 22 days, p<0.001). These results demonstrate partial protection by the experimental vaccine and, upon improvement of immunization and protection indices, are promising towards the use of tissue culture-based ORFV vaccines.

• Contagious ecthyma orf ectima contagioso

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Schmidt C., Cargnelutti J.F., Martins M., Weiblen R. & Flores E.F. 2012. [Experimental vaccine produced in tissue culture confers partial protection against contagious ecthyma in sheep.] Vacina experimental produzida em cultivo celular confere proteção parcial contra o ectima contagioso em ovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(1):11-16. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com O ectima contagioso (também conhecido como orf), é uma doença debilitante de ovinos e caprinos causada pelo vírus do orf (ORFV). A vacinação tem sido usada com relativo sucesso no controle da doença. No entanto, as vacinas atuais contêm amostras virulentas do agente, são produzidas por escarificação cutânea de animais, e apresentam eficácia questionável. Assim, o presente trabalho teve como objetivo produzir e testar a eficácia de uma vacina experimental produzida em cultivo celular. A cepa IA-82 do ORFV foi submetida a 21 passagens em cultivo de células BHK-21 e usada para vacinar ovinos jovens (n=30), por escarificação cutânea na face interna da coxa. A vacinação produziu pústulas e crostas em 16 dos 30 ovinos vacinados, indicando imunização adequada. Noventa dias após a vacinação, ovinos vacinados (n=16) e controles (n=16) foram inoculados com uma cepa virulenta do ORFV (106,9DICC50/mL) após escarificação na comissura labial. Todos os animais desenvolveram lesões típicas de ectima, incluindo hiperemia, vesículas, pústulas e crostas. No entanto, os animais vacinados desenvolveram lesões mais leves e passageiras do que os controles, e os escores clínicos foram estatisticamente diferentes (p<0,05) entre os dias 10 e 22 pós-desafio. Além disso, o tempo de duração da doença foi significativamente inferior (p<0,05) nos animais vacinados. Os animais vacinados também excretaram menor quantidade de vírus (p<0,05) e por um período significativamente mais curto do que os controles (13 dias versus 22 dias, p<0,001). Esses resultados demonstram a proteção parcial conferida pela vacina experimental e, dependendo da melhoria dos índices de imunização e proteção, são promissores no sentido da utilização de vacinas contra o ORFV produzidas em cultivo celular.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Dezengrini R., Silva S.C., Weiss M., Kreutz L.C., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [Activity of three antiviral drugs against bovine herpesviruses 1, 2 and 5 in cell culture.] Atividade de três drogas antivirais sobre os herpesvírus bovino tipos 1, 2 e 5 em cultivo celular. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):855-860. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com The activity of three anti-herpetic drugs (Acyclovir [ACV], Gancyclovir [GCV] and Foscarnet [PFA]) was tested against bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) and 5 (BoHV-5) in vitro using the plaque reduction assay. Different drug concentrations were tested against one hundred 50% tissue culture infectious dose (TCID50) of the respective viruses. Drug concentrations lower than 200µg/mL resulted in viability rates of more than 80% for MDBK and Hep2 cells in the MTT test (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide). The selectivity index (IS) of the drugs was calculated dividing the concentration of the drug that is cytotoxic for 50% of the cells (CC50) by the concentration of the drug that was effective in reducing by 50% the number of viral plaques (EC50) for the three herpesviruses. Thus, ACV was shown to be moderately active against BoHV-1 (EC50: 112.9mg/mL; IS: 4.5), BoHV-2 (EC50: 114.2mg/mL; IS: 4.5) and BoHV-5 (EC50: 96.9mg/mL; IS: 5.3). GCV was effective against BoHV-2 (EC50: 33.5mg/mL; IS: 16.6), moderately effective against BoHV-5 (EC50: 123.2mg/mL; IS: 4.5) and poorly active against BoHV-1 (EC50: 335.8mg/mL; IS: 1.7). PFA exhibited the highest antiviral activity, being the only drug that, at concentration of 100mg/mL, completely inhibited plaque formation by all three viruses. PFA was the most effective in vitro against BoHV-1 (EC50: 29.5mg/mL; IS: 42.2), BoHV-2 (EC50: 45.2mg/mL; IS: 27.6) and BoHV-5 (EC50: 7.8mg/mL; IS: 160.6). Thus, the results indicate that PFA is a promising candidate for experimental therapeutic testing in vivo against bovine herpesviruses.

• Antivirals BoHV-1 BoHV-2 BoHV-5 Foscarnet Gancyclovir Acyclovir antivirais Ganciclovir Aciclovir

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Dezengrini R., Silva S.C., Weiss M., Kreutz L.C., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [Activity of three antiviral drugs against bovine herpesviruses 1, 2 and 5 in cell culture.] Atividade de três drogas antivirais sobre os herpesvírus bovino tipos 1, 2 e 5 em cultivo celular. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):855-860. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com A atividade de três fármacos antivirais (Aciclovir [ACV], Ganciclovir [GCV] e Foscarnet [PFA]) foi testada in vitro frente aos herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) e 5 (BoHV-5). Para isso, utilizou-se o teste de redução de placas virais em cultivo celular, testando-se diferentes concentrações dos fármacos frente a 100 doses infectantes para 50% dos cultivos celulares (DICC50) dos respectivos vírus. Pelo teste de MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), verificou-se que concentrações inferiores a 200µg/mL dos três antivirais resultaram em índices de viabilidade de células MDBK e Hep2 superiores a 80%. Com base na concentração citotóxica para 50% das células (CC50) e na concentração dos fármacos efetiva para inibir em 50% o número de placas virais (EC50), calculou-se o índice de seletividade (IS) dos antivirais para os três herpesvírus. Assim, o ACV demonstrou ser moderadamente ativo frente ao BoHV-1 (EC50: 112,9mg/mL e IS: 4,5), ao BoHV-2 (EC50: 114,2 mg/mL e IS: 4,5) e BoHV-5 (EC50: 96,9mg/mL e IS: 5,3). O GCV apresentou atividade moderada frente ao BoHV-2 (EC50: 33,5mg/mL e IS: 16,6) e, em menor grau, contra o BoHV-5 (EC50: 123,2mg/mL e IS: 4,5), sendo ineficaz frente ao BoHV-1 (EC50: 335,8mg/mL e IS: 1,7). O PFA apresentou atividade antiviral mais pronunciada, sendo o único fármaco que, na concentração de 100µg/mL, inibiu completamente a produção de placas pelos três vírus testados. O PFA foi o mais efetivo in vitro frente ao BoHV-1 (EC50: 29,5mg/mL e IS: 42,2), ao BoHV-2 (EC50: 45,2mg/mL e IS: 27,6) e ao BoHV-5 (EC50: 7,8mg/mL e IS: 160,6). Portanto, os resultados obtidos indicam que o PFA pode se constituir em um candidato para terapia experimental de infecções pelos herpesvírus de bovinos in vivo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Araújo V.R., Lima-Verde I.B., Name K.P.O., Báo S.N., Campelo C.C., Silva J.R.V., Rodrigues A.P.R. & Figueiredo J.R. 2010. Bone Morphogenetic Protein-6 (BMP-6) induces atresia in goat primordial follicles cultured in vitro. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(9):770-776. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-Antrais, Universidade Estadual do Ceará, Av. Paranjana 1700, Campus do Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brazil. E-mail: val_exclusiva@yahoo.com.br This study investigated the effects of bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) on in vitro primordial follicle development in goats. Samples of goat ovarian cortex were cultured in vitro for 1 or 7 days in Minimum Essential Medium (control medium) supplemented with different concentrations of BMP-6. Follicle survival, activation and growth were evaluated through histology and transmission electron microscopy (TEM). After 7 days of culture, histological analysis demonstrated that BMP-6 enhanced the percentages of atretic primordial follicles when compared to fresh control (day 0). Nevertheless, BMP-6 increased follicular and oocyte diameter during both culture periods. As the culture period progressed from day 1 to day 7, a significant increase in follicle diameter was observed with 1 or 50ng/ml BMP-6. However, on the contrary to that observed with the control medium TEM revealed that follicles cultured for up to 7 days with 1 or 50ng/ml BMP-6 had evident signs of atresia. In conclusion, this study demonstrated that BMP-6 negatively affects the survival and ultrastructure of goat primordial follicles.

• Bone Morphogenetic Protein-6 folliculogenesis Proteína Morfogenética Óssea-6 foliculogênese

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Araújo V.R., Lima-Verde I.B., Name K.P.O., Báo S.N., Campelo C.C., Silva J.R.V., Rodrigues A.P.R. & Figueiredo J.R. 2010. Bone Morphogenetic Protein-6 (BMP-6) induces atresia in goat primordial follicles cultured in vitro. [A Proteína Morfogenética Óssea-6 (BMP-6) induz a atresia em folículos primordiais caprinos cultivados in vitro.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(9):770-776. Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-Antrais, Universidade Estadual do Ceará, Av. Paranjana 1700, Campus do Itaperi, Fortaleza, CE 60740-000, Brazil. E-mail: val_exclusiva@yahoo.com.br O presente estudo investigou os efeitos da proteína morfogenética óssea-6 (BMP-6) no desenvolvimento in vitro de folículos primordiais caprinos. Amostras de córtex ovariano de cabras foram cultivados por 1 ou 7 dias em Meio Essencial Mínimo (meio controle) suplementado com diferentes concentrações de BMP-6. As taxas de sobrevivência, ativação e crescimento foram avaliadas por histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão (MET). Após 7 dias de cultivo, a análise histológica demonstrou que a BMP-6 aumentou o percentual de folículos primordiais degenerados no dia 7 quando comparados ao controle fresco (D0). Além disso, houve um aumento significativo do diâmetro folicular e oocitário em ambos os períodos de cultivo em todos os tratamentos na presença de BMP-6. Com a progressão do cultivo do dia 1 para o dia 7, nos tratamentos com 1 ou 50ng/ml de BMP-6, foi observado um aumento significativo no diâmetro folicular. Entretanto, contrário ao observado no meio controle, a MET revelou que os folículos cultivados nesses tratamentos apresentavam sinais evidentes de atresia. Em conclusão, esse estudo demonstrou que a BMP-6 afeta negativamente a sobrevivência e a ultra-estrutura de folículos primordiais caprinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Neves P.B., Medeiros E.S., Sá V.V., Camboim E.K.A., Garino Jr F., Mota R.A. & Azevedo S.S. 2010. [Cellular and microbiological profiles and risk factors for subclinical mastitis in goats in the semi-arid region of Paraíba.] Perfil microbiológico, celular e fatores de risco associados à mastite subclínica em cabras no semiárido da Paraíba. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(5):379-384. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio.azevedo@pq.cnpq.br A subclinical mastitis study was conducted in nine dairy goat herds in the semi-arid region of Paraíba state, Northeastern Brazil, to determine the occurrence of infection, to evaluate microbiological and cellular profiles of the milk, to test the sensitivity of isolated microorganisms to antimicrobials, and to identify risk factors. One hundred thirty-one dairy goats were used, 261 samples were collected for microbiological culture and 131 samples for somatic cells count (SCC). During collection, the California Mastitis Test (CMT) was conducted and an epidemiological questionnaire was applied for each herd. There was bacterial growth in 30 samples (11.49%), with 25 (83.33%) coagulase-negative Staphylococcus and five (16.66%) Staphylococcus aureus isolated. The SCC mean was 1.39x106 cells/ml. CMT presented low sensitivity (46.7%) and low specificity (60.6%) compared with microbiological culture. Gentamicin and the association of neomycin, bacitracin and tetracyclin were the antimicrobials against which the microorganisms isolated showed 100% sensitivity. Penicillin and ampicillin had the greatest resistance rates (66.67% and 63.89%, respectively). Goat breeding is not the main activity on the farms and do not isolate diseased animals were identified as risk factors for caprine subclinical mastitis. Program for the control and prophylaxis of mastitis must be implemented focusing primarily on hygiene cares at milking and correction of the risk factors identified in this study.

• Mastitis milk culture masrite subclínica lactocultura leite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Neves P.B., Medeiros E.S., Sá V.V., Camboim E.K.A., Garino Jr F., Mota R.A. & Azevedo S.S. 2010. [Cellular and microbiological profiles and risk factors for subclinical mastitis in goats in the semi-arid region of Paraíba.] Perfil microbiológico, celular e fatores de risco associados à mastite subclínica em cabras no semiárido da Paraíba. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(5):379-384. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio.azevedo@pq.cnpq.br Foi realizado um estudo da mastite subclínica em nove rebanhos de cabras leiteiras no semiárido paraibano com o objetivo de determinar a ocorrência da infecção, avaliar o perfil microbiológico e celular do leite, testar a sensibilidade dos microorganismos isolados frente a antimicrobianos além de identificar os fatores de risco. Foram utilizadas 131 cabras leiteiras das quais foram colhidas 261 amostras de leite para exame microbiológico e 131 para contagem de células somáticas (CCS). Na ocasião das colheitas foi realizado o California Mastitis Test (CMT) e aplicado um questionário epidemiológico por propriedade. Houve crescimento bacteriano em 30 amostras (11,49%) com 25 (83,33%) dos isolados identificados como Staphylococcus coagulase negativa e cinco (16,66%) Staphylococcus aureus. A média de CCS foi de 1,39x106 células/ml. O CMT apresentou baixa sensibilidade (46,7%) e baixa especificidade (60,6%) quando comparado ao exame microbiológico. A gentamicina e a associação da neomicina, bacitracina e tetraciclina foram os antimicrobianos contra os quais os microrganismos isolados apresentaram 100% de sensibilidade. Penicilina e ampicilina foram os de maiores índices de resistência (66,67% e 63,89%, respectivamente). A caprinocultura não ser a atividade principal da propriedade e o não isolamento de animais doentes, foram identificados como fatores de risco para a mastite subclínica caprina nas propriedades estudadas. Programas de controle e profilaxia da mastite devem ser implementados enfocando as medidas de higiene na ordenha e correção dos fatores de risco identificados nesse estudo.