PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Souza M.V., Pinto J.O., Costa M.M., Santos E.C., Garcia S.L.R. & Oliveira L.L. 2014. [Quantification of growth factors in horse skin treated with platelet-rich plasma.] Quantificação de fatores de crescimento na pele de equinos tratada com plasma rico em plaquetas. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(6):599-612. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Universitário s/n, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: msouza@ufv.br Platelet-rich plasma (PRP) is a product derived from total blood centrifugation, rich in bioactive factors, such as growth factors. Despite largely used in healing processes, there is a controversy whether the therapy is effective in promoting skin healing. The objective of this study was to quantify and compare the concentrations of the factors TGF-&#946;1 and PDGF-BB in PRP, blood plasma and skin, at different phases of the healing process of skin treated or not with PRP. Seven healthy crossbred 16 to 17-year-old geldings (16.14±0.63) were used. Three quadrangular-shaped lesions (6.25cm2) were surgically induced into the right and left gluteal regions of all animals. Twelve hours after induction of the wounds, 0.5mL of the PRP was administered in each of the four edges of the wound in one of the gluteal regions (Treated group = TG) randomly chosen. The contralateral region was used as control (CG). The wounds were submitted to daily cleaning with Milli-Q water, and samples were obtained with a 6mm diameter biopsy Punch. Six skin biopsies were obtained, the first carried out immediately after the production of the wound (T0), and the others 1 (T1), 2 (T2), 7 (T3), and 14 (T4) days after the lesion was induced. The sixth biopsy (T5) was obtained after complete healing of the skin, which occurred at about day 37 (36.85±7.45, CG; 38.85±6.46, TG). EDTA blood samples were also obtained, at all the times mentioned. Quantification of TGF-&#946;1 and PDGF-BB growth factors on the skin, PRP, and blood plasma was carried out by the ELISA technique. Data were statistically analyzed by the t test, Pearson correlation and regression, at a significance level of 5%. No difference was found between the groups in the values of the two growth factors measured on the skin, at the different times. Also, no correlation was found between the amount of growth factors present in the skin and plasma. On the other hand, a positive correlation was observed between PRP and skin in the treated group, for the growth factors TGF-&#946;1 (r=0.31) and PDGF-BB (r=0.38), as well as between both growth factors present in PRP (r=0.81). Considering the growth factor concentrations at T0, the highest skin values (p<0.05) of TGF-&#946;1, in both groups, occurred at T3 and T5. Higher values (p<0.05) of PDGF-BB occurred at T4 (TG) and T5 (CG). No plasma changes occurred at the concentration of these factors in relation to T0, suggesting that PRP does not cause a systemic effect when the procedures adopted in this research are used. Local administration of PRP in the volume studied, 12 h after surgical induction of cutaneous wound gluteal equine does not cause higher concentrations of the growth factors TGF-&#946;1 and PDGF-BB in the plasma and skin during the healing process.

• Platelet-rich concentrate dermatopathy concentrado rico em plaquetas dermatopatia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Souza M.V., Pinto J.O., Costa M.M., Santos E.C., Garcia S.L.R. & Oliveira L.L. 2014. [Quantification of growth factors in horse skin treated with platelet-rich plasma.] Quantificação de fatores de crescimento na pele de equinos tratada com plasma rico em plaquetas. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(6):599-612. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Campus Universitário s/n, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: msouza@ufv.br O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto derivado da centrifugação do sangue total, sendo rico em fatores bioativos, como os de crescimento. Apesar da ampla utilização em processos cicatriciais, há controvérsia sobre a eficácia da terapia na cicatrização cutânea. O objetivo desse estudo foi quantificar e comparar a concentração dos fatores TGF-&#946;1 e PDGF-BB no PRP, plasma sanguíneo e pele, durante diferentes fases do processo de cicatrização da pele tratada ou não com PRP. Foram utilizados sete equinos machos castrados, mestiços, hígidos, com idade entre 16 e 17 (16,14±0,63) anos. Três lesões em formato quadrangular (6,25cm2) foram produzidas cirurgicamente nas regiões glúteas direita e esquerda de todos os animais. Doze horas após indução das feridas, 0,5mL do PRP foi administrado em cada uma das quatro extremidades das feridas de uma das regiões glúteas (Grupo tratado = GT), escolhida aleatoriamente. A região contralateral foi utilizada como controle (GC). As feridas foram submetidas à limpeza diária com água Milli Q, e amostras foram obtidas mediante biópsias realizadas com Punch de 6mm. Foram obtidas seis biópsias de pele, sendo a primeira realizada logo após a produção da ferida (T0), e as demais com 1 (T1) 2 (T2) 7 (T3) e 14 (T4) dias após a indução da lesão. A sexta biópsia (T5) foi obtida após completo fechamento da pele, que ocorreu aproximadamente aos 37 dias (36,85±7,45, GC; 38,85±6,46, GT). Também foram obtidas amostras de sangue com EDTA em todos os tempos mencionados. A quantificação dos fatores de crescimento TGF-&#946;1 e PDGF-BB na pele, PRP e plasma sanguíneo foi realizada pela técnica ELISA. Os dados foram analisados estatisticamente pelo teste t, correlação de Pearson e regressão, utilizando nível de significância de 5%. Não houve diferença entre os grupos, nos valores dos dois fatores de crescimento mensurados na pele, nos diferentes tempos. Também não houve correlação entre a quantidade dos fatores de crescimento presentes na pele e no plasma. Por outro lado, correlação positiva foi observada entre PRP e pele no grupo tratado, para os fatores de crescimento TGF-&#946;1 (r=0,31) e PDGF-BB (r=0,38), bem como entre ambos os fatores de crescimento presentes no PRP (r=0,81). Considerando as concentrações dos fatores de crescimento no T0, os maiores valores cutâneos (p<0,05) do TGF-&#946;1, em ambos os grupos, ocorreram nos tempos T3 e T5. Valores mais elevados (p<0,05) do PDGF-BB ocorreram no T4 (GT) e T5 (GC). No plasma não houve alteração nas concentrações desses fatores em relação ao T0, o que sugere que o PRP não acarreta efeito sistêmico, quando os procedimentos adotados na presente pesquisa são utilizados. A administração local de PRP no volume estudado, 12 h após indução cirúrgica de ferida cutânea na região glútea de equinos não ocasiona maiores concentrações dos fatores de crescimento TGF-&#946;1 e PDGF-BB no plasma sanguíneo e pele, durante o processo de cicatrização.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Colla F.L., Mion L., Parizotto L., Santos L.A., Pilotto F., Rodrigues L.B., Nascimento V.P. & Santos L.R. 2014. [Antimicrobial sensitivity and efficacy of sanitizers against the Salmonella spp. isolated from swine slaughterhouse in southern Brazil.] Perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e eficácia de sanitizantes frente aos isolados de Salmonella spp. oriundos de carcaças suínas no Rio Grande do Sul, Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):320-324. Curso de Medicina Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Passo Fundo, BR-285, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: luruschel@upf.br The aim of this study was to evaluate the antimicrobial sensitivity and efficacy of three sanitizers against Salmonella spp. isolated from carcasses in swine slaughterhouse. Thirty nine of 120 samples were positive for Salmonella spp. The antimicrobials tested included: penicillin G 10 U, amoxicillin + clavulanic acid 30mcg, ampicillin 10mcg, chloramphenicol 30mcg, tetracycline 30mcg, streptomycin 10mcg, gentamicin 10mcg, neomycin 30mcg, enrofloxacin 5mcg, sulfazotrim 25mcg, sulfonamide 300mcg and trimetropim 5mcg. In the tests with sanitizers were used chlorhexidine, quaternary ammonia and peracetic acid, which were put in contact intervals of 1, 5, 10 and 15 minutes. Antimicrobial resistance was observed using penicillin (100%), tetracycline (94.9%), trimetropim (89.7%), and ampicillin (87.2%). None of the antimicrobials was 100% effective against the samples tested. Amoxicillin + clavulanic acid (86.7%), neomycin (86.7%) and chloramphenicol (64.1%) showed better antimicrobial action. In tests of efficacy of sanitizers, 0.5% peracetic acid was effective at 10 minutes (94.6%) and 15 minutes (97.3%) of contact; 1% quaternary ammonia at 10 minutes (89.2%) and 15 minutes (97.3%) and 0.5% chlorhexidine at 10 minutes (70.3%) and 15 minutes (72.8%). All samples tested were multidrug resistance and six (15.3%) showed resistance to ampicillin, chloramphenicol, streptomycin, sulfonamide and tetracycline (ACSSuT group) indicating the need to monitor the spread of antimicrobial resistance of Salmonella spp. isolated from swine. The most effective sanitizing against the bacteria tested was 0.5% peracetic acid per 15 minutes, reinforcing the need to monitor the effectiveness of products sanitizers against Salmonella spp.

• Salmonella spp. antimicrobials antimicrobianos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Colla F.L., Mion L., Parizotto L., Santos L.A., Pilotto F., Rodrigues L.B., Nascimento V.P. & Santos L.R. 2014. [Antimicrobial sensitivity and efficacy of sanitizers against the Salmonella spp. isolated from swine slaughterhouse in southern Brazil.] Perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e eficácia de sanitizantes frente aos isolados de Salmonella spp. oriundos de carcaças suínas no Rio Grande do Sul, Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):320-324. Curso de Medicina Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Passo Fundo, BR-285, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: luruschel@upf.br Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil de sensibilidade a antimicrobianos e a eficácia de três sanitizantes frente a isolados de Salmonella spp. oriundos de carcaças na tecnologia de abate de suínos. Avaliaram-se 120 amostras, das quais 39 foram positivas para Salmonella spp. Os princípios ativos testados foram penicilina G 10 U, amoxicilina + ácido clavulânico 30mcg, ampicilina 10mcg, cloranfenicol 30mcg, tetraciclina 30mcg, estreptomicina 10mcg, neomicina 30mcg, gentamicina 10mcg, enrofloxacina 5mcg, sulfazotrim 25mcg, sulfonamida 300mcg e trimetropima 5mcg. Nos testes com sanitizantes utilizaram-se clorexidina, amônia quaternária e ácido peracético com tempos de contato de um, cinco, 10 e 15 minutos. Os índices de resistência aos antimicrobianos foram de 100% para penicilina, 94,9% para tetraciclina, 89,7% para trimetropima e 87,2% para ampicilina. Nenhum dos princípios ativos foi 100% eficaz frente aos isolados testados, observando-se melhor ação para amoxicilina+ácido clavulânico (86,7%), neomicina (86,7%) e cloranfenicol (64,1%). Nos testes de eficácia dos sanitizantes, o ácido peracético a 0.5% foi efetivo a partir de 10 minutos (94,6%) e 15 minutos (97,3%) de contato; amônia quaternária a 1% por 10 minutos (89,2%) e 15 minutos (97,3%) e clorexidina a 0.5% por 10 minutos (70,3%) e 15 minutos de contato (72,8%). Todas as amostras testadas apresentaram multirresistência e seis (15,3%) apresentaram resistência à ampicilina, cloranfenicol, estreptomicina, sulfonamida e tetraciclina (denominado grupo ACSSuT), indicando a necessidade de monitorar a propagação da resistência aos antimicrobianos em Salmonella spp. oriundas de suínos. O sanitizante mais efetivo frente aos isolados testados foi o ácido peracético a 0.5% por 15 minutos, reforçando a necessidade de monitorar também a efetividade de produtos sanitizantes frente aos isolados de Salmonella spp.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pimenta C.L.R.M., Castro V., Clementino I.J., Alves C.J., Fernandes L.G., Brasil A.W.L., Santos C.A.S.B. & Azevedo S.S. 2014. [Bovine leptospirosis in Paraíba State: prevalence and risk factors associated with the occurrence of positive herds.] Leptospirose bovina no Estado da Paraíba: prevalência e fatores de risco associados à ocorrência de propriedades positivas. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):332-336. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Cx. Postal 61, Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio@vps.fmvz.usp.br Herd-level and animal-level prevalences were determined and risk factors associated with leptospirosis were identified in cows in the State of Paraíba, Northeastern Brazil. A total of 2,317 cows with &#8805; 24 months of age from 450 herds were randomly sampled. For the serological diagnosis of Leptospira spp. infection, the microscopic agglutination test (MAT) was carried out using 24 serovars as antigens. A herd was considered positive when presented at least one seropositive animal. Of the 450 investigated herds, 398 (89.7%; 95% CI = 86.6-92.2%) presented at least one reactant animal at MAT to any serovar, and 1,349 (61.1%; 95% CI = 56.6-65.4%) animals were seropositive. Serovar Hardjo was the most prevalent in herds and animals, with frequencies of 58.17% and 54.69% respectively. Location of the herd in the Sertão (odds ratio = 3.20; p=0.003), presence of wildlife (odds ratio =2.89; p=0.005), not cooling milk (odds ratio =3.83; p=0.034) and presence of flooded pastures (odds ratio =2.36; p<0.001) were identified as risk factors for herd-level prevalence. It is concluded that leptospirosis is widely spread in cattle in State of Paraíba, which reinforces the need for increased prevention and control measures, such as vaccination of herds. According to the results of risk factors analysis it is suggested that the sanitary control before the introduction of animals, drainage of wetlands and improvement in management conditions are important measures to preventing the infection.

• Leptospira spp. leptospirosis leptospirose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pimenta C.L.R.M., Castro V., Clementino I.J., Alves C.J., Fernandes L.G., Brasil A.W.L., Santos C.A.S.B. & Azevedo S.S. 2014. [Bovine leptospirosis in Paraíba State: prevalence and risk factors associated with the occurrence of positive herds.] Leptospirose bovina no Estado da Paraíba: prevalência e fatores de risco associados à ocorrência de propriedades positivas. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):332-336. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Cx. Postal 61, Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio@vps.fmvz.usp.br Foram determinadas as prevalências de propriedades positivas e de animais positivos e identificados fatores de risco associados à leptospirose em vacas no Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. Foram aleatoriamente selecionadas 2.317vacas com idade &#8805; 24 meses, procedentes de 450propriedades. Para o diagnóstico sorológico da infecção por Leptospira spp. foi empregado o teste de soroaglutinação microscópica (SAM), utilizando-se 24 sorovares como antígenos. Uma propriedade foi considerada positiva quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. Das 450 propriedades investigadas 398 (89,7%; IC 95% = 86,6-92,2%) apresentaram pelo menos um animal reagente na SAM para qualquer sorovar, e 1.349 (61,1%; IC 95% = 56,6-65,4%) animais foram soropositivos. O sorovar Hardjo foi o mais prevalente nas propriedades e nos animais, com frequências de 58,17% e 54,69%, respectivamente. Propriedade ser localizada no Sertão (odds ratio = 3,20; p = 0,003), presença de animais silvestres (odds ratio =2,89; p=0,005), não resfriar o leite (odds ratio =3,83; p=0,034) e presença de pastos alagados (odds ratio =2,36; p<0,001) foram identificados como fatores de riscos associados à prevalência de propriedades positivas. Conclui-se que a leptospirose encontra-se amplamente difundida em bovinos do Estado da Paraíba, o que reforça a necessidade de intensificação de medidas de prevenção e controle, como a vacinação dos rebanhos. De acordo com os resultados da análise de fatores de risco, sugere-se que o controle sanitário antes da introdução de animais, drenagem de áreas alagadas e melhora nas condições de manejo são importantes medidas para a prevenção da infecção.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Martins L.R., Fernandes, C.B., Villaverde A.I.S.B., Landim-Alvarenga F.C. & Lopes M.D. 2014. The seasonal and ovarian status effects on in vitro production of domestic cat embryos in a region between Equator and Tropic of Capricorn. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(3):277-280. Laboratório de Reprodução Animal, Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Alexandre Ferronato 1200, Sinop, MT 78557-267, Brazil. E-mail: lirigatto@yahoo.com.br From the Tropic of Capricorn to Equator, the seasonality of domestic cat is known to be absent, i.e., these animals are considered non-seasonal breeders at these regions. We hypothesized that this particularity might have some influence on in vitro embryo production. The aim of this experiment was to determine the percentage of cleavage and morulae and blastocyst formation produced from oocytes recovered from queen ovaries of three distinct status - follicular, luteal or inactive - during two different reproductive seasons experienced by cats in southeast of Brazil (22°53’09” S and 48°26’42” W) – non breeding season (NBS), comprehending January to March; and breeding season (BS), August to October. Thirty queens were neutered. Ovaries were classified according to their status and were sliced in PBS for cumulus oocyte complex (COC) releasing. Grade I COC were washed three times in H-MEM supplemented with BSA, glutamine, sodium pyruvate, cysteine, streptomycin and penicillin. Oocytes were incubated in groups of 20-30 in 400µL of DMEM supplemented with FSH, LH, estradiol, IGF-I and basic fibroblast growth factor under mineral oil for 30 or 36 hours at 38°C in humidified environment of 5% de O2, 5% CO2 and 90% N2. COC were fertilized in Ham’s F-10 medium supplemented with BSA, cysteine, pyruvate and streptomycin/penicillin (culture medium) with fresh semen selected through swim up technique. Eighteen hours later, the presumptive zygotes were denuded, the percentage of cleavage was determined and every 10 zygotes were transferred to 100mL drops of culture medium for culture during three days. After 72 hours of culture the percentage of morulae formation was evaluated and these structures were transferred to drops of the same culture medium. At the eighth day of culture blastocyst formation was analyzed. During NBS, from a total of 272 (inactive), 162 (luteal) and 134 (follicular) fertilized oocytes, the percentage of cleaved zygotes, morulae and blastocysts derived from inactive ovaries were 24.63, 16.54 and 8.09 respectively; for those derived from luteal ovaries, the percentage was 21.6, 12.96 and 8.64, and for those from follicular ovaries, they were 24.62, 16.41 and 8.21. Considering BS, from a total of 102 (inactive), 198 (luteal) and 86 (follicular) fertilized oocytes, the relative frequency (%) of cleaved zygotes, morulae and blastocysts derived from inactive ovaries were 64.7, 41.17 and 23.53 respectively; for those derived from luteal ovaries, the percentage was 64.14, 40.41 and 23.73, and for those from follicular ovaries, they were 63.95, 39.54 and 24.41. The results of this experiment demonstrate that no statistically significant difference (P<0.05) was verified in the frequency of cleaved embryos and morulae and blastocyst formation when comparing the three ovarian conditions in the same season. However the breeding season presented better results considering cleavage and morulae and blastocyst formation.

• Seasonality oocyte sazonalidade oócito

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Martins L.R., Fernandes, C.B., Villaverde A.I.S.B., Landim-Alvarenga F.C. & Lopes M.D. 2014. The seasonal and ovarian status effects on in vitro production of domestic cat embryos in a region between Equator and Tropic of Capricorn. [Efeitos da sazonalidade e da condição ovariana sobre a produção in vitro de embriões de gatos domésticos em uma região entre o Equador e o Trópico de Capricórnio.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(3):277-280. Laboratório de Reprodução Animal, Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Alexandre Ferronato 1200, Sinop, MT 78557-267, Brazil. E-mail: lirigatto@yahoo.com.br Do Trópico de Capricórnio ao Equador, sabe-se que a sazonalidade no gato domestico é ausente, i.e., estes animais são considerados reprodutores não sazonais nestas regiões. Nós hipotetizamos que esta particularidade possa ter alguma influência sobre a produção embrionária in vitro. O objetivo deste experimento foi determinar a porcentagem de clivagem e formação de mórulas e blastocistos produzidos a partir de oócitos recuperados de ovários de gatas em três condições - folicular, lútea ou inativa – durante duas estações reprodutivas pelas quais gatas passam na região sudeste do Brasil (22°53’09” S e 48°26’42” O) - estação não reprodutiva (ENR), que compreende os meses de janeiro a março; e estação reprodutiva (ER), agosto à outubro. Trinta gatas foram castradas. Os ovários foram classificados de acordo com sua condição e foram fatiados em PBS para liberação dos complexos cumulus oophorus (COC). COC grau I foram lavados três vezes em H-MEM suplementado com BSA, glutamina, piruvato sódico, cisteína, estreptomicina e penicilina. Os oócitos foram incubados em grupos de 20-30 em 400 µL de DMEM suplementado com FSH, LH, estradiol, IGF-I e fator de crescimento fibroblástico básico sob óleo mineral por 30 ou 36 horas em atmosfera úmida de 5% de O2, 5% CO2 e 90% N2 a 38°C. Os COC foram fertilizados em meio Ham’s F-10 suplementado com BSA, cisteína, piruvato e estreptomicina/penicilina (meio de cultura) com sêmen fresco selecionado através da técnica de swim up. Dezoito horas depois, os presumíveis zigotos foram denudados, a porcentagem de clivagem foi determinada e cada 10 zigotos foram transferidos para gotas de 100 mL de meio de cultura para cultivo durante 3 dias. Após 72 horas de cultivo, a porcentagem de formação de mórulas foi avaliada e estas estruturas foram transferidas para gotas do mesmo meio de cultivo. No oitavo dia de cultivo a formação de blastocisto foi avaliada. Durante a ENR, de um total de 272 (inativo), 162 (lútea) e 134 (folicular) oócitos fertilizados, a porcentagem de clivagem de zigotos, formação de mórulas e de blastocistos derivados de ovários inativos foi 24,63, 16,54 e 8,09 respectivamente; para aqueles oriundos de ovários na condição lútea, a porcentagem foi de 21,6, 12,96 e 8,64, e para aqueles provenientes de ovários na fase folicular, foi de 24,62, 16,41 e 8,21. Considerando a ER, de um total de 102 (inativo), 198 (lútea) e 86 (folicular) oócitos fertilizados, a frequência relativa (%) de zigotos clivados, mórulas e blastocistos derivados de ovários na condição inativa foi de 64,7, 41,17 e 23,53 respectivamente; para aqueles oriundos de ovários na condição lútea, a porcentagem foi de 64,14, 40,41 e 23,73, e para aqueles provenientes de ovários na fase folicular, foi de 63,95, 39,54 e 24,41. Os resultados deste experimento demonstraram que não houve diferença estatística significante (P < 0.05) na frequência de embriões clivados e na formação de mórulas e blastocistos quando comparadas as três condições ovarianas dentro da mesma estação. Entretanto, a ER apresentou resultados melhores considerando as taxas de clivagem e formação de mórula e de blastocisto se comparada à ENR.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Marin M.S., Morrell E.L., Pérez S.E., Leunda M.R., Moore D.P., Jones L.R., Campero C.M. & Odeón A.C. 2013. Concomitant infection of Neospora caninum and Bovine Herpesvirus type 5 in spontaneous bovine abortions. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1291-1295. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Estación Experimental Agropecuaria Balcarce, Ruta 226 Km 73.5 (7620), Balcarce, Buenos Aires, Argentina. E-mail: aodeon@balcarce.inta.gov.ar Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) has not been conclusively demonstrated to cause bovine abortion. Brain lesions produced by Neospora caninum and Bovine Herpesvirus type 1 (BoHV-1) exhibit common features. Therefore, careful microscopic evaluation and additional diagnostic procedures are required to achieve an accurate final etiological diagnosis. The aim of the present work was to investigate the occurrence of infections due to BoHV-1, BoHV-5 and N. caninum in 68 cases of spontaneous bovine abortions which showed microscopic lesions in the fetal central nervous system. This study allowed the identification of 4 (5.9%) fetuses with dual infection by BoHV-5 and N. caninum and 33 (48.5%) cases in which N. caninum was the sole pathogen identified. All cases were negative to BoHV-1. The results of this study provide evidence that dual infection by BoHV-5 and N. caninum occur during pregnancy in cattle; however, the role of BoHV-5 as a primary cause of bovine abortion needs further research. Molecular diagnosis of BoHV-5 and N. caninum confirmed the importance of applying complementary assays to improve the sensitivity of diagnosing bovine abortion.

• Abortion Bovine Herpesvirus type 5 encephalitis Neospora caninum aborto Herpesvírus bovino tipo 5 bovinos encefalite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Marin M.S., Morrell E.L., Pérez S.E., Leunda M.R., Moore D.P., Jones L.R., Campero C.M. & Odeón A.C. 2013. Concomitant infection of Neospora caninum and Bovine Herpesvirus type 5 in spontaneous bovine abortions. [Infecção simultânea de Neospora caninum e Herpesvirus bovino tipo 5 em casos espontâneos de aborto bovino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1291-1295. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Estación Experimental Agropecuaria Balcarce, Ruta 226 Km 73.5 (7620), Balcarce, Buenos Aires, Argentina. E-mail: aodeon@balcarce.inta.gov.ar Não está demonstrado até ao momento, que o Herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) seja um agente causal de aborto bovino. Uma vez que as lesões cerebrais tanto de Neospora caninum como de Herpesvírus bovino tipo 1(BoHV-1) têm características similares, é necessária uma avaliação microscópica cuidadosa, bem como exames laboratoriais adicionais, para obter um diagnóstico final preciso. O objetivo do presente trabalho foi investigar a presença de infeções por BoHV-1, BoHV-5 e N. caninum em 68 casos de aborto espontâneo, nos quais se verificaram lesões microscópicas no sistema nervoso central. Foram encontrados 4 (5,9%) fetos com infeção simultânea de BoHV-5 e N. caninum e 33 (48,5%) casos com infeção exclusiva de N. caninum. Todos os casos foram negativos a BoHV-1. Os resultados deste estudo demonstram que a infeção dual por BoHV-5 y N. caninum está presente durante a gestçao dos bovinos. Apesar disso, o papel de BoHV-5 como agente primário causal de aborto, carece de mais investigaçao. O diagnóstico molecular de BoHV-5 e N. caninum confirmou a importância de se aplicar ensaios complementares para melhorar a sensibilidade do diagnóstico de aborto bovino.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Goulart D.S., Orlando-Goulart C.F.P., Silva J.A., Freitas S.L.R., Caetano L.B.U., Fioravanti M.C.S. & Silva L.A.F. 2013. Sanitizer residues in the milk of cows which had passed through footbaths. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(9):1076-1080. Escola de Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Goiás, Cx. Postal 24267, Campus Universitário, Goiânia, GO 74690-970, Brazil. E-mail: dsgvet@hotmail.com Copper sulfate and sodium hypochlorite are used in footbath solutions for the prevention and treatment of bovine digital diseases; however, data on the residues of such elements in milk are sparse in Brazil. This study evaluated the cost of applying the footbath treatment and the total amount of copper and chlorite residues in the milk of healthy cows after they had passed through these footbath solutions. Two groups of 7 cows each (GI and GII) were studied. In the case of GI, 1% sodium hypochlorite was used and for GII 5% copper sulfate was employed in the footbath. The milk samples were collected before the 7-day footbath treatment period (M0) and 24 h (M1), 48 h (M2), 72 h (M3) and 15 days (M15) after the last footbath. Statistical analysis to compare the different samples within each group was carried out by applying Friedman’s test, followed by Dunn’s test (p<0.05). It was concluded that the amount of total chlorites and copper in the milk of healthy cattle after routine daily footbaths for a period of 7 days presented some variations. However, the concentrations observed were considered insufficient to represent a risk to human health. The cost of the footbath solutions was found to be reasonable.

• Chlorites sodium hypochlorite copper sulfate hipoclorito de sódio sulfato de cobre cloretos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Goulart D.S., Orlando-Goulart C.F.P., Silva J.A., Freitas S.L.R., Caetano L.B.U., Fioravanti M.C.S. & Silva L.A.F. 2013. Sanitizer residues in the milk of cows which had passed through footbaths. [Resíduos de sanitizantes em vacas de leite após passagem por pedilúvio.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(9):1076-1080. Escola de Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Goiás, Cx. Postal 24267, Campus Universitário, Goiânia, GO 74690-970, Brazil. E-mail: dsgvet@hotmail.com O sulfato de cobre e o hipoclorito de sódio são empregados na prevenção e tratamento das enfermidades digitais dos bovinos, mas os valores residuais desses elementos foram pouco estudados. Neste estudo, avaliou-se a presença de resíduos de cobre e cloretos totais no leite de vacas saudáveis após passagens dos animais em pedilúvio contendo soluções formuladas com estas substâncias e estimou-se os custos das soluções. Utilizou-se 14 vacas saudáveis distribuídas em dois grupos (GI e GII) de sete animais cada. Em GI, empregou-se solução de hipoclorito de sódio a 1% e, em GII, sulfato de cobre a 5%. As amostras de leite foram colhidas antes da passagem pelo pedilúvio (M0), após 24 (M1), 48 (M2) e 72 (M3) horas, além de 15 dias (M15) subsequentes à última passagem. Na análise estatística, a comparação entre momentos dentro de cada grupo foi realizada com teste de Friedman, seguido pelo teste de Dunn’s (p<0,05). Concluiu-se que os valores de cloretos totais e de cobre no leite de bovinos saudáveis, após passagens diárias dos animais em pedilúvio por um período de sete dias, apresentaram algumas variações consideradas insuficientes para provocarem danos à saúde humana e as soluções medicamentosas não apresentaram custos exorbitantes.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Lima L.R., Mendes H.M.F., Magalhães J.F., Markowicz L.C., Cavalcanti C.B., Paes Leme F.O., Teixeira M.M. & Faleiros R.R. 2013. [Clinical and hematological evaluation of horses subjected to oligofructose-induced laminitis treated or not with a CXCR1/2 antagonist.] Avaliação clínica e hematológica de equinos submetidos ao modelo de laminite por oligofructose, tratados ou não com um agente antagonista de receptores CXCR1/2. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(8):992-998. Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Avenida Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 30123-970, Brazil. E-mail: faleirosufmg@gmail.com Leucocytes recruitment to tissues is an essential part of the innate immune response and an unregulated process can result in tissue damage. Thus, leucocytes infiltration has been implicated in the pathogenesis of acute laminitis. The objectives of this stud were to determine the effect of an antagonist for CXCR1/2, a chemokine receptor for neutrophils attraction on clinical signs and hematological parameters in horses given oligofructose to induce laminitis. Twelve horses were given oligofructose (10g/kg bw PO) in time 0 and divided into two groups: one treated (30mg/kg bw. ICXCR1/2 IV, times 6, 12, 18 e 24 h) and the other not treated. Cardiac and respiratory frequency, rectal temperature, mucous membrane colour, digital pulse, hoof sensitivity and Obel’s grade of lameness were recorded. Values for RBC, WBC and blood glucose, BUN, creatinin, ALT, AST, alkaline phosphatase, GGT, total bilirubin and serum protein concentrations were measured on times 0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 h. All the horses given oligofructose developed signs of endotoxemia like diarrhea, fever and leukocytosis and laminitis. Also, CXCR1/2 antagonist treatment did not cause any adverse effects. However, this substance when injected intravenously (30mg/kg) 6/6 hours in 4 applications, did not ameliorate clinical and hematological signs of endotoxemia.

• Laminitis chemokine laminite quimiocinas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Lima L.R., Mendes H.M.F., Magalhães J.F., Markowicz L.C., Cavalcanti C.B., Paes Leme F.O., Teixeira M.M. & Faleiros R.R. 2013. [Clinical and hematological evaluation of horses subjected to oligofructose-induced laminitis treated or not with a CXCR1/2 antagonist.] Avaliação clínica e hematológica de equinos submetidos ao modelo de laminite por oligofructose, tratados ou não com um agente antagonista de receptores CXCR1/2. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(8):992-998. Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Avenida Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 30123-970, Brazil. E-mail: faleirosufmg@gmail.com O recrutamento de leucócitos aos tecidos é uma parte essencial da resposta imune inata e esse processo de forma desregulada pode resultar em lesões aos tecidos. Assim, a infiltração de leucócitos tem sido implicada na patogênese de laminite aguda em equinos. Os objetivos dessa pesquisa foram verificar a ação da ICXCR1/2 sobre os sinais clínicos e parâmetros hematológicos de cavalos com laminite induzida por oligofrutose. Doze equinos receberam oligofrutose (10g/kg de peso vivo PO) no tempo 0 e foram divididos em 2 grupos: tratados (30mg/kg p.v. ICXCR1/2 IV, nos tempos 6, 12, 18 e 24 h) e não tratados. As frequências cardíaca e respiratória, temperatura retal, coloração de membranas mucosas, presença e intensidade de pulso digital, sensibilidade ao exame com pinça de casco e grau de claudicação segundo Obel, bem como parâmetros hematológicos e bioquímicos (hemograma e as concentrações sanguíneas de glicose, uréia, creatinina, ALT, AST, FA, GGT, bilirrubina total e proteína total) foram aferidos nos tempos 0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 horas . O modelo usando oligofructose foi adequado para induzir sinais de laminite e de sinais de endotoxemia, como diarreia, febre e leucocitose em cavalos sem raça definida de origem nacional. Também, não foram observadas quaisquer reações adversas clínicas ou hematológicas relacionadas ao uso intravenoso do antagonista de CXCR1/2, contudo essa substância, quando administrada na dose de 30mg/kg de peso vivo, 4 vezes ao dia, por 4 aplicações, não foi capaz de prevenir os sinais clínicos e as alterações hematológicas causadas pela administração de oligofructose nos equinos deste estudo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Nóbrega D.B., Guiduce M.V.S., Guimarães F.F., Riboli D.F., Cunha M.L.R.S., Langoni H., Pantoja J.C.F. & Lucheis S.B. 2013. Molecular epidemiology and extended-spectrum &#946;-lactamases production of Klebsiella pneumoniae isolated from three dairy herds. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(7):855-859. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-900, Brazil. E-mail: diegoborin@yahoo.com The objectives of this study were to isolate Klebsiella pneumoniae from different sources in three dairy cattle herds, to use the pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) to measure genotypic similarities between isolates within a dairy herd, to verify the production of extended-spectrum &#946;-lactamases (ESBLs) by the double-disk synergy test (DDST), and to use the PCR to detect the main ESBLs subgroups genes. Three dairy farms were selected based on previous mastitis outbreaks caused by K. pneumoniae. Milk samples were collected from lactating cows and from the bulk tank. Swabs were performed in different locations, including milking parlors, waiting room, soil, animal’s hind limbs and rectum. K. pneumoniae was isolated from 27 cases of intramammary infections (IMI) and from 41 swabs. For farm A isolates from IMI and bulk tank were considered of the same PGFE subtype. One isolate from a bulk tank, three from IMI cases and four from environmental samples were positive in the DDST test. All eight DDST positive isolates harbored the blashv gene, one harbored the blatem gene, and three harbored the blactx-m gene, including the bulk tank isolate. Our study confirms that ESBL producing bacteria is present in different locations in dairy farms, and may be responsible for IMI. The detection of ESBLs on dairy herds could be a major concern for both public and animal health.

• Klebsiella pneumoniae

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Nóbrega D.B., Guiduce M.V.S., Guimarães F.F., Riboli D.F., Cunha M.L.R.S., Langoni H., Pantoja J.C.F. & Lucheis S.B. 2013. Molecular epidemiology and extended-spectrum &#946;-lactamases production of Klebsiella pneumoniae isolated from three dairy herds. [Epidemiologia molecular e produção de b- lac-tamases de espectro estendido de Klebsiella pneumoniae isoladas de três propriedades leiteiras.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(7):855-859. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-900, Brazil. E-mail: diegoborin@yahoo.com Os objetivos deste estudo foram isolar Klebsiella pneumoniae de diferentes localidades em três propriedades leiteiras, utilizar a eletroforese em campo pulsátil para averiguar similaridades genotípicas entre os isolados de uma mesma propriedade, verificar a produção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs) pela prova da disco-difusão dupla associada (DDST) e utilizar a PCR para detecção dos principais subgrupos genéticos de ESBLs. Três propriedades leiteiras foram selecionadas baseando-se em surtos prévios de mastites causadas por K. pneumoniae. Amostras de leite foram coletadas de vacas em lactação e do tanque de expansão. Swabs foram realizados em diferentes localidades, incluindo salas de lactação, salas de espera, solo, reto e membros posteriores de animais. K. pneumoniae foi isolada de 27 casos de infecções intramamária (IMI) e de 41 swabs. Para a propriedade A os isolados de IMI e do tanque de expansão foram considerados do mesmo subtipo molecular. Um isolado do tanque de expansão, três de casos de IMI e quatro de amostras ambientais foram considerados positivos no teste da DDST. Todos os oito isolados DDST positivos portavam o gene blashv, um portava o gene blatem, e três portavam o gene blactx-m, incluindo um isolado de tanque de expansão. Nosso estudo confirma que bactérias produtoras de ESBLs estão presentes em diferentes localidades em propriedades leiteiras, e podem ser responsáveis por quadros de IMI. A detecção de ESBLs em propriedades leiteiras pode representar uma grande preocupação para saúde pública e para a saúde animal.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Molina L.R., Gentilini M.B., Carvalho A.U., Facury Filho E.J., Moreira G.H.F.A., Moreira L.P.V. & Gonçalves R.L. 2013. [Use of an Escherichia coli J5 vaccine on immunization of dairy cows against mastitis caused by E. coli.] Utilização da vacina Escherichia coli J5 na imunização de vacas leiteiras contra mastites causadas por E. coli. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(3):291-298. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinárias, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antonio Carlos 6627, Cx. Postal 567, Campus Pampulha, Belo Horizonte, MG 30123-970, Brazil. E-mail: lmolina@vet.ufmg.br We evaluated the use of Escherichia coli J5 vaccine immunization in dairy cows for the prevention and control of mastitis caused by E. coli. Were analyzed the prevalence of postpartum intramammary infections (IMM), occurrence and severity of clinical cases of mastitis in the first 100 days of lactation, influence on somatic cell count (SCC) and milk production. The experimental group consisted of 187 animals that were divided into two groups, vaccinated and unvaccinated cows. Immunizations occurred 60 days before calving, 30 days before calving and the first week postpartum. On the day of drying and seven days after birth, samples were collected for microbiological diagnosis of mastitis pathogens. The occurrence of clinical cases was verified by testing during the milking and data was recorded related to the intensity and duration. Samples were collected monthly starting at day ten of lactation to evaluate the CCS. Milk production was recorded monthly for the first 100 days of lactation. It was found in the vaccinated group reduction in the prevalence of E. coli in the postpartum period, the occurrence of clinical cases of E. coli in the first 100 days of lactation as well the intensity of these clinical cases. There were no statistically significant differences in CCS, however vaccinated cows had higher milk production, compared to unvaccinated cows. Vaccination with E. coli J5 was effective in reducing the prevalence of intramammary infections (IMM) at calving, occurrence and intensity of clinical cases and an increase in milk production in the first 100 days of lactation.

• Escherichia coli J5

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Molina L.R., Gentilini M.B., Carvalho A.U., Facury Filho E.J., Moreira G.H.F.A., Moreira L.P.V. & Gonçalves R.L. 2013. [Use of an Escherichia coli J5 vaccine on immunization of dairy cows against mastitis caused by E. coli.] Utilização da vacina Escherichia coli J5 na imunização de vacas leiteiras contra mastites causadas por E. coli. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(3):291-298. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinárias, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antonio Carlos 6627, Cx. Postal 567, Campus Pampulha, Belo Horizonte, MG 30123-970, Brazil. E-mail: lmolina@vet.ufmg.br Avaliou-se a utilização da vacina Escherichia coli J5, na imunização de vacas leiteiras, para prevenção e controle da mastite causada por E. coli através da análise da prevalência das infecções intramamárias (IMM) no pós-parto, ocorrência e intensidade dos casos clínicos de mastite nos primeiros 100 dias de lactação, influência na contagem de células somáticas (CCS) e produção de leite. O grupo experimental foi composto de 187 animais, divididos em 2 grupos, vacas vacinadas e não vacinadas. As imunizações ocorreram 60 dias antes do parto, 30 dias antes do parto e na primeira semana pós-parto. No dia da secagem e sete dias após o parto foram coletadas amostras para diagnóstico microbiológico dos patógenos causadores de mastite. A ocorrência de casos clínicos foi verificada pelo teste da caneca durante as ordenhas sendo registrados os dados relacionados à intensidade. Amostras foram coletadas mensalmente, a partir do décimo dia de lactação, para avaliação da CCS. A produção de leite foi registrada mensalmente nos primeiros 100 dias de lactação. Verificou-se no grupo vacinado, redução na prevalência de E. coli no pós-parto, na ocorrência de casos clínicos por E.coli nos primeiros 100 dias de lactação bem como na intensidade destes casos clínicos. Não foram observadas diferenças estatísticas significativas na CCS, entretanto vacas vacinadas apresentaram maior produção de leite, comparadas às vacas não vacinadas. A vacinação com E. coli J5 foi eficaz em reduzir a prevalência de infecções intramamárias (IMM) ao parto, ocorrência e intensidade dos casos clínicos e aumento na produção de leite nos primeiros 100 dias de lactação.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Mançanares A.C.F., Mançanares C.A.F., Franciolli A.L.R., Marques L.O., Ambrósio C.E., Miglino M.A. & Carvalho A.F. 2012. [Relationship between the amount of AgNORs, proliferative activity and stage of placental development in horses.] Relação entre a quantidade de AgNORs, atividade proliferativa e o estágio de desenvolvimento placentário em equinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(Supl.1):108-112. Programa de Pós-Graduação em Anatomia dos Animais Domésticos e Silvestres, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: anamancanares@usp.br The Nucleolar Organizer Regions (NORs - nucleolar organizer regions) are used to describe regions of chromatin stained with silver nitrate and are related to the activity of rRNA synthesis and to the agility and speed of cell proliferation in the tissues studied. The objective of this study was to relate the amount of AgNORs, proliferative activity and stage of pregnancy in horses, using the coloring of Silver Nitrate. The embryonic attachments were collected, fixed in 10% buffered formaldehyde, embedded in paraplast and stained by silver nitrate. The groups were determined according to the gestational age. The amount of the corium NOR found in early pregnancy indicates the onset of cell activity, and in that the pregnancy progresses, the amount of NOR increases, suggesting higher activity and increased synthesis of their importance in maintaining the fetus. Contrary to what occurs in the corium, the quantification of NORs was higher in late pregnancy than in the beginning, suggesting the stabilization of these membranes in late pregnancy. The chorionic girdle and the yolk sac were found in early pregnancy and had lots of NORs, suggesting synthesis function and proliferation in early pregnancy, since their functions is maintenance of the embryo until the complete formation of the true placenta (chorio-allantoic membranes). We conclude that the membranes that develop in a progressive manner in accordance with the growing embryo/fetal (chorion, amnion and allantoic membranes) have an increased number of NORs and the membranes that involute after the formation of the embryo/fetus (yolk sac and chorionic girdle) have a decrease in number, suggesting a reduction in proliferative activity in these membranes.

• AgNORS placenta equidae equinos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Mançanares A.C.F., Mançanares C.A.F., Franciolli A.L.R., Marques L.O., Ambrósio C.E., Miglino M.A. & Carvalho A.F. 2012. [Relationship between the amount of AgNORs, proliferative activity and stage of placental development in horses.] Relação entre a quantidade de AgNORs, atividade proliferativa e o estágio de desenvolvimento placentário em equinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(Supl.1):108-112. Programa de Pós-Graduação em Anatomia dos Animais Domésticos e Silvestres, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: anamancanares@usp.br As Regiões Organizadoras de Nucléolo (NORs - nucleolar organizer regions) são utilizadas para descrever regiões de cromatina coradas por Nitrato de Prata e estão relacionados com a atividade de síntese de RNAr e com a agilidade e rapidez na proliferação celular nos tecidos estudados. O objetivo deste trabalho foi relacionar a quantidade de AgNORs, a atividade proliferativa e o estágio da gestação em equinos, utilizando a coloração de Nitrato de Prata. Os anexos embrionários foram coletados, fixados em solução de formaldeído tamponado 10%, emblocadas em paraplast e submetidos à coloração de Nitrato de Prata. Os grupos foram determinados de acordo com a idade gestacional. A quantidade de NORs encontrada no cório no começo da gestação indica início da atividade celular e na medida em que a gestação avança, a quantidade de NORs aumenta, sugerindo maior atividade de síntese e aumento da sua importância na manutenção do feto. Ao contrário do que ocorre no cório, a quantificação das NORs foram maiores no final da gestação do que no inicio, sugerindo a estabilização destas membranas no final da gestação. A cinta coriônica e o saco vitelino foram encontrados no início da gestação e apresentaram grande quantidade de NORs, sugerindo função de síntese e proliferação no inicio da gestação, visto que suas funções é manutenção do embrião até a formação completa da placenta verdadeira (cório-alantoide). Concluímos que as membranas que se desenvolvem de maneira progressiva de acordo com o crescimento embrionário/fetal (cório, alantoide e âmnio) têm aumento no número de NORs e as membranas que involuem após a formação do embrião/feto (saco vitelino e cinta coriônica) têm um decréscimo neste número, sugerindo a diminuição da atividade proliferativa nestas membranas.