PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Baptista A.A.S., Donato T.C., Souza, E.E., Gonçalves G.A.M., Garcia, K.C.O.D., Rodrigues J.C.Z., Sequeira J.L. & Andreatti Filho R.L. 2013. Induction of immune response in broiler chickens immunized with recombinant FliC and challenged by Salmonella Typhimurium. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(10):1215-1221. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Unesp-Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18608-970, Brazil. E-mail: angelita_sampaio@yahoo.com.br The study examined (1) the immune response in broiler chickens after oral immunization with recombinant flagellin (rFliC) from Salmonella Typhimurium conjugated with sodium alginate microparticles, and the immune response enhancement in association with recombinant cholera toxin B subunit protein (rCTB) and pool of Lactobacillus spp. (PL). The immune responses were evaluated by dosage of IgY serum and IgA from intestinal fluid and immunostaining of CD8+ T lymphocytes in the cecum. The immunized animals were challenged with Salmonella Typhimurium (ST) 21 days after treatment. In all immunized groups, a significant increase (p<0.05) was observed in IgA levels (mg/mL), especially three weeks after immunization. The serum IgY levels (mg/mL) were little affected by the treatments and differed significantly among groups only in the second post-immunization week (p<0.05). After the challenge, the number of CD8+ T cells differed significantly between the treatments and negative control. Retrieval of Salmonella Typhimurium was not detected at 48 hours after the challenge in T2 (rFliC+rCTb), T3 (rFliC+PL) and T4 (rFliC+rCTB PL). The rFliC administered orally with or without rCTB and Lactobacillus spp. produces significant induction of humoral immune response, and the immunized chickens were more effective in eliminating Salmonella after challenge.

• Salmonella Typhimurium FliC

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Baptista A.A.S., Donato T.C., Souza, E.E., Gonçalves G.A.M., Garcia, K.C.O.D., Rodrigues J.C.Z., Sequeira J.L. & Andreatti Filho R.L. 2013. Induction of immune response in broiler chickens immunized with recombinant FliC and challenged by Salmonella Typhimurium. [Indução de resposta imune em frangos de corte imunizados com FliC recombinante e desafiados por Salmonella Typhimurium.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(10):1215-1221. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho, Unesp-Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18608-970, Brazil. E-mail: angelita_sampaio@yahoo.com.br Este estudo investigou a resposta imunitária de frangos de corte após a imunização oral com flagelina recombinante (rFliC) de Salmonella Typhimurium conjugada com micropartículas de alginato de sódio, e como intensificador de resposta imune foi associada a proteína subunidade B da toxina colérica (rCTB) e pool de Lactobacillus spp. (PL). As respostas imunes foram avaliadas por dosagem de IgY sérica e IgA do fluído intestinal e imunomarcação de linfócitos T CD8+ presentes no ceco. Os animais imunizados foram desafiados aos 21 dias após tratamento com Salmonella Typhimurium (ST). Foi observado em todos os grupos imunizados um aumento significativo (p<0,05) nos níveis de IgA (mg/mL) principalmente três semanas após as imunizações. Os níveis de IgY sérica (mg/mL) foram pouco influenciados pelos tratamentos, apenas na segunda semana após imunização observou-se diferenças significativas (p<0,05) entre os grupos. Observou-se que o número de linfócitos T CD8+ apresentou diferença significativa entre os tratamentos e o controle negativo após o desafio. Quanto a recuperação de Salmonella Typhimurium, observou-se que 48 horas após o desafio já não havia detecção do agente nos grupos T2 (rFliC+rCTb), T3 (rFliC+PL) e T4 (rFliC+rCTB+PL). Concluí-se que rFliC administrada, via oral, associada ou não a Lactobacillus spp e rCTB, demonstrou induzir significativamente a resposta imune humoral e que as aves imunizadas foram mais eficientes na eliminação de Salmonella após desafio.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moura C., Tiba M.R., Silva M.J. & Leite D.S. 2013. Identification of new flagellin-encoding fliC genes in Escherichia coli isolated from domestic animals using RFLP-PCR and sequencing methods. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):417-422. Universidade Paulista, Av. Armando Giassetti 577, Vila Hortolândia, Trevo Itu/Itatiba, Jundiaí, SP 13214-525, Brazil. E-mail: cmoura.bio@gmail.com Identification of Escherichia coli requires knowledge regarding the prevalent serotypes and virulence factors profiles allows the classification in pathogenic/non-pathogenic. However, some of these bacteria do not express flagellar antigen in vitro. In this case the PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) and sequencing of the fliC may be suitable for the identification of antigens by replacing the traditional serology. We studied 17 samples of E. coli isolated from animals and presenting antigen H nontypeable (HNT). The H antigens were characterized by PCR-RFLP and sequencing of fliC gene. Three new flagellin genes were identified, for which specific antisera were obtained. The PCR-RFLP was shown to be faster than the serotyping H antigen in E. coli, provided information on some characteristics of these antigens and indicated the presence of new genes fliC.

• Escherichia coli H antigen antígeno H

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Moura C., Tiba M.R., Silva M.J. & Leite D.S. 2013. Identification of new flagellin-encoding fliC genes in Escherichia coli isolated from domestic animals using RFLP-PCR and sequencing methods. [Identificação de novas flagelinas codificadas por fliC em Escherichia coli isoladas de animais domésticos utilizando RFLP-PCR e sequenciamento.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):417-422. Universidade Paulista, Av. Armando Giassetti 577, Vila Hortolândia, Trevo Itu/Itatiba, Jundiaí, SP 13214-525, Brazil. E-mail: cmoura.bio@gmail.com A identificação da Escherichia coli requer conhecimento sobre os sorotipos e fatores de virulência prevalentes permitindo a classificação em patogênico/não patogênico. No entanto, algumas destas bactérias não expressam o antígeno flagelar in vitro. Neste caso, o PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) e o sequenciamento do gene fliC podem ser adequados para a identificação desses antígenos, substituindo a sorologia tradicional. Nesta pesquisa foram estudadas 17 amostras de E. coli isoladas de animais e que apresentavam antígeno H não tipável (HNT). Os antígenos H foram caracterizados por PCR-RFLP e sequenciamento do gene fliC. Três novos genes da flagelina foram identificados, para os quais anti-soros específicos foram obtidos. A técnica PCR-RFLP mostrou-se mais rápida que a sorotipagem do antígeno H em E. coli, fornecendo informações sobre algumas características desses antígenos e indicou a presença de novos genes fliC.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Campos T.A., Nakazato G., Stehling E.G., Brocchi M. & Silveira W.D. 2008. Clonal study of avian Escherichia coli strains by fliC conserved-DNA-sequence regions analysis. Pesquisa Veterinária Brasileira 28(10):508-514. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biologia, Cx. Postal 6109, Universidade Estadual de Campinas, Cidade Universitária Zeferino Vaz s/n, Barão Geraldo, Campinas, SP 3081-862, Brazil. *Corresponding author: wds@unicamp.br The clonal relationship among avian Escherichia coli strains and their genetic proximity with human pathogenic E. coli, Salmonela enterica, Yersinia enterocolitica and Proteus mirabilis, was determined by the DNA sequencing of the conserved 5’ and 3’regions fliC gene (flagellin encoded gene). Among 30 commensal avian E. coli strains and 49 pathogenic avian E. coli strains (APEC), 24 commensal and 39 APEC strains harbored fliC gene with fragments size varying from 670bp to 1,900bp. The comparative analysis of these regions allowed the construction of a dendrogram of similarity possessing two main clusters: one compounded mainly by APEC strains and by H-antigens from human E. coli, and another one compounded by commensal avian E. coli strains, S. enterica, and by other H-antigens from human E. coli. Overall, this work demonstrated that fliC conserved regions may be associated with pathogenic clones of APEC strains, and also shows a great similarity among APEC and H-antigens of E. coli strains isolated from humans. These data, can add evidence that APEC strains can exhibit a zoonotic risk.

• APEC clonal analysis fliC gene

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Campos T.A., Nakazato G., Stehling E.G., Brocchi M. & Silveira W.D. 2008. Clonal study of avian Escherichia coli strains by fliC conserved-DNA-sequence regions analysis. Pesquisa Veterinária Brasileira 28(10):508-514. Departamento de Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biologia, Cx. Postal 6109, Universidade Estadual de Campinas, Cidade Universitária Zeferino Vaz s/n, Barão Geraldo, Campinas, SP 3081-862, Brazil. *Corresponding author: wds@unicamp.br The clonal relationship among avian Escherichia coli strains and their genetic proximity with human pathogenic E. coli, Salmonela enterica, Yersinia enterocolitica and Proteus mirabilis, was determined by the DNA sequencing of the conserved 5’ and 3’regions fliC gene (flagellin encoded gene). Among 30 commensal avian E. coli strains and 49 pathogenic avian E. coli strains (APEC), 24 commensal and 39 APEC strains harbored fliC gene with fragments size varying from 670bp to 1,900bp. The comparative analysis of these regions allowed the construction of a dendrogram of similarity possessing two main clusters: one compounded mainly by APEC strains and by H-antigens from human E. coli, and another one compounded by commensal avian E. coli strains, S. enterica, and by other H-antigens from human E. coli. Overall, this work demonstrated that fliC conserved regions may be associated with pathogenic clones of APEC strains, and also shows a great similarity among APEC and H-antigens of E. coli strains isolated from humans. These data, can add evidence that APEC strains can exhibit a zoonotic risk.