PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva Sobrinho F.B., Sá M.C.A., Gouveia G.V., Costa M.M., Faria M.D., Milanelo L. & Gradela A. 2017. [Isolation and determination of antimicrobials sensitivity and resistance of bacterial strains present in the cloaca Trachemys scripta elegans (Wied, 1839) raised in captivity in Petrolina/PE, Brazil.] Isolamento e determinação de sensibilidade e resistência a antimicrobianos de cepas bacterianas presentes na cloaca de Trachemys scripta elegans (Wied,1839) criadas em cativeiro em Petrolina, PE. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(3):261-268. Colegiado de Medicina Veterinária, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia 407 Km 12, Lote 543, Projeto Nilo Coelho C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: agradela@hotmail.com This study isolated and determined the profile of susceptibility and antimicrobials resistance of bacterial strains isolated from the cloaca Trachemys scripta elegans (T. s. elegans) raised in captivity. After 120 days of adaptation, cloacal swab samples obtained from 20 adults animals were grown and, after the pathogens identification through biochemical tests, submitted to the test of susceptibility to nine antimicrobials. Enterobacter aerogenes (85%); Shigella spp. (10%) and Edwadsiella spp. (5%) were isolated and identified. Isolates from E. aerogenes were sensitive to gentamicin (86%), enrofloxacin (79%), streptomycin (50%), sulfazotrim (36%) and ampicillin (29%) and resistant to penicillin (100%), erythromycin (93%), cephalexin (86%), ampicillin (71%) and sulfazotrim (64%). Isolates from Shigella spp. showed sensitivity to gentamicin (100%), enrofloxacin (50%), doxycycline (50%), streptomycin (50%), ampicillin (50%), penicillin (50%) and sulfazotrim (50%) and resistance to doxycycline (50 %), streptomycin (50%), ampicillin (50%), penicillin (100%), cephalexin (50%) and sulfazotrim (50%), while the Edwardsiella spp. were sensitive only to gentamicin (100%) and were highly resistant (100%) to other antibiotics. The results suggest the participation of T. s. elegans in the epidemiological chain, as reservoir of important pathogens, such as E. aerogenes, Shigella spp. and Edwardisiella spp., making it important to adopt preventive measures for zoonotic risk that present and correct treatment and control in captivity and households, as well as studies that address the sensitivity characteristics and antimicrobial resistance of isolates from cloaca, as it multidrug resistance to drugs can be transmitted to humans and compromise the treatment of patients with serious diseases.

• Testudines Enterobacter aerogenes Shigella spp. Edwardisiella spp. Trachemys scripta elegans

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva Sobrinho F.B., Sá M.C.A., Gouveia G.V., Costa M.M., Faria M.D., Milanelo L. & Gradela A. 2017. [Isolation and determination of antimicrobials sensitivity and resistance of bacterial strains present in the cloaca Trachemys scripta elegans (Wied, 1839) raised in captivity in Petrolina/PE, Brazil.] Isolamento e determinação de sensibilidade e resistência a antimicrobianos de cepas bacterianas presentes na cloaca de Trachemys scripta elegans (Wied,1839) criadas em cativeiro em Petrolina, PE. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(3):261-268. Colegiado de Medicina Veterinária, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia 407 Km 12, Lote 543, Projeto Nilo Coelho C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: agradela@hotmail.com Este estudo isolou e determinou o perfil de sensibilidade e de resistência a antimicrobianos de cepas bacterianas isoladas da cloaca de Trachemys scripta elegans (T. s. elegans) criadas em cativeiro. Após 120 dias de adaptação, amostras de swab cloacal obtidas de 20 animais adultos foram cultivadas e, após a identificação dos patógenos através de testes bioquímicos, submetidas ao teste de suscetibilidade a nove antimicrobianos. Enterobacter aerogenes (85%); Shigella spp. (10%) e Edwadsiella spp. (5%) foram isolados e identificados. Os isolados de E. aerogenes foram sensíveis à gentamicina (86%), enrofloxacina (79%), estreptomicina (50%), sulfazotrim (36%) e ampicilina (29%) e resistentes a penicilina (100%), eritromicina (93%), cefalexina (86%) ampicilina (71%) e sulfazotrim (64%). Isolados de Shigella spp. apresentaram sensibilidade à gentamicina (100%), enrofloxacina (50%), doxicilina (50%), estreptomicina (50%), ampicilina (50%), penicilina (50%) e sulfazotrim (50%) e resistência a doxicilina (50%), estreptomicina (50%), ampicilina (50%), penicilina (100%), cefalexina (50%) e sulfazotrim (50%), enquanto que os de Edwardsiella spp. foram sensíveis apenas à gentamicina (100%) e altamente resistentes (100%) aos demais antimicrobianos. Os resultados sugerem a participação de T. s. elegans na cadeia epidemiológica, como reservatório de patógenos importantes, como E. aerogenes, Shigella spp. e Edwardisiella spp., tornando importante a adoção de medidas preventivas pelo risco zoonótico que apresentam e corretas de tratamento e de controle em cativeiros e domicílios, assim como de estudos que enfoquem as características de sensibilidade e de resistência antimicrobiana dos isolados cloacais, pois a multirresistência a drogas pode ser transmitida aos humanos e comprometer o tratamento de indivíduos com doenças graves.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Campos L.L., Landim-Alvarenga F.C., Ikeda T.L., Monteiro B.A., Maia L., Freitas-Dell’Aqua C.P. & De Vita B. 2017. Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(3):278-286. Departamento de Reprodução Animal e Radiologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: loreta_campos@yahoo.com.br Stem cells are undifferentiated cells with a high proliferation potential. These cells can be characterized by their in vivo ability to self-renew and to differentiate into specialized cell lines. The most used stem cell types, in both human and veterinary fields, are the mesenchymal stem cells (MSC) derived from bone marrow and adipose tissue. Nowadays, there is a great interest in using stem cells derived from fetal tissues, such as amniotic membrane (AM) and umbilical cord tissue (UCT), which can be obtained non-invasively at delivery time. Due to the scarcity of studies in bovine species, the aim of this study was to isolate, characterize, differentiate and cryopreserve MSC derived from the mesenchymal layer of amniotic membrane (AM), for the first time, and umbilical cord tissue (UCT) of dairy cow neonates after assisted delivery (AD) and from fetus at initial third of pregnancy (IT) obtained in slaughterhouse. Cells were isolated by enzymatic digestion of the tissue fragments with 0.1% collagenase solution. Six samples of AM and UCT at delivery time and six samples of AM and UCT at first trimester of pregnancy were subjected to morphology evaluation, imunophenotype characterization, in vitro osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and viability analysis after cryopreservation. All samples showed adherence to plastic and fibroblast-like morphology. Immunocytochemistry revealed expression of CD 44, NANOG and OCT-4 and lack of expression of MHC II in MSC from all samples. Flow cytometry demonstrated that cells from all samples expressed CD 44, did not or low expressed CD 34 (AM: IT-0.3%a, AD-3.4%b; UCT: 0.4%, 1.4%) and MHC II (AM: IT-1.05%a, AD-9.7%b; UCT: IT-0.7%a, AD-5.7%b). They were also capable of trilineage mesenchymal differentiation and showed 80% viability after cryopreservation. According to the results, bovine AM and UCT-derived cells, either obtained at delivery time or from slaughterhouse, are a painless and non-invasive source of MSC and can be used for stem cell banking.

• Cryopreservation stem cells amniotic mesenchymal layer umbilical cord fetuses cell banking criopreservação células tronco cordão umbilical

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Campos L.L., Landim-Alvarenga F.C., Ikeda T.L., Monteiro B.A., Maia L., Freitas-Dell’Aqua C.P. & De Vita B. 2017. Isolation, culture, characterization and cryopreservation of stem cells derived from amniotic mesenchymal layer and umbilical cord tissue of bovine fetuses. [Isolamento, cultura, caracterização e criopreservação de células tronco derivadas de camada amniótica mesenquimal e de tecido do cordão umbilical de fetuses bovinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(3):278-286. Departamento de Reprodução Animal e Radiologia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: loreta_campos@yahoo.com.br As células tronco mesenquimais (CTMs) estão presentes na maioria dos tecidos adultos e possuem grande capacidade de multiplicação. Quando cultivadas in vitro são capazes de se auto renovar e dar origem a novos tipos celulares. As células tronco mais utilizadas, tanto na medicina humana como na medicina veterinária são as células tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo. Atualmente, uma grande tendência para a utilização de CTMs obtidas de tecidos fetais, como a membrana amniótica (MA), matriz extravascular do cordão umbilical (TCU) e sangue do cordão umbilical (SCU) pode ser observada, já que estas fontes podem ser colhidas no momento do parto por uma técnica não invasiva. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar, diferenciar e criopreservar CTMs obtidas de MA e TCU de fetos bovinos colhidos no momento do parto e de fetos do terço inicial da gestação em abatedouro-frigorífico. As células foram recuperadas por meio de digestão enzimática tecidual, realizada com solução de colagenase 0,1%. Foram colhidas amostras de MA e TCU no momento do parto (n=6) e de MA e TCU no terço inicial de gestação (n=6), as quais foram submetidas às análises morfológicas, imunofenotípica por imunocitoquímica e citometria de fluxo, diferenciações in vitro nas linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica e ainda, avaliação da viabilidade após a criopreservação por citometria de fluxo. Todas as amostras dos diferentes grupos demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico todas as amostras foram imunomarcadas para CD44, NANOG e Oct-4, com ausência de marcação para MHC II. Na análise imunofenotipica por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram marcação para CD44, ausência de marcação para ou baixíssima expressão de CD34 (MA: TI-0,3%a, PA-3.4%b; TCU: TI-0,4%, PA-1.4%) e nula ou baixa expressão de MHC II (MA: TI-1.5%a, PA-9.7%b; UCT: TI-0.7%a, PA-5.7%b. Apresentaram também capacidade de diferenciação in vitro nas três linhagens mesodermais e quando analisadas pós criopreservação por citometria de fluxo, todas as amostras apresentaram viabilidade de 80%. Estes resultados indicam que MA e TCU, obtidos tanto no momento de parto como em abatedouro, de fetos bovinos podem ser utilizados como fonte não invasiva e indolor de CTMs e possibilitam a formação de bancos de armazenamento de células.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Queiroz C.M., Santos G.J., Destro F.C., Teixeira C.R., Pantoja J.C., Schmidt E.M.S., Palme R. & Ferreira J.C.P. 2016. [Endocrine response to physical restraint and isolation in blue-fronted parrots.] Resposta endócrina à contenção física e isolamento em papagaios-verdadeiros. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):41-45. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jcferreira@fmvz.unesp.br The aim of this study was to evaluate the response of blue-fronted parrots to restraint procedures and separation by non-invasive methods such as measurement of glucocorticoid metabolites in droppings. For this, we utilized 24 birds, 17 males and 7 females, initially kept in large adjacent aviaries, separated by sex. After capture and 3 minutes of manual contention, by random, 13 birds returned to the aviary and 11 animals were housed in individual cages in the same facility of the aviaries allowing the maintenance of auditory and visual contact between them. In order to evaluate if the physically isolated birds isolated or in groups would react in different ways, all droppings samples were collected at 3-hours intervals during 24 hours to evaluation of excreted glucocorticoid metabolites by enzimeimmunoassay. There were no significant effects of sex (P=0.5850), treatment (P=0.6805) and time (P=0.2293) and the glucocorticoid metabolites concentrations were within the diurnal range expected for this specie. Therefore, the endocrine response of both groups was similar and stress of capture and physical separation was not significant for the birds.

• Stress Amazona aestiva estresse

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Queiroz C.M., Santos G.J., Destro F.C., Teixeira C.R., Pantoja J.C., Schmidt E.M.S., Palme R. & Ferreira J.C.P. 2016. [Endocrine response to physical restraint and isolation in blue-fronted parrots.] Resposta endócrina à contenção física e isolamento em papagaios-verdadeiros. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(Supl.1):41-45. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jcferreira@fmvz.unesp.br O objetivo deste trabalho foi analisar a resposta dos papagaios-verdadeiros aos procedimentos de contenção e separação física por método não invasivo, como a dosagem das concentrações de metabólitos de glicocorticoides nas excretas. Para tanto, foram utilizadas 24 aves, 17 machos e sete fêmeas, inicialmente mantidas em viveiros amplos e adjacentes, separadas por sexo. Após captura e contenção de três minutos, 13 aves voltaram para os viveiros coletivos e 11 foram alojadas em gaiolas individuais no mesmo recinto dos viveiros, de modo a permitir que as aves isoladas mantivessem contato visual e auditivo com as demais. Para avaliar se os animais responderiam de maneira diferente quando fisicamente isolados ou em grupo, amostras de excretas foram coletadas sequencialmente em intervalos de três horas durante 24 horas para avaliação dos metabólitos de glicocorticoides por enzimaimunoensaio. Não houve efeito significativo de sexo (P=0,5850), tratamento (P=0,6805) e tempo (P=0,2293), e as concentrações de metabólitos de glicocorticoides mantiveram-se dentro da variação diurna esperada para esta espécie. Portanto, ambos os grupos responderam endocrinologicamente de forma semelhante e o estresse de captura e separação física não foi significativo para as aves.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Guerra Filho J.B.P., Yamatogi R.S., Possebon F.S., Fernandes S.A., Tiba-Casas M.R., Lara G.H.B., Ribeiro M.G. & Pinto J.P.A.N. 2016. Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1165-1170. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicna Veterinária e Zootecnia Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: josepaes@fmvz.unesp.br Salmonellosis is a foodborne disease caused by bacteria of the genus Salmonella, being pigs and pork-products potentially important for its occurrence. In recent decades, some serovars of Salmonella have shown increase of resistance to conventional antimicrobials used in human and animal therapy, with serious risks for public health. The aim of this study was to evaluate feces (n=50), mediastinal (n=50), mesenteric (n=50) and mandibular (n=50) lymph nodes obtained from slaughter houses for Salmonella spp. Positive samples were serotyped and subjected to an in vitro antimicrobial susceptibility test, including the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production. Salmonella species were identified in 10% (20/200) of total samples. From these, 20% (10/50) were identified in the submandibular lymph nodes, 18% (9/50) in the mesenteric lymph nodes, 2% (1/50) in feces and 0% (0/50) in the mediastinal lymph nodes. The serotypes found were Salonella Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg and S. Derby with 5% (5% each). All strains showed resistance to at least one antimicrobial; 90% were resistant to four or more antimicrobials, and 15% were multidrug-resistant. Resistance to ciprofloxacin, tetracycline and nalidixic acid was particularly prevalent amongst the tested serovars. Here, we highlighted the impact of pigs in the epidemiological chain of salmonellosis in domestic animals and humans, as well as the high antimicrobial resistance rates of Salmonella strains, reinforcing the necessity for responsible use of antimicrobials for animals as an emergent One Health issue, and to keep these drugs for human therapy approaches.

• Serotyping Salmonella resistant serovars sorotipagem resistência antimicrobianos sorovares

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Guerra Filho J.B.P., Yamatogi R.S., Possebon F.S., Fernandes S.A., Tiba-Casas M.R., Lara G.H.B., Ribeiro M.G. & Pinto J.P.A.N. 2016. Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs. [Isolamento, sorotipagem e padrões de resistência a antimicrobianos de Salmonella em fezes e linfonodos de suínos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(12):1165-1170. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicna Veterinária e Zootecnia Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: josepaes@fmvz.unesp.br Nas últimas décadas, o aumento de cepas circulante de Salmonella concomitantemente a resistência microbiana tem despertado a preocupação dos órgãos de Saúde Pública. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi pesquisar a presença de Salmonella a partir de fezes (n=50), linfonodos mediastinos (n=50), mesentéricos (n=50) e submandibular (n=50) oriundos de um abatedouro suíno. As cepas isoladas foram sorotipadas e testadas quanto a resistência antimicrobiana. A presença de Salmonella isolada foram em 10% (20/200) do total de amostras, sendo 20% dos linfonodos submandibulares, 18% dos linfonodos mesentéricos e 2% das fezes. Os sorotipos encontrados foram S. Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg (5%) e S. Derby (5%). Todas a cepas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano testado, sendo 90% resistente pelo menos quatro antimicrobianos. Destes, 15% foram classificadas como multidrogas resistentes. Os antimicrobianos mais resistentes entre os sorovares isolados foram a ciprofloxacina, tetraciclina e o ácido nalidixico. A presença de cepas de Salmonella resistente a antimicrobianos na espécie suína tem gerado um grande impacto epidemiológico entre homem e animal, reforçando cada vez mais a necessidade do uso adequado de drogas principalmente relacionado com o tema “One Health”.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Eleotério R.B., Sepúlveda R.V., Reis E.C.C., Valente F.L. & Borges A.P.B. 2016. Isolation, expansion and differentiation of mesenchymal stromal cells from rabbits’ bone marrow. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):423-430. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Rua Peter Henry Rolphs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: andrea@ufv.br Tissue engineering has been a fundamental technique in the regenerative medicine field, once it permits to build tri-dimensional tissue constructs associating undifferentiated mesenchymal cells (or mesenchymal stromal cells - MSCs) and scaffolds in vitro. Therefore, many studies have been carried out using these cells from different animal species, and rabbits are often used as animal model for in vivo tissue repair studies. However, most of the information available about MSCs harvesting and characterization is about human and murine cells, which brings some doubts to researchers who desire to work with a rabbit model in tissue repair studies based on MSCs. In this context, this study aimed to add and improve the information available in the scientific literature providing a complete technique for isolation, expansion and differentiation of MSCs from rabbits. Bone marrow mononuclear cells (BMMCs) from humerus and femur of rabbits were obtained and to evaluate their proliferation rate, three different culture media were tested, here referred as DMEM-P, DMEM´S and α-MEM. The BMMCs were also cultured in osteogenic, chondrogenic and adipogenic induction media to prove their multipotentiality. It was concluded that the techniques suggested in this study can provide a guideline to harvest and isolate MSCs from bone marrow of rabbits in enough amount to allow their expansion and, based on the laboratory experience where the study was developed, it is also suggested a culture media formulation to provide a better cell proliferation rate with multipotentiality preservation.

• Mesenchymal stromal cells bone marrow stem cells cell therapy regenerative medicine células tronco mesenquimais medula óssea terapia celular medicina regenerativa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Eleotério R.B., Sepúlveda R.V., Reis E.C.C., Valente F.L. & Borges A.P.B. 2016. Isolation, expansion and differentiation of mesenchymal stromal cells from rabbits’ bone marrow. [Isolamento, expansão e diferenciação de celulas tronco mesenquimais oriundas da medula óssea de coelhos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):423-430. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Rua Peter Henry Rolphs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: andrea@ufv.br A engenharia de tecidos tem sido uma técnica fundamental no campo da medicina regenerativa, uma vez que permite a criação de peças teciduais tri-dimensionais por meio da associação de células mesenquimais indiferenciadas (ou células estromais mesenquimais - CEMs) e moldes de biomateriais in vitro. Assim, muitos estudos têm sido realizados utilizando estas células oriundas de diferentes espécies animais, e os coelhos são frequentemente utilizados como um modelo animal para estudos in vivo de reparação tecidual. No entanto, a maioria das informações disponíveis sobre a coleta e caracterização de CEMs referem-se às células humanas e murinas, o que traz algumas dúvidas para pesquisadores que desejam trabalhar com coelhos em estudos de reparação de tecidos baseados em CEMs. Neste contexto, o presente estudo objetivou contribuir e aprimorar as informações disponíveis na literatura científica fornecendo uma técnica completa para o isolamento, expansão e diferenciação das MSCs de coelhos. Células mononucleares da medula óssea (CMMOs) do úmero e fêmur de coelhos foram obtidas e, para avaliar sua taxa de proliferação, três meios de cultura diferentes foram testadas, aqui referidos como DMEM-P, DMEM’S e α-MEM. As CMMOs também foram cultivadas em meios de indução osteogênico, condrogênico, e linhagens adipogênico para provar a sua multipotencialidade. Concluiu-se que as técnicas sugeridas neste estudo podem fornecer um guia para a coleta e isolamento de CEMs da medula óssea de coelhos em quantidade suficiente para permitir a sua expansão e, com base na experiência de laboratório onde o estudo foi desenvolvido, é também sugerida uma formulação de meio de cultivo para proporcionar uma melhor taxa de proliferação celular com preservação da multipotencialidade.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moraes J.M., Bravo M.O., Araújo P.C., Rosa M.C., Tognoli G.K., Dumont C.B.S., Varanda L.F.O. & Godoy R.F. 2016. [Comparison of two methods of equine bone marrow aspiration and two solutions for mononuclear cell isolation.] Comparação de dois métodos de colheita de medula óssea de equinos e de dois meios de diluição para o isolamento de células mononucleares. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):247-252. Unidade Acadêmica Especial Ciências da Saúde, Universidade Federal de Goiás, Jataí, GO 75801-615, Brazil. E-mail: mmjulia.edu@gmail.com The aim of this study was to evaluate mononuclear cells fraction (MCF) concentration and viability from different techniques of bone marrow (BM) aspiration and processing in horses. Five adult horses, healthy and of unknown breed were evaluated. BM was obtained from sternum bone, according two protocols: in aspiration A, 10mL of heparin solution was used inside the syringe and BM was aspirated; in aspiration B, 10mL of heparin solution was injected into the BM, and aspiration was done after 20 seconds. All the animals were submitted by both protocols realized in sequence, without a gap between the procedures. After MCF isolation, of BM samples obtained from A and B aspiration, each sample was divided into two tubes; one contained DMEM solution and the other with PBS solution. Therefore, interchanging the aspiration protocol and the dilution solution, four sample tubes were obtained for each horse. The tubes were centrifuged and the pellet was homogenized with the respectively solution to obtain the final volume of 100µL. Cellular concentration and viability were determined to obtain the FCM medium concentration. For both solutions, the aspiration B had higher numeric values comparing with aspiration A; however, it was not significant (p>0.05). This tendency is attribute for the less BM coagulation observed in the aspiration B, suggesting greater improvement of MCF. No difference (p>0.05) was found between DMEM and PBS solution, indicating that both do not alter the cell viability. The protocols used for BM aspiration and MCF isolation were efficient for application in equine cellular therapy.

• Bone marrow medula óssea

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Moraes J.M., Bravo M.O., Araújo P.C., Rosa M.C., Tognoli G.K., Dumont C.B.S., Varanda L.F.O. & Godoy R.F. 2016. [Comparison of two methods of equine bone marrow aspiration and two solutions for mononuclear cell isolation.] Comparação de dois métodos de colheita de medula óssea de equinos e de dois meios de diluição para o isolamento de células mononucleares. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):247-252. Unidade Acadêmica Especial Ciências da Saúde, Universidade Federal de Goiás, Jataí, GO 75801-615, Brazil. E-mail: mmjulia.edu@gmail.com O objetivo do presente estudo foi avaliar a concentração e viabilidade da fração de células mononucleares (FCM) a partir de diferentes técnicas de colheita e processamento de medula óssea (MO) em equinos. Foram avaliados cinco equinos adultos, hígidos e sem raça definida. Obtiveram-se frações de medula óssea (MO) do osso esterno, de acordo com dois protocolos: na colheita A, utilizou-se 10mL de solução de heparina dentro da seringa e em seguida, aspirou-se a MO; na colheita B, 10mL de solução de heparina foi injetada na MO e a aspiração foi realizada após 20 segundos. Todos os animais foram submetidos aos dois protocolos de colheitas, realizadas em sequência, sem intervalo entre os dois procedimentos. Após isolamento da fração de células mononucleares (FCM), das amostras de MO obtidas nas colheitas A e B, cada amostra foi dividida em dois tubos, um contendo solução de DMEM e outro contendo PBS. Assim, alternando-se o tipo de colheita e a solução diluidora, obteve-se quatro tubos de amostras por animal. Os tubos foram centrifugados e os sedimentos foram homogeneizados nos respectivos meios obtendo-se o volume final de 100µL. Realizou-se determinação da concentração e viabilidade celular, obtendo-se as concentrações médias de FCM. Para ambos os meios de diluição, a colheita B apresentou valor numérico maior em comparação à colheita A, porém não foi significativo (p>0,05). Atribui-se tal tendência à menor ocorrência de coagulação da MO no momento da colheita B, sugerindo-se melhor aproveitamento da FCM. Não houve diferença (p>0,05) entre os meios DMEM ou PBS, indicando que os mesmos não alteraram a viabilidade celular. Os protocolos utilizados para colheita de MO e separação da FCM se mostraram eficientes, para o uso em terapia celular em equinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Branco E., Silva K.S.M., Assis M.F., Oliveira E.H.C., Lima A.R., Aquino A.C.G., Cabral R. & Miglino M.A. 2016. Protocol for collection and isolation of bone marrow mononuclear cells in Chlorocebus aethiops. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(2):119-122. Instituto de Saúde e Produção Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural da Amazônia, Av. Presidente Tancredo Neves 2501, Bairro Montese, Belém, PA 66077-530, Brazil. E-mail: ebranco.ufra@gmail.com Chlorocebus aethiops is a species of non-human primate frequently used in biomedical research. Some research involves this species as an experimental model for various diseases and possible treatment with stem cells. The bone marrow is one of the main sources of these cells and provides easy access. The aim of this study was to standardize the protocol of collection and separation of bone marrow in C. aethiops. Ten animals were submitted to puncture of bone marrow with access to the iliac crest and cell separation by density gradient. The bone marrow of C. aethiops had an average of 97% viability. From the results achieved, we can conclude that C. aethiops is an excellent model to obtain and isolate mononuclear cells from bone marrow, fostering several studies in the field of cell therapy.

• Bone marrow stem cell Chlorocebus aethiops medula óssea células-tronco

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Branco E., Silva K.S.M., Assis M.F., Oliveira E.H.C., Lima A.R., Aquino A.C.G., Cabral R. & Miglino M.A. 2016. Protocol for collection and isolation of bone marrow mononuclear cells in Chlorocebus aethiops. [Protocolo para colheita e isolamento de células mononucleares de medula óssea em Chlorocebus aethiops.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(2):119-122. Instituto de Saúde e Produção Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural da Amazônia, Av. Presidente Tancredo Neves 2501, Bairro Montese, Belém, PA 66077-530, Brazil. E-mail: ebranco.ufra@gmail.com Chlorocebus aethiops é uma espécie de primata não humano frequentemente utilizados em pesquisa biomédica. Algumas pesquisas envolve esta espécie como modelo experimental para várias doenças e possível tratamento com células-tronco. A medula óssea é uma das principais fontes destas células e proporciona fácil acesso. O objetivo deste estudo foi o de padronizar o protocolo de coleta e separação de medula óssea em C. aethiops. Dez animais foram submetidos a punção de medula óssea com acesso à crista ilíaca e separação de células por gradiente de densidade. A medula óssea de C. aethiops tinha uma média de 97% de viabilidade. A partir dos resultados obtidos, podemos concluir que C. aethiops é um excelente modelo para obter e isolar células mononucleares da medula óssea, promovendo vários estudos no campo da terapia celular.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Almeida M.S., Santos S.B., Mota A.R., Silva L.T.R. Silva L.B.G. & Mota R.A. 2016. [Microbiological isolation from the ear canal of healthy dogs and with otitis externa in the metropolitan region of Recife, Pernambuco.] Isolamento microbiológico do canal auditivo de cães saudáveis e com otite externa na região metropolitana de Recife, Pernambuco. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(1):29-32. Laboratório de Bacterioses dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Avenida Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: rinaldo.mota@hotmail.com Otitis externa (OE) is the term used to describe inflammation of the external ear canal. This disease has many etiologies, occurs in several species and is particularly common in dogs. The resident microbiota microorganisms are commonly involved in the OE etiopathogenesis, being frequently appointed as perpetuator agents. The aim of this study was to investigate the microbiological profile of dogs with healthy ears and of others with otitis in the metropolitan region of Recife, Pernambuco, Brazil. With the aid of sterile swabs, samples of right and left ear of 41 dogs, 11 with and 30 without OE, were collected. Bacterial and fungal isolation was performed with cultured samples; positivity was observed in 80% of animals with healthy ears, with the presence of more than one microrganism in 38 samples (63.3%), whereas in dogs with OE, the positivity was 95.3% with polymicrobial infection in 77.3% samples. With regard to the genus, the microbiological profile was identical between healthy and diseased dogs. The microrganisms isolated were Staphylococcus sp., Micrococcus, Bacillus sp., Streptococcus sp. and Malassezia sp.

• Otitis externa otite externa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Almeida M.S., Santos S.B., Mota A.R., Silva L.T.R. Silva L.B.G. & Mota R.A. 2016. [Microbiological isolation from the ear canal of healthy dogs and with otitis externa in the metropolitan region of Recife, Pernambuco.] Isolamento microbiológico do canal auditivo de cães saudáveis e com otite externa na região metropolitana de Recife, Pernambuco. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(1):29-32. Laboratório de Bacterioses dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Avenida Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: rinaldo.mota@hotmail.com Otite externa (OE) é o termo utilizado para definir a inflamação do conduto auditivo externo; esta doença possui diversas etiologias, ocorre em várias espécies e é particularmente frequente em cães. Os microrganismos da microbiota residente comumente estão envolvidos na etiopatogenia da OE, sendo apontados como agentes perpetuadores da doença. O objetivo deste estudo foi investigar o perfil microbiológico de cães com conduto auditivo saudável e com otite na região metropolitana do Recife. Com o auxílio de suabes estéreis foram coletadas amostras das orelhas direita e esquerda de 41 cães, sendo 11 com OE e 30 sem OE. Foi realizado o isolamento bacteriano e fúngico das amostras cultivadas; observou-se positividade em 80% dos cães com orelhas saudáveis e presença de mais de um microrganismo em 38 amostras (63,3%); já nos cães com OE, a positividade foi 95,3%, com infecção polimicrobiana em 77,3% das amostras. No que se refere aos gêneros bacterianos, o perfil de isolamento microbiológico foi idêntico entre os cães otopatas e sadios. Os microrganismos isolados foram Staphylococcus sp., Micrococcus, Bacillus sp., Streptococcus sp. e Malassezia sp.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho Y.K.P., Argôlo-Neto N.M., Ambrósio C.E., Oliveira L.J., Rocha A.R., Silva J.B., Carvalho M.A.M. & Alves F.R. 2015. Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831). Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):590-598. Departamento de Morfisiologia Veterinária, Universidade Federal do Piauí, Campus Universitário Ministro Petrônio Portella, Bairro Ininga, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: flavioribeiro@ufpi.edu.br The study aimed to isolate, expand, differentiate and characterize progenitor cells existent in the dental pulp of agouti. The material was washed with PBS solution and dissociated mechanically with the aid of a scalpel blade on plates containing culture medium D-MEM/F-12, and incubated at 5% CO2-37°C. The growth curve, CFU assay, osteogenic/adipogenic differentiation and characterization were obtained from the isolation. The cells began to be released from the explant tissue around the 7th day of culture. By day 22 of culture, cells reached 80% confluence. At the UFC test, 81 colonies were counted with 12 days of cultivation. The growth curves before and after freezing showed a regular growth with intense proliferation and clonogenic potential. The cell differentiation showed formation of osteoblasts and fat in culture, starting at 15 days of culture in a specific medium. Flow cytometry (FACs) was as follows: CD34 (positive), CD14 (negative), CD45 (negative), CD73 (positive), CD79 (negative), CD90 (positive), CD105 (positive), demonstrating high specificity and commitment of isolated cells with mesenchymal stem cells strains. These results suggest the existence of a cell population of stem cells with mesenchymal features from the isolated tissue in the explants of agouti dental pulp, a potential model for study of stem cell strains obtained from the pulp tissue.

• Dasyprocta prymnolopha dental pulp polpa dentária

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho Y.K.P., Argôlo-Neto N.M., Ambrósio C.E., Oliveira L.J., Rocha A.R., Silva J.B., Carvalho M.A.M. & Alves F.R. 2015. Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831). [Isolamento, expansão e diferenciação de progenitores celulares obtidos da polpa dentária de cutia (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831).] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):590-598. Departamento de Morfisiologia Veterinária, Universidade Federal do Piauí, Campus Universitário Ministro Petrônio Portella, Bairro Ininga, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: flavioribeiro@ufpi.edu.br Este estudo teve como objetivo isolar, expandir, diferenciar e caracterizar células progenitoras existentes na polpa dentária de cutia. O material foi lavado em solução de PBS e dissociado mecanicamente, com o auxílio de uma lâmina de bisturi, em placas contendo meio de cultura D-MEM/F-12, e incubadas em 5% de CO2-37⁰C. A curva de crescimento, o ensaio de CFU, a diferenciação osteogênica/adipogênica e a caracterização foram obtidas a partir do isolamento. As células começaram a ser liberadas, a partir do explante, em torno do sétimo dia de cultura. A partir do 22o dia, as células atingiram 80% de confluência. No teste para UFC, 81 colônias foram contadas aos 12 dias de cultivo. As curvas de crescimento pré- e pós-congelamento apresentaram crescimento regular, com intensa proliferação e potencial clonogênico. A diferenciação das células mostrou a formação de osteoblastos e de células de gordura, a partir de 15 dias de cultura em meio específico. A citometria de fluxo (FACS) apresentou-se como segue: CD34 (positivo), CD14 (negativo), CD45 (negativo), CD73 (positivo), CD79 (negativo), CD90 (positivo), CD105 (positivo), demonstrando a grande especificidade e comprometimento das células isoladas com linhagens de células-tronco mesenquimais. Estes resultados sugerem a existência de uma população de células-tronco mesenquimais isolada a partir de explantes da polpa dentária cutia, um modelo potencial para o estudo de linhagens de células-tronco obtidas a partir do tecido pulpar.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Santos L.A., Mion L., Marotzki M., Parizotto L., Rodrigues L.B., Nascimento V.P. & Santos L.R. 2015. [Miniaturized most probable number and conventional microbiology for isolation of Salmonella spp. in poultry slaughterhouses.] Número mais provável miniaturizado e microbiologia convencional para isolamento de Salmonella spp. em abatedouros de frangos de corte. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):223-229. Curso de Medicina Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Passo Fundo, BR-285, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: luruschel@upf.br Poultry products can be important modes of transmission of Salmonella spp. to humans and, among several parameters used to determine food quality, microbiological characteristics play an essential role. The aim of this study was to determine and quantify Salmonella spp. at broiler slaughtering facilities. This was done by conventional microbiology and by the miniaturized most probable number (mMPN) methods. Three federally-inspected slaughterhouses were visited, where samples were collected in triplicate from six sites: reception of live birds (cloacal swabs and sponge samples from transport cages before and after sanitation) and carcass processing (after pre-chiller, after dripping, and before primary packaging and refrigeration at -12oC for 24h), totaling 108 samples. Three of the six surveyed sites and two of the three slaughterhouses were contaminated with Salmonella spp., showing an infection rate of 5.5% independently of the method used, and revealing that transport cages were contaminated after sanitation. No correlation could be established between the results of conventional microbiology and mMPN methods, and contamination along the slaughtering line could not quantified. This indicates the importance of combining qualitative and quantitative methods for the enumeration of Salmonella when detection rates are lower than the proposed mMPN limit (0.13 MPN/mL). Typhimurium, Panama, Lexington and Rissen, which are paratyphoid organisms and are potentially infectious to humans, were identified. However, these serovars were isolated at the reception of live birds (from cloacal swabs and from transport cages) rather than from the end products. Given that Salmonella spp. was detected in transport cages after sanitation, it is paramount that automated washing procedures currently used in slaughterhouses be reassessed and adjusted.

• Salmonella spp.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Santos L.A., Mion L., Marotzki M., Parizotto L., Rodrigues L.B., Nascimento V.P. & Santos L.R. 2015. [Miniaturized most probable number and conventional microbiology for isolation of Salmonella spp. in poultry slaughterhouses.] Número mais provável miniaturizado e microbiologia convencional para isolamento de Salmonella spp. em abatedouros de frangos de corte. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):223-229. Curso de Medicina Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Passo Fundo, BR-285, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: luruschel@upf.br Os produtos de origem avícola podem ser importantes veículos de transmissão de Salmonella spp. para humanos e, dentre os vários parâmetros que determinam a qualidade de um alimento, destacam-se os que definem suas características microbiológicas. Objetivou-se detectar e quantificar Salmonella spp. na tecnologia de abate de frangos de corte por microbiologia convencional (MC) e número mais provável miniaturizado (mNMP). As coletas foram realizadas em duas visitas a três abatedouros sob Inspeção Federal e em seis pontos de coleta em triplicata, definidos como: recepção das aves (swabs de cloaca e esponjas de gaiolas de transporte antes e após a higienização) e carcaças (após pré resfriamento em chiller, após o gotejamento e antes da embalagem primária e congeladas a -12oC por 24 horas), totalizando 108 amostras. Identificou-se Salmonella spp. em três dos seis pontos do fluxograma de abate e em dois dos três estabelecimentos amostrados, independentemente do método utilizado, perfazendo 5,5% de positividade, onde destaca-se a contaminação nas gaiolas de transporte das aves após a higienização. Não foi possível correlacionar os resultados da microbiologia convencional e do mNMP ou mesmo quantificar a contaminação ao longo da tecnologia de abate, o que indica a necessidade de se utilizar um método qualitativo aliado ao método de quantificação quando Salmonella estiver presente em quantidades inferiores ao limite de detecção do mNMP proposto (0,13 NMP/mL). Os sorovares identificados foram Typhimurium, Panama, Lexington e Rissen, consideradas paratíficos e, portanto, potencialmente capazes de causar infecções em humanos, embora estes sorovares não tenham sido isolados em produtos finais e sim na chegada dos frangos aos abatedouros (swabs de cloaca e gaiolas de transporte). A identificação de Salmonella spp. nas gaiolas de transporte após a higienização é um indicativo da necessidade de revisão e adequação dos métodos automatizados de lavagem atualmente utilizados nos abatedouro