Resultado da pesquisa (43)

Termo utilizado na pesquisa Isolamento

#21 - First isolation and characterization of Leptospira interrogans serogroup Australis from swine in Brazil, 35(1):6-8

Abstract in English:

ABSTRACT.- Hamond C., Martins G., Loureiro A.P., Bremont S., Medeiros M.A., Bourhy P. & Lilenbaum W. 2015. First isolation and characterization of Leptospira interrogans serogroup Australis from swine in Brazil. [Primeiro isolamento e caracterização da Leptospira interrogans sorogrupo Australis de suíno no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(1):6-8. Laboratório de Bacteriologia Veterinária, Instituto Biomédico, Universidade Federal Fluminense, Rua Hernani de Melo 101, Niteroi, RJ 24210-030, Brazil. E-mail: mipwalt@vm.uff.br The purpose of this study was to report the first recovery and characterization of Leptospira interrogans (serogroup Australis) from urine of swine in Brazil. The isolate was studied by serogrouping, MLVA, PGFE, and partial sequencing of rrs and secY. It was serogrouped as serogroup Australis, probably serovar Bratislava (titre 1,600), and sequenced as Leptospira interrogans. The MLVA and PGFE profiles also suggested the isolate as serovar Bratislava, since they were indistinguishable from reference strains Balico and Jez Bratislava. This is the first Leptospira interrogans serogroup Australis isolate, probably serovar Bratislava, obtained in Brazil.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Hamond C., Martins G., Loureiro A.P., Bremont S., Medeiros M.A., Bourhy P. & Lilenbaum W. 2015. First isolation and characterization of Leptospira interrogans serogroup Australis from swine in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(1):6-8. Laboratório de Bacteriologia Veterinária, Instituto Biomédico, Universidade Federal Fluminense, Rua Hernani de Melo 101, Niteroi, RJ 24210-030, Brazil. E-mail: mipwalt@vm.uff.br


#22 - Isolation and culture of neurons and neurospheres from chicken brain cortex, 33(Supl.1):45-50

Abstract in English:

ABSTRACT.- Crepaldi C.R., Merighe G.K.F., Laure H.J., Rosa J.C., Meirelles F.V. & Cerqueira César M. 2013. [Isolation and culture of neurons and neurospheres from chicken brain cortex.] Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(Supl.1):45-50. Laboratório de Neurociência e Proteômica, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-mail: mccesar@usp.br Cell culture methods are used for studies of protein interactions in neural cells, helping to detect the interactome of proteins linked to generation of central nervous system diseases. For this reason, neural cells and neurospheres isolated from cortical chicken brain are a current model for studies of neurological diseases, such as epilepsy. Chicken brain has key characteristics on its proteome, with a differential expression of proteins linked to energy metabolism, some of them (VDAC 1 and VDAC 2) play an important role in understanding mechanism of refractory epilepsy. Using the methods described, we found neurospheres, in which cells grow in structures with the ideal diameter of 100-200µm within seven days after isolation. Neurospheres differentiation was obtained after adhesion of these cells to surfaces coated with poly-D-Lysine, detected by migration of fibers inside them. Unlike neurospheres, neurons extended neurites after 11 days of isolation. Here we describe a method to isolate and culture neurons and neurospheres from chicken cerebral cortex. Such “in vitro” model can be utilized on studies of neuronal protein differential expression and interaction. Cultures of isolated neurons represent an accessible model on studies of apoptosis and channel blockers of key proteins linked to brain metabolism.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Crepaldi C.R., Merighe G.K.F., Laure H.J., Rosa J.C., Meirelles F.V. & Cerqueira César M. 2013. [Isolation and culture of neurons and neurospheres from chicken brain cortex.] Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(Supl.1):45-50. Laboratório de Neurociência e Proteômica, Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Av. Duque de Caxias Norte 225, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-mail: mccesar@usp.br Métodos de cultivo celular são convenientes na realização de análises funcionais de alterações/interações protéicas das células neuronais, auxiliando a decifrar o interactoma de proteínas chaves na neurogênese de doenças do Sistema Nervoso Central. Por esse motivo, culturas de neurônios e neuroesferas isolados do córtex cerebral aviar representam um modelo acessível para o estudo de diversas doenças neurológicas, tal como a epilepsia. A espécie aviar apresenta peculiaridades em seu proteoma neuronal, visto a presença de uma expressão diferenciada de proteínas chaves no metabolismo energético cerebral, algumas destas (VDAC1 e VDAC2) desempenham papel importante na compreensão do mecanismo da epilepsia refratária. A metodologia estabelecida no presente estudo obteve cultivo de neuroeferas, onde as células cresceram tipicamente em aglomerados atingindo, dentro de 7 dias, o diâmetro ideal de 100-200 µm. A diferenciação celular das neuroesferas foi obtida após a aderência destas às placas tratadas com poli-D-lisina, evidenciada pela migração de fibras do interior da neuroesfera. Ao contrário das neuroesferas, os neurônios em cultivo extenderam seus neuritos após 11 dias de isolamento. Tal modelo in vitro pode ser utilizado com sucesso na identificação das variáveis neuroproteômicas, propiciando uma avaliação global das alterações dinâmicas e suas interações protéicas. Tal modelo pode ter aplicações em estudos dos efeitos de indutores da morte celular e bloqueadores de canais de membrana mitocondriais em proteínas chaves do metabolismo energético cerebral.


#23 - Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells, 33(9):1151-1154

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho A.M., Yamada A.L.M., Martins J.R.B., Maia L., Golim M.A., Deffune E., Hussni C.A. & Alves A.L.G. 2013. Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(9):1151-1154. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: anaalves@fmvz.unesp.br The objective of the study was to isolate, cultivate and characterize equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells (PbMSCs). Peripheral blood was collected, followed by the isolation of mononuclear cells using density gradient reagents, and the cultivation of adherent cells. Monoclonal mouse anti-horse CD13, mouse anti-horse CD44, and mouse anti-rat CD90 antibodies were used for the immunophenotypic characterization of the surface of the PbMSCs. These cells were also cultured in specific media for adipogenic and chondrogenic differentiation. There was no expression of the CD13 marker, but CD44 and CD90 were expressed in all of the passages tested. After 14 days of cell differentiation into adipocytes, lipid droplets were observed upon Oil Red O (ORO) staining. Twenty-one days after chondrogenic differentiation, the cells were stained with Alcian Blue. Although the technique for the isolation of these cells requires improvement, the present study demonstrates the partial characterization of PbMSCs, classifying them as a promising type of progenitor cells for use in equine cell therapy.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho A.M., Yamada A.L.M., Martins J.R.B., Maia L., Golim M.A., Deffune E., Hussni C.A. & Alves A.L.G. 2013. Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells. [Isolamento e caracterização das células mesenquimais multipotentes estromais derivadas do sangue periférico equino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(9):1151-1154. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: anaalves@fmvz.unesp.br O objetivo deste estudo foi isolar, cultivar e caracterizar as células mesenquimais multipotentes estromais derivadas do sangue periférico (SpCTMs) equino. O sangue periférico foi coletado, seguido do isolamento das células mononucleadas utilizando o reagente de gradiente de densidade e o cultivo das células aderentes. Os anticorpos monoclonais mouse anti-horse CD13, mouse anti-horse CD44 e mouse anti-rat CD90 foram utilizados para a caracterização imunofenotípica da superfície das SpCTMs. Estas células também foram cultivadas utilizando meio de cultura específico para a diferenciação adipogênica e condrogênica. Não houve expressão do marcador CD13, mas os marcadores CD44 e CD90 foram expressos em todas as passagens testadas. Após 14 dias da diferenciação das células em adipócitos, gotículas de lipídeos foram observados através da coloração com Oil Red O. Vinte e um dias após a diferenciação condrogênica, as células foram coradas com o Alcian Blue. Embora a técnica de isolamento destas células necessite ser otimizada, o presente estudo demonstra a caracterização parcial das SpCTMs, classificando-as como um tipo de células progenitoras promissoras para o uso na terapia celular em equinos.


#24 - Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages, 33(4):535-542

Abstract in English:

ABSTRACT.- De Vita B., Campos L.L., Listoni A.J., Maia L., Sudano M.J., Curcio B.R., Landim-Alvarenga F.C. & Prestes N.C. 2013. [Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages.] Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):535-542. Departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: bruddev@gmail.com The interest in stem cells derived from fetal annexes of many species has exponentially increased during the last decades, because they are adult stem cell sources with potential of differentiation in several cell lineages; which present little or no immunogenicity and are an alternative with great importance for storage cell banks. Despite the rising interest, studies for the equine species are still rare. The aim of this study was to isolate, characterize and differentiate mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from initial, middle and late third of gestation (AF-MSCs), and compare their results. Twenty three samples from equine amniotic fluid were evaluated by morphological, immunocytochemical and immunophenotypical (Flow cytometer) assays and osteogenic, adipogenic and chondrogenic in vitro differentiation. All samples demonstrated plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The immunocytochemical assay demonstrated cells from all the studied groups were positive for CD44, PCNA and vimentin and negative for cytokeratin and Oct-4. Flow cytometry demonstrated expression of CD44 and CD90 and no expression of CD34, where CD44 and CD90 markers presented decreasing pattern of expression in relation to the gestational development. All samples collected from all gestational phases were capable to differentiate in osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages. Thus, cells obtained from equine amniotic fluid presented morphological and immunophenotypical characteristics and potential of differentiation typical of MSCs showing that the collection can be performed at any stage of pregnancy. However, more studies should be performed about the expression of pluripotent markers as Oct-4 and the differentiation potential for extra mesodermal lineages prior demonstrated in the literature.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- De Vita B., Campos L.L., Listoni A.J., Maia L., Sudano M.J., Curcio B.R., Landim-Alvarenga F.C. & Prestes N.C. 2013. [Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages.] Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(4):535-542. Departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: bruddev@gmail.com O interesse nas pesquisas com células-tronco derivadas de anexos fetais de diversas espécies cresceu exponencialmente nas últimas décadas em virtude de serem fontes de células-tronco adultas com potencial de diferenciação em diversas linhagens celulares que apresentam pouca ou nenhuma imunogenicidade, apresentando-se assim como alternativa de grande importância para a formação de bancos celulares. Apesar do crescente interesse, os estudos para espécie equina ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e diferenciar células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico equino obtidas do terço inicial, médio e final da gestação (LA-CTMs), comparando suas características. Foram colhidas 23 amostras de líquido amniótico as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro. Todas as amostras demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico as células de todos os grupos foram imunomarcadas para CD44, PCNA e vimentina com ausência de marcação para citoqueratina e Oct-4. Na citometria de fluxo observou-se a expressão de CD44 e CD90 e ausência de expressão de CD34, sendo que os marcadores CD44 e CD90 mostraram padrão de expressão decrescente em relação ao desenvolvimento gestacional. As amostras obtidas de todas as fases da gestação foram capazes de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Portanto, as células obtidas do líquido amniótico apresentaram características morfológicas, imunofenotípicas e potencial de diferenciação típicos das CTMs, demonstrando que a colheita pode ser realizada em qualquer fase gestacional. No entanto, mais pesquisas devem ser realizadas principalmente quanto à expressão de marcadores de pluripotencialidade (como o Oct-4) e ao seu potencial de diferenciação em linhagens extra mesodermais já relatados na literatura.


#25 - Leptospira spp. isolation and molecular detection in Brazilian slaughtered sheep flocks, 32(3):194-198

Abstract in English:

ABSTRACT.- Da Silva R.C., Costa V.M., Shimabukuro F.H., Richini-Pereira V.B., Menozzi B.D. & Langoni H. 2012. [Leptospira spp. isolation and molecular detection in Brazilian slaughtered sheep flocks.] Pesquisa Veterinária Brasileira 32(3):194-198. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: silva_rcd@yahoo.com.br Leptospirosis is a worldwide anthropozoonosis that infects livestock, including sheep as the carriers to other animals and humans. The present study aimed to determine the prevalence of Leptospira spp. in sheep from two slaughterhouses in the state of São Paulo, Brazil and its association with epidemiological variables. Serum samples from 182 sheep were evaluated for Leptospira spp. antibodies by microscopic agglutination test (MAT). Results indicated 34/182 (18.68%; CI95% 13.70-24.98%) positive serum samples, mainly to the serovar Copenhageni (17/34; 50%; CI95% 33.99-66.01%). Bacterial growth in the Fletcher medium was detected for 13/34 (38.24%; CI95% 23.87-55.08%) animals, and confirmed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequencing for only two kidney samples from two animals. Thus, treatment and vaccination of sheep, besides rodent control, can be useful to prevent the infection in the studied region since sheep are important Leptospira spp. carriers, and its transmission to slaughterhouse workers is mainly through the manipulation of visceral tissues.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Da Silva R.C., Costa V.M., Shimabukuro F.H., Richini-Pereira V.B., Menozzi B.D. & Langoni H. 2012. [Leptospira spp. isolation and molecular detection in Brazilian slaughtered sheep flocks.] Pesquisa Veterinária Brasileira 32(3):194-198. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: silva_rcd@yahoo.com.br [Isolamento e detecção molecular de Leptospira spp. em ovinos brasileiros abatidos.] A leptospirose é uma antropozoonose mundialmente distribuída que infecta animais de produção, incluindo as ovelhas como carreadores para outros animais e o homem. O presente estudo objetivou determinar a prevalência de Leptospira spp. em ovinos de dois abatedouros do estado de São Paulo e sua associação com algumas variáveis epidemiológicas estudadas. Amostras de soro de 182 ovinos foram pesquisadas para a presença de anticorpos para Leptospira spp. pela soroaglutinação microscópica (SAM). Os resultados indicaram 34/182 (18,68%; IC95% 13,70-24,98%) amostras positivas, principalmente para o sorovar Copenhageni (17/34; 50%; IC95% 33,99-66,01%). Crescimento bacteriano no meio de Fletcher foi observado em amostras de 13/34 (38,24%; CI95% 23.87-55.08%) animais, e confirmados pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) e seqüenciamento para somente duas amostras renais de dois animais. Assim, o tratamento e vacinação dos ovinos, além do controle de roedores, pode ser útil na prevenção da infecção na região estudada, visto que os ovinos são importantes carreadores de Leptospira spp. para o homem, e sua transmissão aos trabalhadores de abatedouros ocorre principalmente pela manipulação das vísceras.


#26 - Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil, 31(9):761-767

Abstract in English:

ABSTRACT.- Schaefer R., Zanella J.R.C., Brentano L., Vincent A.L., Ritterbusch G.A., Silveira S., Caron L. & Mores N. 2011. Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(9):761-767. Embrapa Swine and Poultry Research Center, BR153, Km110, Vila Tamanduá, Concórdia, SC 89700-000, Brazil. E-mail: rejane@cnpsa.embrapa.br Influenza A virus (IAV) infections are endemic in pork producing countries around the world. The emergence of the pandemic 2009 human H1N1 influenza A virus (pH1N1) raised questions about the occurrence of this virus in Brazilian swine population. During a 2009-2010 swine influenza virus research project at Embrapa Swine and Poultry (CNPSA), an outbreak of a highly transmissible H1N1 influenza A virus disease was detected in a pig herd in Santa Catarina State, Brazil. The virus caused a mild disease in growing pigs and sows without mortality. Three clinically affected piglets were euthanized. Gross lesions included mild to moderate consolidation of cranioventral areas of the lung. Microscopically, the lesions were characterized by necrotizing obliterative bronchiolitis and bronchointerstitial pneumonia. Immunohistochemistry using a monoclonal antibody against type A influenza virus nucleoprotein revealed positive staining in the nuclei of the bronchiolar epithelial cells. Lung tissue from three piglets and nasal swabs from five sows and four piglets were positive for influenza A by RT-PCR. Influenza virus was isolated from one lung, later confirmed by the hemagglutination test (HA titer 1:128) and RT-PCR. Sequence analyses of Hemmaglutinin (HA) and Matrix (M) genes revealed that the virus was consistent with the pandemic (A/H1N1) 2009 influenza virus strain that circulated in humans. This is the first report of an outbreak of pandemic A/H1N1 influenza virus in pigs in Brazil.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Schaefer R., Zanella J.R.C., Brentano L., Vincent A.L., Ritterbusch G.A., Silveira S., Caron L. & Mores N. 2011. Isolation and characterization of a pandemic H1N1 influenza virus in pigs in Brazil. [Isolamento e caracterização do vírus da influenza pandêmico H1N1 em suínos no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(9):761-767. Embrapa Swine and Poultry Research Center, BR153, Km110, Vila Tamanduá, Concórdia, SC 89700-000, Brazil. E-mail: rejane@cnpsa.embrapa.br A infecção causada pelo vírus Influenza A (IAV) é endêmica em suínos no mundo inteiro. O surgimento da pandemia de influenza humana pelo vírus A/H1N1 (pH1N1) em 2009 levantou dúvidas sobre a ocorrência deste vírus em suínos no Brasil. Durante o desenvolvimento de um projeto de pesquisa do vírus de influenza suína em 2009-2010, na Embrapa Suínos e Aves (CNPSA), foi detectado em um rebanho de suínos em Santa Catarina, Brasil, um surto de influenza altamente transmissível causado pelo subtipo viral H1N1. Este vírus causou uma doença leve em suínos em crescimento e em fêmeas adultas, sem mortalidade. Tres leitões clinicamente afetados foram eutanasiados. As lesões macroscópicas incluiam consolidação leve a moderada das áreas cranioventrais do pulmão. Microscopicamente, as lesões foram caracterizadas por bronquiolite necrosante obliterativa e pneumonia broncointersticial. A imunohistoquímica, utilizando um anticorpo monoclonal contra a nucleoproteína do vírus influenza A, revelou marcação positiva no núcleo das células epiteliais bronquiolares. O tecido pulmonar de três leitões e os suabes nasais de cinco fêmeas e quatro leitões foram positivos para influenza A pela RT-PCR. O vírus influenza foi isolado de um pulmão, mais tarde sendo confirmado pelo teste de hemaglutinação (título HA 1:128) e por RT-PCR. A análise das seqüências de nucleotídeos dos genes da hemaglutinina (HA) e proteína da matriz (M) revelou que o vírus isolado foi consistente com o vírus pandêmico A/H1N1/2009 que circulou em humanos no mesmo período. Este é o primeiro relato de um surto de influenza causado pelo vírus pandêmico A/H1N1 em suínos no Brasil.


#27 - Comparação de duas técnicas de isolamento de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em amostras de fezes de ovinos com suspeita clínica de paratuberculose, p.415-420

Abstract in English:

ABSTRACT.- Coelho A.C., Pinto M.L., Coelho A.M. & Rodrigues J. 2009. [Comparison of two techniques of isolation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in faecal samples of ovine with clinical suspicion of paratuberculosis.] Comparação de duas técnicas de isolamento de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em amostras de fezes de ovinos com suspeita clínica de paratuberculose. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(5):415-420. Departamento de Ciências Veterinárias, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Quinta de Prados, 5001-801 Vila Real, Portugal. E-mail: accoelho@utad.pt Paratuberculosis is a chronic enteric disease of ruminants caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Culture of bacteria from faeces and tissues samples constitutes one of the most effective methods of confirming the diagnosis of para-tuberculosis and the only method available to obtain strains of mycobacteria. However, this method is less sensitive and requires months of incubation before colony growth occurs. In this study, culture method was used on sheep faeces to diagnose paratuber-culosis in animals with compatible signs of the disease. A comparison of two culture media used to isolation was also investigated. Culture was positive in 2.0% of faecal samples. Isolation was obtained using Löwenstein Jensen® with mycobactin® J, and the Middlebrook® 7H11 with OADC®. The Löwenstein Jensen® with mycobactin® J was that provided highest amount of isolations. The percentages of isolation in each culture media were 2.0% (6/300) to Löwenstein Jensen® with micobactina J, and 1.0% (3/300) to Middlebrook® 7H11/OADC. The three positive samples in Middlebrook® 7H11/OADC were also positive in Löwenstein Jensen® with micobactina J. In the Middlebrook® 7H11/OADC alone there was no sample growth. The results of this study suggest that culture media of Löwenstein-Jensen® with micobactina® J is more effective for the isolation of sheep strains in Portugal.

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Coelho A.C., Pinto M.L., Coelho A.M. & Rodrigues J. 2009. [Comparison of two techniques of isolation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in faecal samples of ovine with clinical suspicion of paratuberculosis.] Comparação de duas técnicas de isolamento de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em amostras de fezes de ovinos com suspeita clínica de paratuberculose. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(5):415-420. Departamento de Ciências Veterinárias, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Quinta de Prados, 5001-801 Vila Real, Portugal. E-mail: accoelho@utad.pt Paratuberculosis is a chronic enteric disease of ruminants caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Culture of bacteria from faeces and tissues samples constitutes one of the most effective methods of confirming the diagnosis of para-tuberculosis and the only method available to obtain strains of mycobacteria. However, this method is less sensitive and requires months of incubation before colony growth occurs. In this study, culture method was used on sheep faeces to diagnose paratuber-culosis in animals with compatible signs of the disease. A comparison of two culture media used to isolation was also investigated. Culture was positive in 2.0% of faecal samples. Isolation was obtained using Löwenstein Jensen® with mycobactin® J, and the Middlebrook® 7H11 with OADC®. The Löwenstein Jensen® with mycobactin® J was that provided highest amount of isolations. The percentages of isolation in each culture media were 2.0% (6/300) to Löwenstein Jensen® with micobactina J, and 1.0% (3/300) to Middlebrook® 7H11/OADC. The three positive samples in Middlebrook® 7H11/OADC were also positive in Löwenstein Jensen® with micobactina J. In the Middlebrook® 7H11/OADC alone there was no sample growth. The results of this study suggest that culture media of Löwenstein-Jensen® with micobactina® J is more effective for the isolation of sheep strains in Portugal.


#28 - Isolamento de Salmonella sp e Staphylococcus aureus no processo do abate suíno como subsídio ao sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle - APPCC

Abstract in English:

Lima E.S.C., Pinto P.S.A., Santos J.L., Vanetti M.C.D., Bevilacqua P.D., Almeida L.P., Pinto M.S. & Dias F.S. 2004. [Isolation of Salmonella sp and Staphylococcus aureus at swine slaughtering as subsidy for HACCP, the Hazard Analysis and Critical Control Point system.] Isolamento de Salmonella sp e Staphylococcus aureus no processo do abate suíno como subsídio ao sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle - APPCC. Pesquisa Veterinária Brasileira 24(4):185-190. Depto Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, 36571-000 Viçosa, Minas Gerais, Brazil. E-mail: pintopsa@ufv.br This study was done to evaluate the superficial contamination of swine carcasses by Salmonella sp and Staphylococcus aureus, the identification of microbiological hazards in different segments of the processing line, and critical control points (CCPs), through the quantification of risks. A total of 120 surface swabbing carcasses were collected in a slaughterhouse: after the scalding/dehairing (point A), before evisceration (B), after evisceration and splitting (C), and after 24 hours of refrigeration (D). Salmonella sp and S. aureus were isolated from 14 (11.7%) carcasses. No statistical difference between the points studied was observed. The number of S. aureus isolated was between 1.2 and 1.5 log UFC/cm2. It was concluded that the risks observed were the same for both microorganisms.

Abstract in Portuguese:

Lima E.S.C., Pinto P.S.A., Santos J.L., Vanetti M.C.D., Bevilacqua P.D., Almeida L.P., Pinto M.S. & Dias F.S. 2004. [Isolation of Salmonella sp and Staphylococcus aureus at swine slaughtering as subsidy for HACCP, the Hazard Analysis and Critical Control Point system.] Isolamento de Salmonella sp e Staphylococcus aureus no processo do abate suíno como subsídio ao sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle - APPCC. Pesquisa Veterinária Brasileira 24(4):185-190. Depto Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, 36571-000 Viçosa, Minas Gerais, Brazil. E-mail: pintopsa@ufv.br This study was done to evaluate the superficial contamination of swine carcasses by Salmonella sp and Staphylococcus aureus, the identification of microbiological hazards in different segments of the processing line, and critical control points (CCPs), through the quantification of risks. A total of 120 surface swabbing carcasses were collected in a slaughterhouse: after the scalding/dehairing (point A), before evisceration (B), after evisceration and splitting (C), and after 24 hours of refrigeration (D). Salmonella sp and S. aureus were isolated from 14 (11.7%) carcasses. No statistical difference between the points studied was observed. The number of S. aureus isolated was between 1.2 and 1.5 log UFC/cm2. It was concluded that the risks observed were the same for both microorganisms.


#29 - Serotyping of Streptococcus suis strains isolated from pigs in the States of São Paulo, Minas Gerais e Paraná, Brazil, 22(1):1-5

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pagnani K.J.R., Pestana de Castro A.F., Gottschalk M., Silveira, W.D. & Nakazato G. 2002. [Serotyping of Streptococcus suis strains isolated from pigs in the States of São Paulo, Minas Gerais e Paraná, Brazil.] Sorotipagem de amostras de Streptococcus suis isolados de suínos em granjas dos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. Pesquisa Veterinária Brasileira 22(1):1-5. Depto Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, SP 13081-970, Brazil. Streptococcus suis infection in swine is common in all countries where hog production is well developed. This infection has been associated with bronchopneumonia, meningitis, arthritis, pericarditis, myocarditis, endocarditis, fibrinous polyserositis, septicaemia, rhinitis, and abortion. Streptococcus suis has also been described as a pathogen for ruminants and humans. In Brazil there are severa! clinical evidences about the existence of S. suis disease in pigs affecting more than 50% of farms in States of São Paulo, Minas Gerais and Paraná. In the present research 51 strains of S. suis isolated from piggeries of the States of São Paulo, Minas Gerais and Paraná were collected from different pathologies such as septicaemia, meningitis, arthritis and pneumonia and been recovered either in pure culture oras the predominant organism from porcine tissues. Culture of specimens was carried out on 5% bovine blood agar plates incubated at 37ºC for 24 hr: For the biochemical identification the a-hemolytic colonies of all capsulated isolates were submitted to various conventional tests, such as hydrolysis of arginine, Voges-Proskauer Test, and production of acid from various carbohydrates (inulin, salicin, trehalose, lactose, sucrose, sorbitol, mannitol and glycerol). The strains were also tested for their ability to grow in the presence of 6,5% NaCI and for the amylase production. In addition strains were tested by Api Strep 20 to confirm the identification of S.suis. For capsular typing only capsulated strains were typed by co-agglutination test, using antisera raised in rabbits against all reference strains from serotypes 1 to 8. Strains belonging to other serotypes were also typed. The co-agglutination was used for serotyping and the capsular reaction test was carried out for mieasuring the potency of the prepared antisera. From the total of 51 examined strains the following results were obtained, with regard to serotyping: 30 (58,8%) were serotype 2, 11 (21,6%) were serotype 3, seven (13, 72%) were serotype 7, two (3,92%) were serotype 1 and one strain belonged to serotype 14 (1,96%). As far as we are concerned, this is the first report on the isolation of a large number of S. suis strains in Brazil, from cases of illness caused by this bacterium among piglets. Also it was carried out serotyping of the isolates, showíng a high prevalence of serotype 2, as compared to other known serotypes of S. suis.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pagnani K.J.R., Pestana de Castro A.F., Gottschalk M., Silveira, W.D. & Nakazato G. 2002. [Serotyping of Streptococcus suis strains isolated from pigs in the States of São Paulo, Minas Gerais e Paraná, Brazil.] Sorotipagem de amostras de Streptococcus suis isolados de suínos em granjas dos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Paraná. Pesquisa Veterinária Brasileira 22(1):1-5. Depto Microbiologia e Imunologia, Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), Campinas, SP 13081-970, Brazil. Infecções causadas por Streptococcus suis são muito comuns em países onde a indústria de carne suína é desenvolvida. Estas infecções estão relacionadas a casos clínicos de broncopneumonia, meningite, artrite, pericardite, miocardite, endocardite, poliserosite fibrinosa, septicemia, rinite e aborto. Esta bactéria também foi descrita como patógeno de ruminantes e humanos. No Brasil há evidências clínicas da existência de processos infecciosos causados por S. suis afetando mais de 50% das granjas em Estados como São Paulo, Minas Gerais e Paraná. No presente estudo foram isoladas 51 amostras de 5. suis de granjas do Estados acima referidos, coletadas de diferentes casos clínicos como septicemia, meningite, artrite e pneumonia, tendo sido obtidas ou em cultura pura ou como patógeno de maior predominância nos tecidos de suínos. Este material foi semeado em Columbia ágar sangue adicionado de 5% de sangue bovino e incubado a 37ºC por 24 horas. Para a identificação bioquímica as colônias que apresentavam a-hemólise, bem como as amostras padrão, foram submetidas a testes convencionais para a confirmação da espécie 5. suis, tais como: hidrólise de arginina, teste de Voges-Proskaue1: e produção de ácido a partir de vários carboidratos (inulina, salicina, trealose, lactose, sacarose, sorbitol, manitol e glicerol). As amostras também foram testadas para habilidade de crescimento em meio de TSA com 6,5% de NaCI e para a produção de amilase. Todas as amostras que fizeram parte desta pesquisa foram testadas pelo sistema Api 20 Strep para confirmação dos resultados obtidos nos testes convencionais. Para a sorotipagem foram produzidos antissoros de 1 a 8. Outras amostras não pertencentes a estes sorotipos também foram sorotipadas. O antissoro produzido em coelhos foi titulado pelo teste de aglutinação em tubo com 2-mercaptoetanol e pelo teste de reação capsular e, quando adequados, foram usados no teste de co-aglutinação, para a sorotipagem das amostras de 5. suis. A sorotipagem das 51 amostras isoladas mostraram os seguintes resultados: 30 (58,8%) foram classificadas corno sorotipo 2, 11 (21,6%) das amostras como sorotipo 3, sete (13,72%) como sorotipo 7, duas (3,92%) como sorotipo 1 e uma amostra como pertencente ao sorotipo 14 (1,96%). Este é o primeiro relato do isolamento de um grande número de amostras de 5. S. suis no Brasil, de casos típicos de processos infecciosos causados por esta bactéria. Também foi realizada a sorotipagem dos isolados, mostrando uma alta prevalência do sorotipo 2, quando comparada com a dos demais sorotipos encontrados.


#30 - Evaluation of the sensitivity of bulk tank milk cultures for the isolation of contagious bovine mastitis pathogens, 18(1):39-44

Abstract in English:

ABSTRACT.- Brito M.A.V.P., Brito J.R.F., Souza H.M. & Vargas O.L. 1998. [Evaluation of the sensitivity of bulk tank milk cultures for the isolation of contagious bovine mastitis pathogens.] Avaliação da sensibilidade da cultura de leite do tanque para isolamento de agentes contagiosos da mastite bovina. Pesquisa Veterinária Brasileira 18(1):39-44. Embrapa-Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Leite, Juiz de Fora, MG 36038-330, Brazil. Samples of bulk tank milk from 33 herds were collected at the dairy processing plant and cultured, as a means of detecting specific (contagious) bovine mastitis pathogens. Somatic cell counts (SCC) were made on a Fossomatic 90. Two and three weekly consecutive samples were obtained from 13 and 12 herds, respectively. Only one sample was examined from eight herds. Three daily consecutive samples of bulk milk and individual quarter samples from all lactating cows from four herds (A, B, C and D) were also examined. Milk from individual quarters were cultured on blood agar while tank milk samples were cultured on TKT, Mannitol Salt, MacConkey agars and Sabouraud containing chloramphenicol. Staphylococcus aureus was recovered from 26 of the 33 herds sampled in the dairy processing plant. Nine of these samples also contained Streptococcus agalactiae. Nine herds had SCC above 500,000 ml1 The remaining 23 herds had SCC levels below 400,000 ml1 S. aureus and S. agalactiae were isolated from five of the nine herds with high SCC, S. agalactiae from one and S. aureus from three. Six herds had SSC below 200,000 ml1 S. aureus and S. agalactiae were isolated from one, S. aureus from three, while the other two were negative for both pathogens. The results of herds A, B, C and D sampled at the farms showed that S. aureus was isolated from 1.8%, 19.2%, 17.0% and 8.4% of the animals and 0.9%, 5.9%, 5.4% and 2.2% of the mammary quarters, respectively. S. agalactiae was isolated from herds A, C and D. Within these herds the percentages of isolation were, respectively, 1.8%, 10.6% and 8.4% for the cows and 0.46%, 3.8% and 3.7% for the mammary quarters. S. aureus was recovered from all three bulk tank cultures from herds A, B and D. Only the third sample from herd C was positive for S. aureus. S. agalactiae was recovered from all samples collected from herd D, two samples from herd C and one sample from herd A. Coliforms were isolated from all tank samples from herds A, B, C and D and from all but one sample collected in the processing plant. Yeasts were recovered from 16 herds sampled at the processing plant and from all tank samples from herds A, B, C, and D. Neither coliforms or yeasts were isolated from the individual animals of herds A, B, C and D. These findings indicate that the milk was contaminated during or after milking, probably due to deficient hygiene and cleaning procedures. The analysis of the bulk tank milk cultures showed that the test was sensitive enough to detect contagious mastitis pathogens. The sensitivity of the test increased when more than two consecutive samples were examined.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Brito M.A.V.P., Brito J.R.F., Souza H.M. & Vargas O.L. 1998. [Evaluation of the sensitivity of bulk tank milk cultures for the isolation of contagious bovine mastitis pathogens.] Avaliação da sensibilidade da cultura de leite do tanque para isolamento de agentes contagiosos da mastite bovina. Pesquisa Veterinária Brasileira 18(1):39-44. Embrapa-Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Leite, Juiz de Fora, MG 36038-330, Brazil. Amostras de leite total (leite do tanque) de 33 rebanhos foram coletadas na plataforma de recepção da indústria laticinista e cultivadas para detectar patógenos específicos (contagiosos) da mastite. Foi feita a contagem de células somáticas (CCS) das amostras utilizando o equipamento Fossomatic 90. Em 13 e 12 rebanhos avaliaram-se duas e três amostras semanais consecutivas, respectivamente, e em oito avaliou-se apenas uma. Foram também examinadas três amostras diárias consecutivas do leite do tanque e amostras dos quartos mamários individuais, coletadas na própria fazenda, de todas as vacas em lactação de quatro rebanhos (A, B, C e D). As amostras de leite dos quartos mamários individuais foram cultivadas em ágar sangue e as amostras do tanque, em placas de TKT, Sal Manitol, MacConkey e Sabouraud contendo cloranfenicol. Dos 33 rebanhos cujas amostras foram obtidas na plataforma de recepção da indústria, isolou-se Staphylococcus aureus de 26, nove desses em associação com Streptococcus agalactiae e em três rebanhos isolou-se somente S. agalactiae. Nove rebanhos tiveram CCS acima de 500.000 ml1 e 21, abaixo de 400.000 ml1 Em cinco dos nove rebanhos com CCS acima de 500.000 m1-1 foram isolados S. aureus e S. agalactiae, em três, apenas S. aureus e em um, apenas S. agalactiae. Seis rebanhos apresentaram CCS abaixo de 200.000 ml·1; de um deles foram isolados S. aureus e S. agalactiae, de três, S. aureus e os outros dois foram negativos para estes dois patógenos. Os resultados encontrados nos quatro rebanhos cujas amostras foram coletadas na própria fazenda mostraram que S. aureus foi isolado nas seguintes porcentagens dos animais: 1,8%, 19,2%, 17,0% e 8,4% e dos quartos mamários: 0,9%, 5,9%, 5,4% e 2,2%, respectivamente, para os rebanhos A, B, C e D. S. agalactiae foi isolado dos rebanhos A, C e D. Nestes três rebanhos, as porcentagens de isolamento foram, respectivamente, 1,8%, 10,6% e 8,4% para as vacas e 0,46%, 3,8% e 3,7% para os quartos mamários. S. aureus foi isolado de todas três amostras do tanque dos rebanhos A, B e D. Somente a terceira amostra do rebanho C foi positiva para S. aureus. S agalactiae foi recuperado de todas as amostras do rebanho D, duas do rebanho C e de uma do rebanho A. Todas as amostras do tanque dos rebanhos A, B, C e D apresentaram contaminação com coliformes e somente uma das amostras coletadas na plataforma de recepção da indústria foi negativa para coliformes. Leveduras foram isoladas de 16 amostras coletadas na indústria e de todas amostras do tanque dos rebanhos A, B, C e D. Não foram isolados coliformes ou leveduras dos quartos mamários dos animais destes rebanhos, sugerindo que ocorreu contaminação do leite durante ou após a ordenha, provavelmente devido a deficiências nos processos de limpeza e higienização. A análise dos resultados das culturas do leite do tanque mostrou que o exame foi específico para detectar os patógenos contagiosos da mastite. A sensibilidade do teste aumentou quando se examinaram mais de duas amostras consecutivas.


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