PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Acosta-Dibarrat J., Tenorio-Gutiérrez V., Soriano-Vargas E., Talavera-Rojas M., Cal-Pereyra L., Montes de Oca-Jiménez R., Velázquez-Ordoñez V. & Tórtora-Pérez J. 2016. Distribution of lymphocytes, immunoglobulin-containing cells, macrophages, and dendritic cells in the accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):363-372. Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Km 15.5 Carretera Toluca-Atlacomulco, Toluca, ME 50100, México. E-mail: jpacosta00@hotmail.com The distribution of cells involved in the immune response in accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis was studied. Twelve one-year old rams were experimentally infected by intraurethral (IU) (n=4) and intraepididymal (IE) (n=4) route, and four control (CON) animals were used. The animals were slaughtered 35 days post-inoculation, samples were taken from accessory sex glands, and bacteriology and histopathology tests were performed. The presence of CD4, CD8 and TCRγδ (WC1) lymphocytes, CD45RO cells, macrophages (CD14), dendritic cells (CD1b), IgA-, IgG- and IgM-containing cells (IgCC) was determined. Animals of the IE group developed clinical epididymitis. No lesions were seen in rams of the IU group; two of the intraepididymal inoculated CON developed small lesions in the epididymis. A. seminis isolates were achieved from 6:16 (37.5%) accessory sex glands in the IE group, but not in the IU and CON groups. In the CON group, IgA- and IgM- containing cells predominated in the bulbourethral glands and the disseminated prostate, and they were scarce or null in the vesicles and ampullae. A significant increase of IgA-, IgG- and IgM- containing cells was confirmed in the seminal vesicles, the ampullae and the bulbourethral glands in the IE group. In the IE and IU groups, an increase in CD4, CD8, WC1, CD45RO and CD14 was evidenced in the vesicles and ampullae. CD1b dendritic cells were present in the ampullae and vesicles with inflammatory processes. A. seminis triggered a local immune response in the IE and IU groups. These results indicate a different pattern of infiltrating immune cells in the accessory sex glands of infected A. seminis rams.

• Accessory sex glands Actinobacillus seminis lymphocytes immunoglobulin-containing cells macrophages glândulas sexuais acessórias linfócitos células carreadoras de imunoglobulinas macrófagos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Acosta-Dibarrat J., Tenorio-Gutiérrez V., Soriano-Vargas E., Talavera-Rojas M., Cal-Pereyra L., Montes de Oca-Jiménez R., Velázquez-Ordoñez V. & Tórtora-Pérez J. 2016. Distribution of lymphocytes, immunoglobulin-containing cells, macrophages, and dendritic cells in the accessory sex glands of rams experimentally infected with Actinobacillus seminis. [Distribuição de linfócitos, células carreadoras de imunoglobulinas, macrófagos e células dendríticas em glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados experimentalmente com Actinobacillus seminis.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):363-372. Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Km 15.5 Carretera Toluca-Atlacomulco, Toluca, ME 50100, México. E-mail: jpacosta00@hotmail.com A distribuição das células envolvidas na resposta imune em glândulas sexuais acessórias de carneiros experimentalmente infectados com Actinobacillus seminis foi estudada. Doze carneiros de um ano de idade foram experimentalmente infectados via intrauretral (IU) (n=4) e via intraepididimal (IE) (n=4) e quatro animais controles (CON) foram utilizados. Os animais foram abatidos 35 dias após a inoculação, amostras foram retiradas das glândulas sexuais acessórias e testes bacteriológicos e histopatológicos foram realizados. A presença de linfócitos CD4, CD8 e TCRγδ (WC1), células CD45RO, macrófagos (CD14), células dendríticas (CD1b) e células  contendo IgA, IgG and IgM (IgCC) foi determinada. Os animais do grupo IE desenvolveram epididimite clínica. Não foram visualizadas lesões nos carneiros do grupo IU, dois dos CON inoculados intraepididimalmente desenvolveram pequenas lesões no epidídimo.  Isolados de A. seminis foram obtidos de 6:16 (37,5%) nas glândulas sexuais acessórias no grupo IE mas não nos grupos IU e CON. No grupo CON células contendo IgA and IgM predominaram nas glândulas bulbouretrais e na próstata e foram escassas ou ausentes nas vesículas e na ampola. Um incremento significativo de células contendo IgA, IgG and IgM foi confirmado nas vesículas seminais, na ampola e nas glândulas bulbouretrais no grupo IE. Nos grupos IE e IU foi evidenciado um aumento em CD4, CD8, WC1, CD45RO e CD14 nas vesículas e ampola. As células dendríticas CD1b estavam presentes na ampola e nas vesículas com processo inflamatório. A. seminis induziu uma resposta imune local nos grupos IE e IU. Estes resultados indicam um padrão diferente de células imunes infiltrantes nas glândulas sexuais acessórias de carneiros infectados por A. seminis.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rocha B.P., Reis M.O., Driemeier D., Cook D., Camargo L.M., Riet-Correa F., Evêncio-Neto J. & Mendonça F.S. 2016. [Liver biopsy as diagnostic method for poisoning by swainsonina-containing plants.] Biópsia hepática como método diagnóstico para intoxicação por plantas que contém swainsonina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):373-377. Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: fabio.mendonca@pq.cnpq.br With the aim to investigate the use of hepatic biopsies for the diagnosis of poisoning by swainsonine-containing plants, dry leaves of Ipomoea marcellia containing 0.02% of swainsonine were administered to goats. Group I, with six goats, ingested 4g/kg of dry plant (0.8mg of swainsonina/kg) daily until the observation of the first neurologic signs. Two goats that did not receive the plant were used as control (Group II). Hepatic biopsies with the Menghini needle were performed by the percutaneous technique at day zero and at weekly intervals after the start of the administration of I. marcellia. Biopsy samples were fixed in 10% formaline, processed routinely, and stained by hematoxilin-eosin and by lectins histochemistry. Hepatocellular vacuolization similar to those described in cases of lysosomal storage disease were identified in all goats of Group I from the seven day of plant consumption in the samples satained with hematoxylin-eosin. Using lectin histochemistry, consistent labellings were observed with Concanavalia ensiformis (Con-A) e Triticum vulgaris (WGA). It is concluded that routinely histological evaluation of liver biopsies can be used in the diagnosis of poisoning by swainsonine containing plants, even in goats without clinical signs, and lectin histochemistry which can be used as supplementary diagnostic method.

• Poisonous plants lysosomal storage disease swainsonina plant poisoning liver biopsy plantas tóxicas doença de depósito lisossomal swainsonina intoxicação por plantas biópsia hepática

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rocha B.P., Reis M.O., Driemeier D., Cook D., Camargo L.M., Riet-Correa F., Evêncio-Neto J. & Mendonça F.S. 2016. [Liver biopsy as diagnostic method for poisoning by swainsonina-containing plants.] Biópsia hepática como método diagnóstico para intoxicação por plantas que contém swainsonina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):373-377. Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: fabio.mendonca@pq.cnpq.br Neste trabalho objetivou-se avaliar a técnica de biópsia hepática como um teste de valor diagnóstico para intoxicações por plantas que contém swainsonina. Para isso, reproduziu-se experimentalmente a doença com as folhas secas de Ipomoea marcellia contendo 0,02% de swainsonina em caprinos. O Grupo I foi constituído por 6 caprinos que receberam a planta misturada a ração na dose de 4g/kg (0,8mg de swainsonina/kg) até a observação dos primeiros sinais clínicos neurológicos. Outros dois caprinos que não receberam a planta na dieta constituíram o grupo controle (Grupo II). Foram realizadas biópsias hepáticas pela técnica percutânea cega com agulha de Menghini, no dia zero e com intervalos semanais nos caprinos do experimento. As biópsias hepáticas foram fixadas em formol tamponado 10%, processadas rotineiramente, coradas pela hematoxilina-eosina e histoquímica de lectinas. Vacuolização hepatocelular similar àquelas descritas em caso de doença de depósito lisossomal foram identificadas em todos os caprinos do Grupo I no 7º dia de experimento nas amostras coradas pela hematoxilina-eosina. Em relação à histoquímica de lectinas, marcações consistentes foram obtidas com as lectinas Concanavalia ensiformis (Con-A) e Triticum vulgaris (WGA). Concluiu-se que a avaliação histológica rotineira de biópsias hepáticas pode ser usada no diagnóstico de intoxicações por plantas que contem swainsonina, mesmo em caprinos que não apresentam sinais clínicos, e que a histoquímica de lectinas pode ser usada como método diagnóstico complementar.

Abstract in English:

ABSTACT.- Pupin R.C., Melo G.K.A., Heckler R.F., Faccin T.C., Ítavo C.C.B.F., Fernandes C.E, Gomes D.C. & Lemos R.A.A. 2016. Identification of lamb flocks susceptible and resistant against Brachiaria poisoning. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):383-388. Laboratório de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Campo Grande, MS 79074-460, Brazil. E-mail: ricardo.lemos@ufms.br This study was designed to assess the influence of genetic resistance against brachiaria poisoning in sheep. Two groups of sheep, one identified as susceptible (formed by two ewes and one ram) and the other as resistant against brachiaria poisoning (formed by three ewes and one ram) were selected. Sheep considered susceptible were those that presented clinical signs of brachiaria poisoning at any time of their life; resistant sheep were those that even raised on Brachiaria spp. pastures, did not developed any sign of the poisoning during their life. The offspring of the two flocks (15 lambs from the sensitive flock and 9 lambs from the resistant flock) were placed into brachiaria pasture (initially Brachiaria decumbens and B. brizantha,and only B. decumbens after weaning) and followed up during two years (2013-2014). The determination of protodioscin levels in B. decumbens pasture was performed only in 2014 and revealed significant amounts of the toxic principle. Eleven lambs of the susceptible group were affected to some degree of brachiaria poisoning and six died; no lamb of the resistant group was affected. Clinical signs consisted of varying degrees of subcutaneous edema of the face and, erythema and loss of hair of the ears, crusts on the skin of ears, around the eyes and on planum nasale, scar deformation of the ears, and bilateral ocular discharge; affected lambs also sought for shadowy shelters and they were poor doers. Several sheep recovered from the condition and then relapsed. Necropsy findings in six lambs included pale mucous membranes, emaciation, dermatitis, scar deformation of the ears, large yellow livers with marked lobular pattern, and moderate infestation by Haemonchus contortus. Histologically the liver lesions were similar in all necropsied lambs but with varying degrees of severity; they were consistent with brachiaria poisoning and included architectural disruption of hepatocellular trabecula, clusters of foamy macrophages occasionally forming multinucleated giant cells, swollen and vacuolated hepatocytes, crystals or negative images of crystals in the biliary system, bilestasis, bile duct proliferation and lymphoplasmacytic infiltrate in portal triads. The skin lesions were those of photodermatitis and included epidermal necrosis, hyperkeratosis and dermal neutrophilic infiltrate. The results of this study allow to conclude that there is a genetic related resistance to brachiaria poisoning in sheep since the progeny of resistant sheep did not manifest the poisoning. The use of resistant flocks in brachiaria pastures is suggested as a valuable option for the prevention of brachiaria poisoning in sheep.

• Poisonous plants Brachiara spp. saponins genetic resistance plant poisoning plantas tóxicas saponinas resistência genética intoxicação por plantas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pupin R.C., Melo G.K.A., Heckler R.F., Faccin T.C., Ítavo C.C.B.F., Fernandes C.E, Gomes D.C. & Lemos R.A.A. 2016. Identification of lamb flocks susceptible and resistant against Brachiaria poisoning. [Identificação de rebanhos de cordeiros suscetíveis e resistentes a intoxicação por braquiária.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):383-388. Laboratório de Anatomia Patológica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Campo Grande, MS 79074-460, Brazil. E-mail: ricardo.lemos@ufms.br Este estudo avaliou a resistência genética na ocorrência de intoxicação por braquiária em ovinos. Foram selecionados dois grupos de ovinos, um identificado como suscetível (formado por duas ovelhas e um carneiro) e o outro como resistente (formado por três ovelhas e um carneiro). Foram considerados suscetíveis ovinos que apresentaram sinais de intoxicação por Brachiaria spp. em algum ponto de suas vidas e resistentes aqueles ovinos que, mesmo criados em pastagem de braquiária, nunca desenvolveram qualquer sinal da intoxicação. A progênie desses dois grupos (15 cordeiros do grupo suscetível e 9 no grupo resistente) foi colocada numa pastagem de braquiária (inicialmente Brachiaria decumbens e B. brizantha e, após o desmame, apenas B. decumbens) e acompanhada durante dois anos (2013-2014). A determinação dos níveis de protodioscina em B. decumbens foi realizada apenas em 2014 e foram encontradas quantidades significativas do princípio tóxico. Onze cordeiros do grupo suscetível foram afetados por algum grau de intoxicação por braquiária; nenhum cordeiro do grupo resistente foi afetado. Os sinais clínicos consistiam de graus variáveis de edema subcutâneo da face e eritema e alopecia da pele das orelhas, crostas na pele das orelhas e ao redor dos olhos e no plano nasal, retração cicatricial das orelhas, fotofobia e corrimento ocular bilateral. Três cordeiros apresentaram desenvolvimento retardado. Vários cordeiros se recuperaram da condição, mas posteriormente quando foram colocados na pastagem apresentaram recidivas. Achados de necropsia em seis cordeiros incluíam mucosas pálidas, pobre condição corporal, dermatite, deformação cicatricial das orelhas, fígado aumentado de volume, amarelo e com padrão lobular evidenciado e graus moderados de infestação por Haemonchus contortus. Histologicamente, as lesões hepáticas eram semelhantes em todos os cordeiros necropsiados, mas apresentavam vários graus de intensidade; eram consistentes com as lesões de intoxicação por braquiária e consistiam de desorganização da arquitetura trabecular dos hepatócitos, agregados de macrófagos espumosos ocasionalmente formando células gigantes multinucleadas, hepatócitos tumefeitos e vacuolizados, cristais ou imagem negativa de cristais no sistema biliar, bilestase, proliferação de ductos biliares e infiltrado linfoplasmocitário nas tríades portais. As lesões da pele eram de fotodermatite e incluíam necrose da epiderme, hiperqueratose e infiltrado neutrofílico na derme. Os resultados desse estudo permitem concluir que há uma resistência genética à intoxicação por braquiária em ovinos, uma vez que a progênie dos ovinos resistentes não manifestou a intoxicação. O uso de rebanhos resistentes em pastagens e braquiária é sugerido como uma valiosa opção para prevenir a intoxicação por braquiária em ovinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Machado L.S., Santos F.F., Santos L.M.M., Tortelly R., Pimentel J.C., Sesti L., Pereira V.L.A. & Nascimento E.R. 2016. Transmission, serologic and tissue responses in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum F strain (MG-F). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):401-404. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Pública, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal Fluminense, Rua Dr. Vital Brazil Filho 64, Vital Brazil, Niterói, RJ 24230-340, Brazil. E-mail: elmiro@vm.uff.br MG-F protects chickens from MG Mycoplasmosis and monitoring is done by serology (SAR and ELISA) and PCR. Histopathology is used to evaluate bird response to MG. This study evaluated MG-F profile vaccination in SPF chicken. This trial used 100 chickens, being 40 unvaccinated (G1), 40 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F ( Ceva Animal Health , São Paulo , SP , Brazil ) (G2) and 20 immunized by contact (G3) . Samples were obtained on the 8th, 12th, 15th, 18th, 20th and 24th week for SAR, ELISA and PCR. Fragments of trachea and air sac, for microscopy, were got after necropsies on the 15th and 24th week. Up to 12 weeks there was no significant difference among groups by SAR. SAR reactions appeared from the 15th week with these averages: G1 (1.7, 1.76 , 0.1, 0.15) , G2 (7.81, 7.65, 8.25, 6.29) and G3 (8.1, 8.5, 9.5, 6.16), while by ELISA it occurred after the 18th week with optical densities averages: G1 (0.19, 0.14, 0.16) , G2 (0.47, 0.45, 0.41) and G3 (0.55, 0.51, 0.51) . Positivity in G3 by PCR occurred seven weeks after exposure. At the 15th week the air sac score means were 0.20, 0.55, and 0.32 and 24th week were 0.15, 0.80 and 0.66 (p>0.05). For trachea, G2 (0.48) yielded higher score average than G1 (0.10) and G3 (0.00) on the 15th week. Changes in G3 were seen only at 24th week, being this average (1.00) significantly different (p<0,05) from G1 (0.08) and G2 (0.46). SAR and PCR detected MG-F in G3 earlier than ELISA. Higher tracheal changes for G2 and G3 as compared to G1 could be ascribed to MG-F vaccine infection.

• Mycoplasma gallisepticum F strain transmissibility serology Mycoplasma gallisepticum cepa F MG-F transmissão sorologia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Machado L.S., Santos F.F., Santos L.M.M., Tortelly R., Pimentel J.C., Sesti L., Pereira V.L.A. & Nascimento E.R. 2016. Transmission, serologic and tissue responses in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum F strain (MG-F). [Transmissão, resposta sorológica e tecidual de poedeiras vacinadas com Mycoplasma gallisepticum cepa F.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):401-404. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Pública, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal Fluminense, Rua Dr. Vital Brazil Filho 64, Vital Brazil, Niterói, RJ 24230-340, Brazil. E-mail: elmiro@vm.uff.br Mycoplasma gallisepticum cepa F (MG-F) é altamente utilizada em vacinação de poedeiras. MG-F confere bons níveis de proteção às galinhas, deslocando MG de campo ou diminuindo o número deles no trato respiratório. Soroaglutinação Rápida (SAR), ELISA e PCR são testes no monitoramento da micoplasmose, enquanto a histopatologia, mesmo não sendo rotineira, é usada para avaliar a resposta das aves à infecção por MG. O objetivo deste estudo foi avaliar a transmissibilidade, soroconversão e alterações teciduais de MG-F em galinhas. Um total de 100 galinhas SPF foi utilizado, sendo 40 delas não vacinadas (G1), 40 vacinadas na 8ª semana de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo/SP, Brasil) (G2) e 20 imunizadas por contato com aves do G2 (G3). Soros e suabes traqueais foram obtidos na 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª, 24ª semana para monitoramento por SAR, ELISA e PCR. Fragmentos de traqueia e saco aéreo, para microscopia, foram feitas após necropsias na 15ª e 24ª semana. Até a 12ª semana não houve diferença significativa entre os grupos pela SAR. Houve reação a SAR a partir da 15ª semana com as seguintes médias: G1 (1,7; 1,76; 0,1; 0,15), G2 (7,81; 7,65; 8,25; 6,29) e G3 (8,1; 8,5; 9,5; 6,16), enquanto por ELISA a soroconversão ocorreu a partir da 18ª semana com médias de densidades óticas de G1 (0,19; 0,14; 0,16), G2 (0,47; 0,45; 0,41) e G3 (0,55; 0,51; 0,51). Todas as aves do G3 apresentaram positividade pela PCR sete semanas após exposição. Não houve diferença significativa entre as medias dos escores de saco aéreo entre os grupos, na 15ª semana (0,20; 0,55; 0,32) e 24ª semana (0,15; 0,80 e 0,66). Em relação à traqueia, G2 apresentou média maior na 15ª semana (0,48) que G3 (0,00) e G1 (0,10). Alterações em G3 foram observadas somente na 24ª semana onde as médias foram de 0,08(G1); 0,46 (G2) e 1,00 (G3), havendo significância (p<0,05) entre G1 e G3. SAR e PCR foram capazes de detectar a transmissão de MG-F de forma precoce em relação ao ELISA. Em relação ao G1 (controle negativo) as reações teciduais para os grupos vacinados foram mais intensas na 24ª semana, o que tudo indica sendo resposta à vacinação.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moraes L.F., Takahira R.K., Golim M.A. & Baggio M.S. 2016. [Evaluation of hemostatic abnormalities and thromboembolic risk in dogs with IMHA.] Avaliação das alterações hemostáticas e do risco tromboembólico em cães com AHIM. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):405-411. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: liviafm@gmail.com Immune-mediated hemolytic anemia (IMHA) is the most common cause of hemolytic anemia and the most prevalent immune-mediated disease in dogs, which is classified in primary or secondary. IMHA has been associated with hypercoagulability state and thromboembolism has been referred as the most common complication. The purpose of this study was to correlate the possibility of hemostatic abnormalities and the thromboembolic risk in IMHA and in anemias of other etiologies. 76 dogs were selected, all exhibiting hematocrit lower than 20% and at least one clinical sign commonly associated with IMHA or breed predisposition. These dogs were tested for IMHA by flow cytometry. Hemostatic tests (platelet count, PT, APTT, TT, AT, PDF and D-dimer) as well as CBC, reticulocyte count, blood parasite search in peripheral blood smear, Ehrlichia sp. and leptospirosis tests were performed in all dogs. 59 dogs were positive for IMHA. The thromboembolic risk was characterized by the presence of three or more changes in the tests of the hemostatic profile. 74.6% cases of IMHA were attributed to infectious diseases and was mostly associated with Ehrlichia sp. (88.6%). 72.1% of dogs had thrombocytopenia and 57.6% had regenerative anemia with significantly higher values of metarubricyte and reticulocyte count. There were no significant changes between two anemic groups (positive and negative for IMHA). Anemic dogs had higher APTT mean value and lower AT and platelet counts mean values than the control group (p<0.05). 25 dogs with IMHA and seven dogs without IHMA had thromboembolic state. The specificity of PDF was lower (30.2%) than previous studies. The choice of the Ig class does not affect the diagnosis of IMHA. There were no correlation between the presence of antibodies bound to the RBC surface and the hemostatic tests, but there were a week correlation (p<0,05) between Ht(%) and APTT (r=-0.2621), AT (r=0.4297) and platelets count (r=0.5349) values. Anemia is associated with hemostatic abnormalities and thromboembolic risk, however the immune-mediated nature of the disease was not the determining factor for this condition. In part, these changes can be attributed to infection diseases seen in both groups (positive and negative for IMHA). The similar thromboembolic risk evidenced in both groups of anemic dogs does not exclude the relationship of immune-mediated involvement, but alert to the possibility of thromboembolism in anemic dogs with Ehrlichia sp. (negative for IHMA). Therefore, anemic dogs with clinical signs associated with thromboembolic risk should be evaluated for this complication, today poorly investigated in clinical routine. The high frequency of hemostatic abnormalities supports the importance of an early, effective and more accurate diagnosis, along with a preventive strategy and treatment.

• Anemia thrombosis hemostasia Ehrlichia sp. anemia hemolítica imuno-mediada trombose hemostasia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Moraes L.F., Takahira R.K., Golim M.A. & Baggio M.S. 2016. [Evaluation of hemostatic abnormalities and thromboembolic risk in dogs with IMHA.] Avaliação das alterações hemostáticas e do risco tromboembólico em cães com AHIM. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):405-411. Departamento de Clínica Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: liviafm@gmail.com A anemia hemolítica imuno-mediada (AHIM) é a causa mais comum dentre as anemias hemolíticas e a doença imuno-mediada de maior prevalência em cães, incluindo causas primárias e secundárias. As AHIM tem sido associadas a estados de hipercoagulabilidade, sendo o tromboembolismo a complicação mais comum. Este estudo teve como objetivo correlacionar as possíveis alterações hemostáticas e o risco tromboembólico nas AHIM e nas anemias por outras etiologias. Para tanto, foram selecionados 76 cães anêmicos (hematócrito &#8804; 20%) somados ao menos um sinal clínico comumente associado à AHIM ou possuir pré-disposição racial. Foram realizados os seguintes testes para os animais selecionados: teste de citometria de fluxo e avaliação do perfil hemostático (contagem de plaquetas, TP, TTPA, TT, AT, PDF e Dímeros D); além de hemograma com contagem de reticulócitos, pesquisa de hematozoários em sangue periférico, PCR para Ehrlichia sp. e sorologia para leptospirose. 59 cães foram positivos para AHIM. O estado tromboembólico foi caracterizado pela presença de alteração em três ou mais testes do perfil hemostático. 74,6% casos de AHIM foram atribuídos às doenças infecciosas, sendo em sua maioria associados à Ehrlichia sp. (88,6%). 72,1% apresentaram trombocitopenia e 57,6% apresentaram anemia regenerativa com valores significativamente maiores de metarrubrícitos e contagem de reticulócitos. Não houve diferença estatística entre os grupos de cães anêmicos (positivos e negativos para AHIM). Os cães anêmicos apresentaram valores médios maiores de TTPA e menores de AT e contagem de plaquetas quando comparados aos cães saudáveis (p < 0,05). 25 cães positivos e sete negativos apresentaram estado tromboembólico. A especificidade de PDF foi menor (30,2%) quando comparada outros estudos. A escolha da classe de Ig não interfere no diagnóstico de AHIM. Não houve correlação entre a presença de anticorpos ligados às hemácias e as variáveis hemostáticas, porém houve uma fraca correlação (p<0,05) entre o hematócrito e os valores de TTPA (r=-0,2621), AT (r=0,4297) e contagem de plaquetas (r=0,5349). A anemia está associada a alterações hemostáticas e ao risco tromboembólico, no entanto a natureza imuno-mediada não é o fator determinante para esta condição. Em parte, estas alterações podem ser atribuídas ao quadro infeccioso observado em ambos os grupos (positivos e negativos para AHIM). O risco tromboembólico semelhante evidenciado nos dois grupos de cães anêmicos não exclui a relação do envolvimento imuno-mediado, mas atenta para uma possibilidade do tromboembolismo em cães anêmicos com Ehrlichia sp. (negativos para AHIM). Desta forma, cães anêmicos que apresentam sinais clínicos associados ao risco tromboembólico devem ser avaliados para tal complicação, hoje pouco investigada na rotina clínica. A alta frequência de alterações hemostáticas sustenta a importância de um diagnóstico precoce, efetivo e mais acurado, juntamente com uma estratégia de prevenção e tratamento.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Farias T.H.V., Pereira N.L., Pádua S.B., Alves L.O., Sakabe R., Belo M.A.A. & Pilarski F. 2016. Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):431-435. Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista, Rodovia Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: lapoa_caunesp@hotmail.com The present study aimed to evaluate the effects of Na heparin and Na2EDTA on blood of Piaractus mesopotamicus (360.7±42.4g, 26.4±1.0cm). Twenty fishes were sampled in two experiment trials, ten for erythrocyte fragility analysis and ten for hematologic and plasma biochemical study. The blood collected by venous-caudal puncture was fractioned and stored in anticoagulants solution: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, Na heparin 5000 IU and Na heparin 100 IU. Plasmatic levels of calcium presented in the Na2EDTA stored samples were about 80% lower than both heparin groups. Blood samples of P. mesopotamicus stored with Na2EDTA demonstrated increase in the hematocrit and MCV, and decrease in MCHC. The dose-response effect was observed in this study. The results are reinforced by the higher levels of plasmatic protein and hemolysis presented in the Na2EDTA 10% stored blood, confirming the deleterious effect of this anticoagulant treatment on the quality of blood samples. Na2EDTA is not indicated to store P. mesopotamicus blood samples, but sodium heparin at 100 IU is the most recommended anticoagulant, since this treatment presented the lower rate of alterations in the stored blood.

• Fish hematology blood clotting Heparin Piaractus mesopotamicus hematologia de peixes coagulação sanguínea Heparina pacus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Farias T.H.V., Pereira N.L., Pádua S.B., Alves L.O., Sakabe R., Belo M.A.A. & Pilarski F. 2016. Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus. [Anticoagulante Na2EDTA danifica amostras de sangue do teleósteo Piaractus mesopotamicus.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):431-435. Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista, Rodovia Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: lapoa_caunesp@hotmail.com O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da heparina sódica e Na2EDTA no sangue de Piaractus mesopotamicus (360,7±42,4g, 26,4±1,0cm). Foram amostrados vinte peixes em dois ensaios experimentais, sendo dez peixes utilizados para análise da fragilidade dos eritrócitos e dez peixes para análise dos parâmetros hematológicos e estudo bioquímico do plasma. O sangue coletado por punção veno-caudal foi aliquotado e armazenado em diferentes soluções anticoagulantes: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, heparina sódica 5.000 UI e heparina sódica 100 UI. Níveis plasmáticos de cálcio apresentados nas amostras armazenados em Na2EDTA diminuíram cerca de 80% em relação aos dois grupos armazenados com heparina. Amostras de sangue de pacus armazenados com Na2EDTA demonstraram aumento do hematócrito e VCM, e diminuição na CHCM. O efeito dose-resposta foi observado neste estudo. Estes resultados são reforçados pelos níveis mais elevados de proteína plasmática e hemólise apresentado no sangue armazenado com Na2EDTA 10%, o que confirma o efeito deletério desse tratamento anticoagulante na qualidade de amostras de sangue. Na2EDTA não é indicada para armazenar amostras de sangue de P. mesopotamicus, e heparina sódica a 100 UI é o anticoagulante mais recomendado, uma vez que este tratamento apresentou a menor taxa de alterações no sangue armazenado.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rodrigues R.T.G.A., Santos J.R.S., Azerêdo L.M.S., Rocha E.F., Carvalho M.A.M., Portal M.J.I.D., Sousa O. B. & Menezes D.J.A. 2016. Influence of scrotal bipartition on spermatogenesis yield and Sertoli cell efficiency in sheep. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):258-262. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Avenida Universitária s/n, Santa Cecília, Patos, PB 58708-110, Brazil. E-mail: mdanayres@gmail.com With the objective to assess the effect of scrotal bipartition on spermatogenesis in sheep, the testes were used from 12 crossbred rams of sheep farms in the municipality of Patos, Paraíba, Brazil, distributed into two groups: GI with six rams with scrotal bipartition, and GII with six rams without scrotal bipartition. The testicular biometry was measured and the testes were collected, fixed in Bouin and fragments were processed to obtain histological slides. The spermatogenesis yield and the Sertoli cell efficiency was estimated by counting the cells of the spermatogenetic line at stage one of the seminiferous epithelium cycle and the Sertoli cells. The results were submitted to analysis of variance with the ASSISTAT v.7.6 program and the mean values were compared by the Student-Newman-Keuls test (SNK) at 5% significance. The testicular biometric parameters did not show statistical difference (p>0.05) between the groups. The meiotic, spermatogenetic and Sertoli cell efficiency were higher in bipartitioned rams (p<0.05), while the mitotic yield did not differ (p>0.05) between GI and GII. The results indicated that there is superiority in the spermatogenetic parameters of bi-partitioned rams, suggesting that these sheep present, as reported in goats, indication of better reproductive indices.

• Scrotal bipartition spermatogenesis Sertoli cells bipartição escrotal espermatogênese células de Sertoli

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rodrigues R.T.G.A., Santos J.R.S., Azerêdo L.M.S., Rocha E.F., Carvalho M.A.M., Portal M.J.I.D., Sousa O. B. & Menezes D.J.A. 2016. Influence of scrotal bipartition on spermatogenesis yield and Sertoli cell efficiency in sheep. [Influência da bipartição escrotal sobre o rendimento da espermatogênese e eficiência das células de Sertoli em ovinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):258-262. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Avenida Universitária s/n, Santa Cecília, Patos, PB 58708-110, Brazil. E-mail: mdanayres@gmail.com Com o objetivo de avaliar o efeito da bipartição escrotal sobre a espermatogênese em ovinos, foram utilizados os testículos de 12 ovinos sem raça definida oriundos de criadouros do município de Patos-PB, Brasil, distribuídos em dois grupos, GI de seis animais com bipartição escrotal e o GII de seis animais sem bipartição escrotal. Realizou-se a aferição da biometria testicular, em seguida, os testículos foram coletados, fixados em Bouin e fragmentos foram processados para obtenção de lâminas histológicas. Foi estimado o rendimento da espermatogênese e eficiência das células de Sertoli contando-se as células da linhagem espermatogênica no estádio I do Ciclo do Epitélio Seminífero, bem como as células de Sertoli. Os resultados foram submetidos à análise de variância pelo programa ASSISTAT v.7.6 e os valores médios foram comparados pelo teste Student-Newman-Keuls (SNK) a 5% de significância. Os parâmetros de biometria testicular não apresentaram diferença estatística (p>0,05) entre os grupos. Os rendimentos meiótico, espermatogênico e a eficiência das células de Sertoli mostraram-se superiores em animais bipartidos (p<0,05), enquanto o rendimento mitótico não diferiu (p>0,05) entre GI e GII. Os resultados indicaram existir superioridade nos parâmetros espermatogênicos de ovinos bipartidos, sugerindo que estes animais apresentam, assim como constatado em caprinos, indicativo de melhores índices reprodutivos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rocha Junior S.S., Mendes H.M.F., Beier S.L., Paz C.F.R., Azevedo D.S.D., Lacerda I.G.O., Correa M.G. & Faleiros R.R. 2016. [Macroscopic and histological evaluations of equine joint cartilage repair treated with microperforation of the subchondral bone associated or not with intra-articular kartogenin.] Avaliações macroscópica e histológica do reparo da cartilagem articular equina tratada com microperfurações do osso subcondral associadas ou não à injeção intra-articular de cartogenina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):272-278. Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Avenida Antônio Carlos 6627, Cx. Postal 567, Campus Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: faleirosufmg@gmail.com The aim of this study was to evaluate the joint cartilage repair by macroscopic (via arthroscopy) and histological (biopsy fragments) analyses in chondral defects induced into equine femoral trochlea treated by microperforation associated with or without intra-articular administration of kartogenin. Six horses weighing 342±1.58 kg (mean ± SD), aged approximately 7.2±1.30 years and with a body condition score of 7.1±0.75, were used. The horses underwent arthroscopy for induction of 1-cm2 chondral lesions in lateral femoral trochlea immediately treated by microperforation of the subchondral bone of both knees. Four weekly intra-articular injections of kartogenin (20µM) in one knee (treated group) and Ringer lactate solution in the contralateral joint (control group) were performed during the postoperative period. After 60 days, macroscopic evaluations were performed by video-arthroscopy, and biopsy samples of the repair tissue were taken for histopathological healing evaluation. No significant change was observed in macroscopic and histological scores for chondral healing between treated and untreated groups (P>0.05). The overall mean percentage of hyaline cartilage in both groups (17.5%) was consistent with other international studies using other types of chondral microperforation; however, no statistical differences were observed between groups (P>0.05). In conclusion, the therapy with kartogenin, according to the used protocol, did not produce any macroscopic and histological healing improvement in induced chondral lesions treated with microperforations in equine femoral trochlea.

• Joint cartilage kartogenin articulação cartilagem cartogenina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rocha Junior S.S., Mendes H.M.F., Beier S.L., Paz C.F.R., Azevedo D.S.D., Lacerda I.G.O., Correa M.G. & Faleiros R.R. 2016. [Macroscopic and histological evaluations of equine joint cartilage repair treated with microperforation of the subchondral bone associated or not with intra-articular kartogenin.] Avaliações macroscópica e histológica do reparo da cartilagem articular equina tratada com microperfurações do osso subcondral associadas ou não à injeção intra-articular de cartogenina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):272-278. Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Avenida Antônio Carlos 6627, Cx. Postal 567, Campus Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: faleirosufmg@gmail.com O objetivo deste estudo foi avaliar o reparo da cartilagem hialina equina, por meio de análises macroscópica (através de videoartroscopia) e histológica (através de fragmentos de biopsia), em defeitos condrais induzidos na tróclea lateral do fêmur tratados pela técnica de microperfurações subcondral associada ou não com administração intra-articular de cartogenina. Foram utilizados seis equinos pesando em média (±DP) 342±1,58 kg, com a idade aproximada de 7,2±1,30 anos e escore corporal de 7,1±0,75, que foram submetidos a videoartroscopia para indução da lesão condral de 1 cm2 na tróclea lateral do fêmur e realização da técnica de microperfuração do osso subcondral de ambos os joelhos. Foram realizadas quatro aplicações semanais com 20 µM de cartogenina intra-articulares em um dos joelhos (grupo tratado) e solução de ringer com lactato na articulação contralateral (grupo controle). Após o período de 60 dias, foram feitas as avaliações macroscópicas, através de videoartroscopias, e histológicas, através de biopsia. Não foram observadas diferenças significativas nos escores macroscópicos e histológicos para reparação condral entre animais dos grupos tratados e não tratados (P>0,05). De modo geral, a porcentagem média de cartilagem hialina no tecido de reparo (17,5%) foi condizente com a literatura internacional usando outros tipos de perfuração condral. Entretanto, não se observaram diferenças estatísticas entre grupos (P>0,05). A terapia com cartogenina, segundo protocolo utilizado, não produziu melhora do processo cicatricial em lesões condrais induzidas e tratadas com microperfurações na tróclea lateral do fêmur em equinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Martins T., Rosa A.F., Castelani L., Miranda M.S. de, Arcaro J.R.P. & Pozzi C.R. 2016. Intramammary treatment with gentamicin in lactating cows with clinical and subclinical mastitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):283-289. Centro Apta Bovinos de Leite, Instituto de Zootecnia, Rua Heitor Penteado 56, Centro, Nova Odessa, SP 13460-000, Brazil. E-mail: martins_thamires@hotmail.com The study evaluated the microbiological profile of milk samples collected before and after mastitis treatment with gentamicin and investigated biofilms production and antimicrobial susceptibility of Staphylococcus spp. isolated. The presence of gentamicin residues in milk after the recommended withdrawal period was also evaluated. Antimicrobial residues were analyzed by Delvotest® SP NT over a period of 12 days beginning after 24 hours the last gentamicin application. Some of Staphylococcus spp. isolates were biofilm producers (19.05%). Staphylococcus spp. showed high levels of resistance to neomycin (16.95%), penicillin G (10.17%), and ampicillin (10.17%). Multidrug resistance to all antibiotics tested was observed in 1.69% of the Staphylococcus spp. isolates. Among 1440 mammary quarter milk samples 24.95% presented gentamicin residues after the withdrawal period. Gentamicin residues were also detected in 3.8% of samples from calibrated glass recorder jar (n=383) 4.1 days after treatment. The indiscriminate use of antibiotics may lead to the emergence of multidrug-resistant strains as well as increasing the risk of presence of residues of these drugs in milk. These problems affect the milk quality and may become a public health problem.

• Antibiotic residues biofilm mastitis multiresistance Staphylococcus spp. resíduos de antibióticos biofilme mastite multirresistência

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Martins T., Rosa A.F., Castelani L., Miranda M.S. de, Arcaro J.R.P. & Pozzi C.R. 2016. Intramammary treatment with gentamicin in lactating cows with clinical and subclinical mastitis. [Tratamento intramamário com gentamicina em vacas com mastite clínica e subclínica durante a lactação.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):283-289. Centro Apta Bovinos de Leite, Instituto de Zootecnia, Rua Heitor Penteado 56, Centro, Nova Odessa, SP 13460-000, Brazil. E-mail: martins_thamires@hotmail.com Este estudo avaliou o perfil microbiológico de amostras de leite colhidas antes e após o tratamento da mastite com gentamicina e investigou a produção de biofilmes e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de Staphylococcus spp. isolados. Avaliou-se também a presença de resíduos de gentamicina no leite após o período de carência recomendado. Resíduos de antimicrobianos foram analisados por Delvotest® SP NT ao longo de um período de 12 dias, iniciando 24 horas após a última aplicação de gentamicina. Alguns dos Staphylococcus spp. isolados apresentaram produção de biofilmes (19,05%). Staphylococcus spp. apresentaram elevados níveis de resistência à neomicina (16,95%), penicilina G (10,17%), e ampicilina (10.17%). Multirresistência a todos os antibióticos testados foi observada em 1,69% dos Staphylococcus spp. isolados. Do total de 1440 amostras de leite de quartos mamários, 24,95% apresentaram resíduos de gentamicina após o período de carência. Resíduos de gentamicina também foram detectados em 3,8% das amostras de balões volumétricos coletores de leite (n= 383), 4,1 dias após o tratamento. O uso indiscriminado de antibióticos pode levar ao aparecimento de estirpes multirresistentes bem como o aumento do risco da presença de resíduos destas drogas no leite. Esses problemas afetam a qualidade do leite e podem tornar-se um problema de saúde pública.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Bazzi T., Melo S.M.P., Fighera R.A. & Kommers G.D. 2016. [Clinical, epidemiological, histomorphological and histochemical characteristics of the feline sporotrichosis.] Características clínico-epidemiológicas, histomorfológicas e histoquímicas da esporotricose felina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):303-311. Laboratório de Patologia Veterinária, Departamento de Patologia, Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal de Santa Maria, Avenida Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: glaukommers@yahoo.com Sporotrichosis is a mycotic infection caused by the Sporothrix complex species, affecting mostly cats, horses, and dogs. The main objectives of this retrospective study were to characterize the histomorphological and histochemical aspects of sporotrichosis in 10 cats, and also to evaluate epidemiological and clinical aspects, and gross findings obtained from the biopsy and necropsy protocols of these ten cases, obtained from the archives of the Laboratório de Patologia Veterinária of the Universidade Federal de Santa Maria. The disease affected mostly male mongrel cats, and was mostly observed in the cutaneous disseminated form. Gross lesions were characterized by cutaneous nodules (ulcerated or not) and by ulcerated masses or plaques. By histopathology, there were a relationship between the fungal load and two patterns of inflammatory response. The first pattern was characterized by high fungal load, and most yeasts were inside of numerous macrophages with abundant, many times vacuolated cytoplasm. The amount of neutrophils ranged from mild to moderate in this pattern. The second pattern was characterized by numerous epiteliod cells and many neutrophils. The fungal load was low and most yeasts were observed in the extracellular space. The yeasts were round, oval or cigar-shaped. Several histochemical techniques, such as Grocott’s silver stain, periodic Schiff acid, and Alcian blue were utilized and they made it easier to visualize, to characterize the morphology, and to quantify the organisms. The Giemsa stain allowed visualizing the agent, but it not allowed to sharply highlight them from other intralesional components. Organisms were negative for melanin granules through the Fontana-Masson stain in all cases. The histomorphological and histochemical study allowed demonstrating determinant fungal characteristics to the establishment of the diagnosis by means of this diagnostic tool.

• Sporotrichosis Sporothrix spp. mycosis esporotricose micose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Bazzi T., Melo S.M.P., Fighera R.A. & Kommers G.D. 2016. [Clinical, epidemiological, histomorphological and histochemical characteristics of the feline sporotrichosis.] Características clínico-epidemiológicas, histomorfológicas e histoquímicas da esporotricose felina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):303-311. Laboratório de Patologia Veterinária, Departamento de Patologia, Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal de Santa Maria, Avenida Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: glaukommers@yahoo.com Esporotricose é uma infecção fúngica causada por espécies do complexo Sporothrix, vista com maior frequência em gatos, equinos e cães. Os principais objetivos deste estudo retrospectivo foram caracterizar os aspectos histomorfológicos e histoquímicos da esporotricose em 10 gatos, além de avaliar os aspectos epidemiológicos, clínicos e os achados macroscópicos desses 10 casos, obtidos dos protocolos de biópsias e necropsias dos arquivos do Laboratório de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Santa Maria. A doença acometeu predominantemente gatos machos, sem raça definida e apresentou-se principalmente na forma cutânea disseminada. As lesões macroscópicas caracterizaram-se como nódulos cutâneos (ulcerados ou não) e como massas e placas ulceradas. Na histopatologia observou-se uma relação entre a quantidade de leveduras observada e dois padrões de resposta inflamatória. O primeiro padrão caracterizou-se por numerosas leveduras que se encontravam, na sua maioria, no interior de numerosos macrófagos com citoplasma abundante e muitas vezes vacuolizado. Nesse padrão, a quantidade de neutrófilos variava de leve a moderada. O segundo padrão caracterizava-se por numerosas células epitelioides, infiltrado predominantemente acentuado de neutrófilos e a quantidade de leveduras era leve e estas eram observadas geralmente livres no espaço extracelular. As leveduras eram redondas, ovais ou alongadas (em forma de charuto). Foram utilizadas várias técnicas histoquímicas como a impregnação pela prata de Grocott, ácido periódico de Schiff e azul Alciano que facilitaram a visualização, caracterização da morfologia e quantificação dos organismos. A coloração de Giemsa permitiu a visualização do agente, porém não permitiu destacá-los nitidamente de outros elementos intralesionais. Os organismos foram negativos para grânulos de melanina pela coloração de Fontana-Masson em todos os casos. O estudo histomorfológico e histoquímico permitiu demonstrar características fúngicas determinantes para o estabelecimento do diagnóstico de esporotricose através dessa ferramenta diagnóstica.