PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Molnár L., Molnár E., Lima E.S.C. & Dias H.L.T. 2002. [Evaluation of six serological tests for the diagnosis of brucellosis in water buffaloes.] Avaliação de seis testes sorológicos no diagnóstico da brucelose bubalina. Pesquisa Veterinária Brasileira 22(2):41-44. Centro Agropecuário, Lidea, Universidade Federal do Pará, Belém, PA 66075-900, Brazil. Four hundred and forty buffalo sera, selected from about 1,200 blood samples of another study, were examined. The samples were tested by six serological methods: two of agglutination, two of indirect ELISA and two of competitive ELISA. To determine the relative sensitivity and specificity of different tests, animals with a positive result to competitive ELISA of the FAO/IAEA were considered as infected. The relative sensitivity of competitive ELISA, indirect ELISA with conjugate anti-bovine light chain monoclonal antibody labelled with HRPO, indirect ELISA with anti-bovine lgG conjugate, rose Bengal test and rapid slide agglutination test was 100%, 98.57%, 97.14%, 91.42% and 79.28%, and the relative specificity 99.33%, 97.33%, 95.66%, 94.00% and 86.33%, respectively. The value of the different serological tests for the diagnosis of brucellosis is discussed.

• Brucellosis water buffalo competitive ELISA indirect ELISA agglutination Bucelose bubalino ELISA competitivo ELISA indireto aglutinação.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Molnár L., Molnár E., Lima E.S.C. & Dias H.L.T. 2002. [Evaluation of six serological tests for the diagnosis of brucellosis in water buffaloes.] Avaliação de seis testes sorológicos no diagnóstico da brucelose bubalina. Pesquisa Veterinária Brasileira 22(2):41-44. Centro Agropecuário, Lidea, Universidade Federal do Pará, Belém, PA 66075-900, Brazil. Foram examinados 440 soros bubalinos, selecionados em um outro exame de cerca de 1200 amostras sangüíneas. Utilizaram-se seis diferentes testes sorológicos para o exame dessas amostras: dois de aglutinação, dois de ELISA indireto e dois de ELISA competitivo. Os animais positivos no ELISA competitivo da FAO/IAEA foram considerados como infectados, e a comparação com os resultados dos outros testes aconteceu neste sentido. A sensibilidade relativa foi de 100%, 98,57%, 97,14%, 91,42% e 79,28%, e a especificidade relativa de 99,33%, 97,33%, 95,66%, 94,00% e 86,33% nas provas de ELISA competitivo, ELISA indireto com conjugado antibovino de cadeia leve (anticorpo monoclonal com HRPO), ELISA indireto com conjugado contra lgG bovino total, teste do antígeno acidificado tamponado e aglutinação rápida, respectivamente. Discute-se o valor dos diferentes testes sorológicos no diagnóstico da brucelose.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Araújo F.R., Miguita M., Carvalho C.M.E., Araújo F.S., Umaki A.C.S., Crocci A.J. & Queiróz R.A. 2001. Evaluation of an ELISA for detection of antibodies to Babesia bigemina in cattle and it's application in an epidemiological survey in Brazil. [Avaliação de um ELISA para detecção de anticorpos contra Babesia bigemina em bovinos e sua aplicação em um inquérito sorológico no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 21 (2):72-76. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using a crude antigen was evaluated for its performance to detect Babesia bigemina antibodies. The sensitivity and specificity were 98.0% and 99.0%, respectively. ln agreement with the high specificity, no cross-reactions were verified with sera from calves inoculated three times with 107 Babesia bovis organisms. With regard to the comparison of ELISA and indirect fluorescent antibody test (lFAT) in detecting antibodies against B. bigemina in calves experimentally infected with five Brazilian geographical isolates of this hemoparasite, lFAT was able to detect antibodies one day earlier in most of the calves' sera. There was a good agreement between results shown by ELISA and IFAT with sera from an enzootically stable area (k=0.61). However, there was no agreement between these serological tests with sera from an enzootically unstable area (k=0.33). The ELISA was employed in an epidemiological survey using with 1,367 sera from four counties in the Pantanal of Mato Grosso do Sul and characterized this region as an enzootically stable area, since the prevalence ranged from 87.7 to 98.9%. Therefore, this ELISA with high sensitivity, specificity and performance similar to lFAT can be employed in serological diagnosis of B. bigemina.

• Babesia bigemina ELISA serological tests cattle Pantanal testes sorológicos bovinos Pantanal.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Araújo F.R., Miguita M., Carvalho C.M.E., Araújo F.S., Umaki A.C.S., Crocci A.J. & Queiróz R.A. 2001. Evaluation of an ELISA for detection of antibodies to Babesia bigemina in cattle and it's application in an epidemiological survey in Brazil. [Avaliação de um ELISA para detecção de anticorpos contra Babesia bigemina em bovinos e sua aplicação em um inquérito sorológico no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 21 (2):72-76. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. Um ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) baseado em antígeno bruto foi avaliado na detecção de anticorpos contra Babesia bigemina. A sensibilidade e a especificidade do teste foram de 98,0% e 99,0%, respectivamente. Concordando com a alta especificidade do teste, não foram verificadas reações cruzadas com soros de bezerros inoculados três vezes com 107 merozoítos de Babesia bovis. Com relação à comparação do ELISA com a imunofluorescência indireta (IFAT) na detecção de anticorpos contra B. bigemina em bezerros experimentalmente infectados com cinco isolados brasileiros geograficamente distintos deste hemoparasito, o IFAT foi capaz de detectar anticorpos um dia antes do ELISA na maioria dos soros dos animais. Houve urna boa concordância entre os resultados encontrados no ELISA e no IFAT com soros de bovinos de região de estabilidade enzoótica (k=0.61 ). No entanto, não houve concordância entre os testes sorológicos com soros de animais de área de instabilidade enzoótica (k=0.33). O ELISA foi empregado em um inquérito epidemiológico com 1.367 soros de quatro municípios do Pantanal de Mato Grosso do Sul e caracterizou esta região corno urna área de estabilidade enzoótica, urna vez que as prevalências variaram de 87, 7 a 98,9%. Dessa forma, este ELISA, que apresentou alta sensibilidade, especificidade e desempenho similar ao IFAT, pode ser utilizado no diagnóstico sorológico de B. bigemina.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Leal C.R.B., Carvalho C.M.E., Araújo F.R. & Kessler R.H. 2000. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies against Anaplasma marginale. [Avaliação de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(3):109-112. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. A rapid indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for measuring antibodies against Anaplasma marginale using a partially soluble antigen prepared from semipurified initial bodies from erythrocytes with 80.0% of rickettsiaemia. This technique utilized alkaline phosphatase and p-nitrophenyl phosphate as reaction indicators. The high sensitivity (100.0%) was confirmed with sera from 100 calves experimentally-infected with A. marginale. All of these animals showed seroconversion before or at the same time of the first rickettsiaemia or even when it was not detected. Also the elevated specificity (94.0%) was confirmed by the low percentage of cross-reactions with sera from animals experimentally-infected with Babesia bigemina and Babesia bovis (1.4 and 6.6%, respectively). Performances of ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT) with 324 sera from enzootically stable area did not show statistical difference (P>0.05), since the former showed 96.9% and the latter 97.2% of positive reactions. The advantage of this ELISA is a shorter execution time than others developed until now, allowing more samples to be analyzed.

• Anaplasma marginale ELISA serological tests cattle testes sorológicos bovino.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Madruga C.R., Marques A.P.C., Leal C.R.B., Carvalho C.M.E., Araújo F.R. & Kessler R.H. 2000. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay to detect antibodies against Anaplasma marginale. [Avaliação de uma prova de imunoadsorção enzimática para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(3):109-112. Embrapa Gado de Corte, Rodovia BR 262 Km 4, Cx. Postal 154, Campo Grande, MS 79002-970, Brazil. Um ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) indireto, foi desenvolvido para detecção de anticorpos contra Anaplasma marginale, utilizando um antígeno parcialmente solúvel preparado a partir de corpúsculos iniciais semipurificados de eritrócitos com 80,0% de parasitemia. Esta técnica utilizou a fosfatase alcalina e o p-nitrofenil fosfato como indicadores de reação. A alta sensibilidade (100,0%) foi comprovada com soros ele 100 bezerros experimentalmente infectados com A. marginale. Todos estes animais soroconverteram antes ou ao mesmo tempo que a primeira parasitemia foi detectada, ou mesmo quando não se obteve parasitemia. A elevada especificidade (94,0%) foi confirmada pela baixa percentagem ele reações cruzadas com soros de animais infectados experimentalmente com Babesia bigemina e Babesia bovis (1,4 e 6,6%, respectivamente). Os desempenhos do ELISA e da imunofluorescência indireta (IFI) com 324 soros de uma área de estabilidade enzoótica não diferiram estatisticamente (P>0,05), uma vez que o primeiro teste detectou 96,9% de reações positivas, enquanto o segundo, 97,2%. A vantagem deste ELISA foi um menor tempo ele execução do que outros desenvolvidos até o momento, permitindo a análise de um maior·número de soros.

Abstract in English:

In an attempt to determine the most suitable screening test for the identification of antibodies to Aujeszky's disease vírus in large scale, immunoelectrosmophoresis (IEOP), serum neutralization in microtitre plates (SN) and agar gel immunodiffusion (MID) were adapted to our working conditions and compared. For the comparison between IEOP and SN, 575 field sera of swine from the states of Paraná, Santa Catarina and Rio Grande do Sul were used. The IEOP detected 358 (100%) positive sera, whereas SN detected 293 (81,84%) positives and 35 (9,78%) negatives. In 30 (8,38%) samples no results could be obtained with SN due to contamination or cell culture toxicity. In 217 (100%) samples negative by IEOP, 199 (91,7%) were negative by SN. The remainder 18 (8,29%) allowed no SN result. MID was included in the comparison by testing 386 sera by the three methods. From 285 (100%) IEOP positive sera, SN detected 226 (79,3%) positives, 31 (10,9%) negatives and 28 (9,8%) without result. MID detected 193 (67,7%) positives, 84 (29,5%) negatives and 8 (2,8%) allowed no conclusive result. In 101 (100%) IEOP negative sera, a11 were also negative by MID; 95 (94,05%) were negative by SN and 6 (5,94%) gave no result. Considering the SN results as standard, the IEOP has shown to be a useful technique for screening particularly for laboratories where cell culture facilities are not available. The positive sera heve, however, to be retested either by SN or ELISA, in order to be sure of its positivity, since about 10% of samples were false positives. The MID, despite simpler than IEOP, showed 15,79% false negatives, what might compromise its use as a preliminary test for massive serology.

• Immunoelectrosmophoresis serum neutralization microimmunodiffusion comparative tests Aujeszky's disease

Abstract in Portuguese:

Com o objetivo de determinar o teste de triagem mais eficaz para a identificação de anticorpos contra o vírus da Doença de Aujeszky em larga escala, imunoeletrosmoforese (IEOF), soroneutralização em microtécnica (SN) e imunodifusão em gel de agar foran1 adaptados às nossas condições de trabalho e comparados. Para a comparação entre IEOF e SN, 575 soros de campo de suínos dos Estados de Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul foram utilizados. A IEOF detectou 358 (100%) soros positivos, enquanto a SN detectou 293 (81,84%) positivos e 35 (9,78%) negativos. Em 30 (8,38%) amostras, nenhum resultado pôde ser obtido com a SN devido a contaminação ou toxicidade aos cultivas celulares. Em 217 (100%) amostras negativas por IEOF, 199 (91,7%) foram negativas por SN. As 18 (8,29%) restantes não permitiram resultado por SN. MIO foi incluída na comparação através da testagem comparativa de 386 soros pelos três métodos. De 285 (100%) soros IEOF positivos, a SN detectou 226 (79,3%) positivos, 31 (10,9%) negativos e em 28 (9,8%) não foi obtido resultado. A MIO detectou 193 (67,7%) positivos, 84 (29,5%) negativos e 8 (2,8%) soros não permitiram um resultado conclusivo. Em 101 (100%) soros IEOF negativos, todos foram também negativos por MID; 95 (94,05%) foram negativos por SN e 6 (5,94%) não permitiram resultado. Considerando os resultados da SN como padrão, a IEOF mostrou ser uma técnica útil para triagem, particularmente em laboratórios onde não são trabalhadas técnicas de cultivo celular. Os soros positivos necessitam, no entanto, ser retestados por SN ou ELISA, a fim de serem confirmados resultados positivos, uma vez que em torno de 10% das amostras foram falsos positivos, A MID, apesar de se constituir em uma técnica mais simples que a IEOF, mostrou 15,79% de falsos negativos, o que pode comprometer seu uso como um teste preliminar para sorologia em larga escala.

• Imunoeletrosmoforese soroneutralização microimunodifusão testes comparativos doença de Aujeszky

Abstract in English:

A comparison was made between the plate immunodiffusion (ID) test and the micro-serum neutralization (SN) test in the detection of antibodies for Aujeszky's disease virus (ADV) in pig sera, using a total of 813 sera derived from five infected herds. The plate ID test was as sensitive and specific as the micro SN test in detecting positive sera that possessed neutralizing activity only when tested undiluted. Sera with this titer generally reacted by bending the precipitation line formed between the antigen and the reference serum. Sera with SN titers equal to or greater than eight, usually gave two lines of precipitation. The plate ID test was equally efficient and specific in detecting antibodies resulting from a natural infection or from vaccination with an inactivated oil-emulsion vaccine, as well as maternally-derived antibodies in the sera of piglets from vaccinated sows. Of 813 sera assayed in the micro SN test, 295 (36.3%) contained ADV antibody, 382 (47%) were negative and 136 (16.7%) were toxic. The sarne sera assayed in the plate ID test showed 347 (42.7%) positive for precipitating antibodies and466 (57.3%) negative. The major limitation of the SN test was the excessive percentage of sera (16.7%) that were toxic for the indicator cells (chicken embryo fibroblasts), due mainly to bacterial contamination and/or hemolysis as a result bad handling and storage of samples before arriving to the laboratory. The disagreement between the number of positive sera detected by the two tests in favor of the plate ID test, was due to the fact that 52 sera that were positive by this test were toxic when assayed by SN. Under the experimental conditions, the plate ID test was both sensitive and specific for the detection of antibodies for ADV, and as well as being economic, simple and rapid to perform, there is the advantage that it can be used to test moderately contaminated and/or hemolysed sera that are toxic for the indicator cells in the SN test.

• Serum neutralization immunodiffusion diagnosis Aujeszky swine

Abstract in Portuguese:

A comparação do teste de imunodifusão (ID) em placa e o microteste de soroneutralização (SN), na detecção de anticorpos para o vírus da doença de Aujeszky (VDA) em soros suínos, foi realizada em 813 soros oriundos de cinco plantéis infectados com o VDA. O teste de ID em placa foi altamente sensível e especifico, detectando como positivos soros que, no micro-teste de soroneutralização, apenas reagiam quando eram testados sem diluir. Os soros com este título reagiam, geralmente, dobrando a linha de precipitação formada entre o antígeno e o soro de referência. Soros com títulos SN de oito ou superiores apresentavam freqüentemente duas linhas de precipitação. O teste de ID foi igualmente eficiente e específico na detecção de anticorpos da infecção natural, da vacinação com vacina inativada oleosa, bem como de anticorpos transferidos da porca para os leitões via colostro. De 813 soros submetidos ao teste de SN, 295 (36,3%) revelaram anticorpos, 382 (47%) eram negativos e 136 (16,7%) eram tóxicos. Os mesmos soros submetidos ao teste de ID, revelaram 347 (42,7%) positivos para anticorpos precipitantes enquanto que, 466 (57,3%) eram negativos. A maior limitação do teste de SN foi a excessiva percentagem de soros tóxicos (16,7%) para as células indicadoras (fibroblastos de embrião de galinha), principalmente, devido a contaminação bacteriana e/ou hemólise causada por deficiente dessoragem e estocagem antes de serem enviados ao laboratório. A discordância entre o número de soros detectados como positivos para anticorpos em favor do teste de ID, foi devido ao fato de que 52 soros positivos por este teste foram tóxicos no teste de SN. Nas atuais condições, o teste de ID foi sensível e específico na detecção de anticorpos para o VDA e tem a vantagem de ser econômico, simples e rápido de realizar, além de poder testar soros moderadamente contaminados e/ou hemolisados que são tóxicos para as culturas celulares utilizadas no teste de SN.

• Soroneutralização imunodifusão diagnóstico Aujeszky suínos