Resultado da pesquisa (4)

Termo utilizado na pesquisa citometria de fluxo

#1 - Expression patterns of mesenchymal stem cell-specific proteins in adipose tissue-derived cells: possible immunosuppressing agent in partial allograft for restoring the urinary bladder in rabbits

Abstract in English:

Adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) are an attractive source of mesenchymal stem cells (MSCs) for use in tissue engineering and clinical applications. This paper focuses on the characterization of ADSCs used as immunosuppressive agent in rabbits undergoing partial allograft for urine bladder restorage. For this study highlighted the characterization of the ADSCs used as immunosuppressive agents in rabbits submitted to partial allograft for restoration of the urinary vesicle, using 25 animals, six months old, New Zealand. ADSCs at the third peal were characterized by the MSC-specific CD105, CD73 and CD90 expression and by the absence of the hematopoietic marker CD45, as revealed by flow cytometry analysis. Moreover, ADSCs were efficient in preventing allograft rejection from the urinary bladder, as judged by biochemical, clinical and ultrasonography analysis. Together, these results compose characterization of protein expression profiles and immunosuppressive functionality of ADSCs in rabbits, which had undergone partial allografts of the urinary bladder, foreseeing future applications in clinical practice.

Abstract in Portuguese:

As células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) são uma fonte atraente de células-tronco mesenquimais (MSCs) para uso na engenharia de tecidos e suas aplicações clínicas. Este trabalho destacou a caracterização das ADSCs utilizadas como agentes imunossupressores em coelhos submetidos a aloenxerto parcial para restauração da vesícula urinária, sendo utilizados 25 animais, de seis meses de idade, Nova Zelândia. As ADSCs, após o terceiro repique, foram caracterizadas pela expressão específica de MSC CD105, CD73 e CD90 e pela ausência do marcador hematopoiético CD45, tal como revelado por análise de citometria de fluxo. Além disso, os ADSCs foram eficientes na prevenção da rejeição de aloenxertos da vesícula urinária, conforme avaliado por análises clínica, bioquímica e ultrassonográfica. Juntos, esses resultados compõem a caracterização dos perfis de expressão proteica e a funcionalidade imunossupressora de ADSCs em coelhos, que sofreram aloenxertos parciais da bexiga, prevendo futuras aplicações na prática clínica.


#2 - Comparative study of distinct techniques to determine differential leukocyte counts in milk

Abstract in English:

Milk somatic cell count (SCC) is the basis of mastitis and milk quality control programs, however it not differentiate the distinct leukocyte populations which in turn can improve the diagnosis of mastitis. Thus, the present study aimed to evaluate different techniques used to measure the distinct leukocyte populations in milk in attempt to improve the diagnosis of mastitis. Here, milk samples from 31 dairy cows (124 quarter milk samples) were used. The differential leukocytes count was determined by cytocentrifugation, direct microscopy smears, and monoclonal antibodies by flow cytometry. The automatic SCC was also performed. The results showed a positive and significant correlation between the proportion of polymorphonuclear leukocytes determined by all techniques and automatic cell count; although a discrete higher correlation between flow cytometry and automatic SCC was found. Furthermore, the present study reinforces the idea that macrophages were the predominant cell type in mammary gland with low SCC. The proportion of each leukocyte population differ among techniques, probably due to the subjectivity of the examiner in the evaluation of the differential leukocyte counts by cytocentrifugation and direct microscopy smears, which emphasize that flow cytometry can be a useful and feasible tool in the diagnosis and control of mastitis.

Abstract in Portuguese:

A contagem de células somáticas (CCS) é um parâmetro amplamente utilizado para monitorar a saúde do úbere e a qualidade do leite, porém não diferencia as distintas populações leucocitárias. Portanto, a diferenciação das populações celulares no leite pode aprimorar o diagnóstico da mastite bovina. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar as diferentes técnicas de contagem diferencial de leucócitos no leite para diagnosticar precisamente a mastite. Para tal, foram utilizadas 31 vacas da raça holandesa preta e branca em lactação (124 quartos mamários). Foram empregadas a contagem automática de células somáticas, e a contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação, contagem diferencial de leucócitos por esfregaço direto, e citometria de fluxo com a utilização de anticorpos monoclonais específicos para identificação de cada população leucocitária. Os resultados demonstraram correlação positiva e significativa entre a proporção de leucócitos polimorfonucleares pelas diferentes técnicas e a contagem automática de células somáticas, sendo observada uma correlação discretamente mais forte com a citometria de fluxo. Além disso, foi demonstrado que os macrófagos são a população predominante no leite oriundo de glândula mamária com baixa CCS. Observaram-se também diferenças na proporção das distintas populações leucocitárias entre as distintas técnicas, resultado da possível subjetividade do examinador na contagem diferencial de leucócitos pelas técnicas de citocentrifugação e contagem microscópica direta por esfregaços, o que reforça que a citometria de fluxo pode ser uma ferramenta confiável no controle e diagnóstico da mastite.


#3 - Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination, 33(12):1403-1408

Abstract in English:

ABSTRACT.- Maggioli M.F., Lobo J.R., Fioravanti M.C.S., Kipnis A. & Junqueira-Kipnis A.P. 2013. Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1403-1408. Laboratório de Imunopatologia das Doenças Infecciosas, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública, Rua Delenda Resende de Melo s/n, Setor Universitário, Goiânia, GO 74605050, Brazil. E-mail: apkipnis@gmail.com The present study aimed to assess the CD4, CD8 and gd blood levels for Curraleiro Pé-duro, as well as the specific IFN-g response after BCG vaccination using flow cytometry. The specific immune response against BCG was also evaluated by tuberculin skin test, performed before and 45 days after the vaccination. For comparison purposes, the same parameters were investigated on Nellore calves, an exotic bovine with resistance previously demonstrated. Naturally, Curraleiro Pé-duro animals had greater levels of CD4, CD8 and &#947;&#948; lymphocytes (p<0.05). In response to vaccine, Curraleiro Pé-duro showed greater ability to respond specifically to BCG, generating resistance profile (Th1), evidenced by greater number of antigen specific CD4+ cells producing IFN-&#947; (p<0.05) and also higher tuberculin skin test reaction (p<0.05). Additionally, vaccinated Curraleiro Pé-duro calves had higher CD4 cells numbers than both Nellore control (p<0.05) and vaccinated groups (p<0.05). Curraleiro Pé-duro calves’ higher basal lymphocytes blood level and stronger response in both IFN-&#947; and tuberculin skin test parameters probably play a positive role on protection/resistance to Mycobacterium bovis.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Maggioli M.F., Lobo J.R., Fioravanti M.C.S., Kipnis A. & Junqueira-Kipnis A.P. 2013. Cellular immune response of Curraleiro Pé-duro and Nellore calves following Mycobacterium bovis-BCG vaccination. [Resposta imune celular de bezerros Curraleiro Pé-duro e Nelore após vacinação com Mycobacterium bovis-BCG.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(12):1403-1408. Laboratório de Imunopatologia das Doenças Infecciosas, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública, Rua Delenda Resende de Melo s/n, Setor Universitário, Goiânia, GO 74605050, Brazil. E-mail: apkipnis@gmail.com O presente estudo teve como objetivo avaliar níveis sanguíneos de células CD4, CD8 e &#947;&#948; no sangue periférico de bezerros Curraleiro Pé-Duro, bem como a produção específica de IFN-&#947; por essas células em resposta à vacinação com BCG, através de citometria de fluxo. A resposta imune específica contra BCG também foi avaliada por teste tuberculínico, realizado antes e 45 dias após a vacinação. Para fins de comparação, os mesmos parâmetros foram investigados em bezerros da raça Nelore, uma raça bovina exótica com resistência demonstrado anteriormente. Naturalmente, animais da raça Curraleiro Pé-Duro apresentaram maiores níveis de CD4, CD8 e linfócitos &#947;&#948;. Em resposta a vacina, Curraleiro Pé-duro mostrou maior capacidade de responder especificamente ao BCG, gerando perfil de resistência (Th1), evidenciado pelo maior número de células CD4+ específicas produtoras de IFN-&#947; e maior reação cutânea a por tuberculina. Os maiores níveis basais de linfócitos, maior produção de IFN-&#947; e reação cutânea à prova tuberculínica provavelmente desempenham um papel positivo na proteção/resistência ao Mycobacterium tuberculosis.


#4 - Analysis of direct and indirect methods for somatic cell counts in the milk of healthy goats, 30(4):311-316

Abstract in English:

ABSTRACT.- Madureira K.M., Gomes V., Castro R.S., Kitamura S.S. & Araújo W.P. 2010. [Analysis of direct and indirect methods for somatic cell counts in the milk of healthy goats.] Análise das metodologias diretas e indiretas para a contagem de células somáticas no leite de cabras hígidas. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(4):311-316. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 12-14, Sala 47, São Paulo, SP 05508-000, Brasil. E-mail: karinamedici@yahoo.com.br The particular apocrine secretion of goat milk different from the merocrine one observed in cows, may lead to errors in interpreting cellularity evaluations in the milk of this species. Thus, the objective of the present trial was to determine Somatic Cell Counts by means of one indirect methods, the California Mastitis Test (CMT), and direct methods, flow cytometry and direct microscopic count using methyl green-pyronine-Y stain, beyond comparing the methods of cellular counting. A total of 102 samples from 51 Saanen, Brown Alpine and Toggenburg female goats, bred in the state of São Paulo, were analyzed. Goats were separated in groups according to the phase of lactation and to physical examination of the mammary gland, and milk examination. Samples were divided into two aliquots, and were collected after California Mastitis Test evaluation. One aliquot was used in automatic cell counts, and the other, in direct microscopic count using methyl green-pyronine-Y stain. CMT results were as follows: 74.5% of the samples were negative, 8.8% yielded traces, 8.8% were weak positive (1), 6.8% were distinct positive (2) and 0.9% were strong positive (3). Medians of somatic cell counts in goat milk as evaluated by means automatic cell counter and direct microscopy, and grouped according to the different CMT scores, were as follows: 181,000, 578,000, 628,000, 1,421,500, and 5,542,000 cells/mL of milk and 74,991, 271,396, 71,420, 640,995, and 5,049,394 cells/mL of milk in scores negative, traces, 1, 2 and 3, respectively. Medians obtained in automatic cell counts and direct microscopic counts, grouped according to the phase of lactation were 159,500; 508,000; and 277,500 cells/mL of milk and 62,493; 89,275; and 146,411 cells/ml of milk, respectively. The correlation between the automatic and microscopic methods for somatic cell counts was 88%. Based on the results obtained, it could be concluded that there were differences between the automatic and microscopic methods for somatic cell counts, being this most adequate for the determination of the celularidade in the cellularity of goat milk.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Madureira K.M., Gomes V., Castro R.S., Kitamura S.S. & Araújo W.P. 2010. [Analysis of direct and indirect methods for somatic cell counts in the milk of healthy goats.] Análise das metodologias diretas e indiretas para a contagem de células somáticas no leite de cabras hígidas. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(4):311-316. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Orlando Marques de Paiva 87, Bloco 12-14, Sala 47, São Paulo, SP 05508-000, Brasil. E-mail: karinamedici@yahoo.com.br A particularidade da secreção láctea caprina, do tipo apócrina, diferente da secreção merócrina da vaca, leva a erros de interpretação durante a realização de técnicas de avaliação da celularidade do leite de fêmeas desta espécie. Portanto, o presente trabalho teve o objetivo de determinar a contagem de células somáticas pelo método indireto California Mastitis Test (CMT), e por métodos diretos, incluindo a contagem por citometria de fluxo e a contagem microscópica direta, através da coloração de verde de metil e pironina-Y, além de comparar os métodos de contagem celular. Foram analisadas 102 amostras de 51 fêmeas caprinas, das raças Saanen, Parda Alpina e Toggenburg, criadas no Estado de São Paulo. Os animais foram categorizados segundo a fase da lactação, exame físico da glândula mamária e exame do leite. As amostras foram colhidas, após a realização do exame Califórnia Mastitis Test, em duas alíquotas, uma destinada à contagem celular automática e a outra, a contagem microscópica direta, utilizando-se o corante verde de metil e pironina-Y. De acordo com os diferentes escores do CMT, observou-se 74,5% de amostras negativas, 8,8% de amostras com escore traços, 8,8% de amostras ligeiramente positivas (+), 6,8% de amostras fracamente positivas (++) e 0,9% de amostras fortemente positivas (+++). Os valores medianos das contagens de células somáticas presentes no leite de cabras, avaliadas através de contador automático e microscopia direta, e analisadas de acordo com os diferentes escores do CMT, foram, respectivamente, 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 e 5.542.000 células/mL de leite e 74.991, 271.396, 71.420, 640.995 e 5.049.394 células/mL de leite, nos escores negativo, traços, +, ++ e +++. Os valores medianos obtidos através da contagem de células somáticas pelo método automático e microscópico direto, de acordo com as fases de lactação foram de 159.500, 508.000 e 277.500 células/mL de leite, e 62.493, 89.275 e 146.411. A correlação obtida entre a contagem celular automática e microscópica direta foi de 88%. A partir dos resultados observados pode-se concluir que existe diferença na contagem celular determinada através do método automático e microscópico sendo este último o mais adequado para a determinação da celularidade no leite de cabras.


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