PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

This study aimed to determine the erythrocyte phenotypes of the feline AB system and to check the presence of antigens other than those present in the feline AB system in domestic cats from Ilhéus-Itabuna microregion, Bahia, Brazil. Three-hundred feline blood samples were collected at the Veterinary Hospital of the “Universidade Estadual de Santa Cruz” (UESC) and in home visits to perform blood phenotyping using the tube-method testing. The reverse phenotyping was made between cats that tested phenotype B with blood samples of cats that tested phenotype A to confirm the blood phenotype B. The cross-tested among cats with phenotype A was made in order to verify the presence of different antigens of AB system in this blood phenotype. The results underwent macroscopic and microscopic analyses. Among the 300 animals tested, regarding breed, 290 were mixed-breed cats and among the remaining ten, five were Persians, four Siamese, and one Angora. 297 (99%) presented with phenotype A (including all the breeding cats) and three (1%) with phenotype B, and all this cats were mixed-breed cats. None (0%) of the cats showed the phenotype AB. All phenotype B bloods reacted to reverse phenotyping with phenotype A, confirming the phenotype B of these cats. All phenotype A bloods were compatible among each other, so no further erythrocyte antigens were detected through this test. The mother of one of the phenotype B cats was identified and had phenotype A, demonstrating phenotype A parents with phenotype B offspring. This finding indicates heterozygosis in the studied population. This data enable to conclude that the studied population presented different erythrocyte phenotypes, subsequently highlighting the importance of conducting phenotype analyses in these animals before performing blood transfusion to avoid serious hemolytic complications associated with incompatibility.

• Erythrocyte phenotyping feline AB system domestic cats Brazil alloantibodies blood cells blood type blood transfusion cats

Abstract in Portuguese:

O objetivo deste estudo foi determinar a frequência dos fenótipos eritrocitários do sistema AB felino e verificar a presença de outros antígenos, não pertencentes ao sistema AB felino, em gatos domésticos das cidades de Ilhéus e Itabuna, Bahia, Brasil. Amostras de sangue de 300 gatos foram coletadas no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC) e em visitas domiciliares para realizar a fenotipagem sanguínea usando o método de tubo. A fenotipagem reversa foi realizada em gatos que testaram o fenótipo B com amostras que testaram o fenótipo A, para confirmação do fenótipo sanguíneo. O teste cruzado foi realizado entre gatos do fenótipo A, para pesquisar a presença de diferentes antígenos do sistema AB dentro desse fenótipo sanguíneo. Os resultados foram submetidos a análises macroscópicas e microscópicas. Dos 300 animais testados, 110 eram machos e 190 fêmeas, e suas idades variaram de cinco meses à 15 anos. Sobre as raças, 290 eram gatos sem raça definida e dos 10 restantes, cinco eram Persas, quatro eram Siameses e um Angorá. 297 (99%) apresentaram fenótipo A (incluindo todos os gatos de raça) e três (1%) tiveram fenótipo B, sendo todos esses gatos sem raça definida. Nenhum (0%) dos gatos apresentou fenótipo AB. Todos os sangues com fenótipo B reagiram na fenotipagem reversa com o fenótipo A, confirmando o fenótipo B desses gatos. Todos os sangues com fenótipo A foram compatíveis entre si, portanto nenhum antígeno eritrocitário adicional foi detectado através deste teste. A genitora de um dos gatos com fenótipo B, foi encontrada e a mesma possuía fenótipo A, demonstrando pais com fenótipo A e cria com fenótipo B. Esse achado indica heterozigose na população estudada. Esses dados levam à conclusão de que diferentes fenótipos eritrocitários estão presentes na população estudada e destacam a importância da realização de testes fenotípicos nesses animais antes dos procedimentos de transfusão, a fim de evitar complicações hemolíticas graves decorrentes do envolvimento de animais incompatíveis.

• Fenotipagem eritrocitária sistema AB felinos gatos domésticos Brasil aloanticorpos células sanguíneas tipo sanguíneo transfusão sanguínea gatos

Abstract in English:

This study aimed at performing cytometric phenotyping of the blood samples from free-living, young white-eyed parakeets (Psittacara leucophthalmus), stained with 3,3-dihexyloxacarbocyanine [DiOC6(3)]. DiOC6(3)-stained whole blood samples from 19 free-living, young white-eyed parakeets were analyzed by flow cytometry and cell types were distinguished by their typical fluorescence in blue laser channel (FL-1) and SSC (side scatter). It was possible to differentiate erythrocytes (58.3±13.6) from leukocytes (32.4±13.1) and some of the leucocyte subpopulations: lymphocytes/thrombocytes (29.7±7.7), monocytes (30.6±8.5), and granulocytes (5.9-26). However, lymphocytes and thrombocytes could not be sorted in the plots. Our study determined that the predominant population in white-eyed parakeet (P. leucophthalmus) was lymphocytes, thrombocytes, and monocytes in the leucocytes gates in comparison to the granulocyte population. The cytometry method and use of DiOC6(3) stain was available for parakeets blood samples and can be studied and applied to other species of parrots.

• White-eyed parakeet Psittacara leucophthalmus Psittaciformes avian flow cytometry blood cell phenotyping leukocytes DiOC6(3) wildlife animals

Abstract in Portuguese:

Este estudo teve como objetivo realizar a fenotipagem citométrica com 3,3-di-hexiloxacarbocianina [DiOC6 (3)] de amostras de sangue de maritacas jovens de vida-livre (Psittacara leucophthalmus). As amostras de sangue total, coradas com DiOC6(3) de 19 maritacas de vida livre, foram analisadas por citometria de fluxo e os tipos de células foram distinguidos por sua fluorescência típica no canal laser azul (FL-1) e SSC (dispersão lateral). Foi possível diferenciar eritrócitos (58,3±13,6) de leucócitos (32,4±13,1) e algumas subpopulações de leucócitos: linfócitos/trombócitos (29,7±7,7), monócitos (30,6±8,5) e granulócitos (5,9-26), entretanto, linfócitos e trombócitos não puderam ser diferenciados em duas populações distintas. Nosso estudo determinou que a população predominante P. leucophthalmus foi mononuclear agranulocítica em comparação com a taxa de aquisição da população granulocítica. A metodologia de citometria de fluxo com uso da coloração de DiOC6(3) foi aplicável a amostras sanguíneas das maritacas e pode ser estudado e aplicado para outras espécies de psitacídeos.

• Maritacas Psittacara leucophthalmus Psittaciformes aves citometria de fluxo fenotipagem leucócitos DiOC6(3) animais selvagens

Abstract in English:

The use of frozen cells allows studies on diseases and other immunological assays, since it facilitates the logistics of collecting and transporting, including laboratories located in different cities or other countries. The objectives of this study were to verify if the storage in the refrigerator after collection at different times changes the viability of total leukocytes after months of freezing and the ratio of CD4/CD8 is affected by the freezing process. Venous blood of 15 healthy horses was used and the experiment was divided into 2 stages. In the first, the viability of the leukocytes before and after freezing was verified, as well as different storage times in the refrigerator (fresh blood, stored for 24 and 48 hours) before the freezing process. In the second part, the immunophenotyping of the T lymphocytes was performed, in order to observe if after thawing the relationship between LT CD4 and LT CD8 undergoes change. There was no difference between the amounts of viable leucocytes from frozen fresh blood compared to fresh blood before freezing, nor difference between the viability of blood left in the refrigerator (4°C) for 24 hours and fresh blood and fresh frozen blood. There was a decrease in viability of frozen leukocytes after 48 hours left in the freezer for other samples; however, the recovery was 107x cells. Regarding the immunophenotyping of CD2CD4+ and CD2CD8+ double-labeled T lymphocytes in the blood stored in the refrigerator for 24 hours before freezing, no difference was observed between before and after 6 months of freezing. It is concluded that cryopreservation of equine total leukocytes is possible and, although there was a difference between freezing times, even in the less viable sample, sufficient numbers of cells were recovered for other immunological assays.

• Cryopreservation lymphocytes immunology horses immunophenotyping mononuclear cells

Abstract in Portuguese:

A utilização de células congeladas possibilita estudos sobre doenças e outros ensaios imunológicos, pois facilita a logística de coleta e transporte, inclusive para laboratórios localizados em cidades diferentes ou outros países. Os objetivos desse estudo foram verificar se o armazenamento sobre refrigeração em diferentes tempos e a criopreservação alteram a viabilidade de leucócitos totais e se a relação entre LT CD4/CD8 é afetada pelo processo de congelamento. Utilizou-se sangue venoso de 15 cavalos hígidos e o experimento foi dividido em 2 etapas. Na primeira foi analisado se houve alteração na viabilidade dos leucócitos provenientes de amostras de sangue armazenadas em diferentes tempos em geladeira antes e depois de 6 meses de congelamento a -80°C. Na segunda parte, realizou-se a imunofenotipagem dos linfócitos T, com a finalidade de observar se após o descongelamento a relação entre LT CD4 e LT CD8 sofre alteração. Não houve diferença entre a quantidade de leucócitos viáveis da amostra de sangue fresco descongelado em relação ao sangue fresco antes do congelamento, nem diferença entre a viabilidade do sangue deixado em congelador (4°C) por 24 horas e do sangue fresco. Houve uma diminuição da viabilidade dos leucócitos, após o descongelamento de 6 meses (-80°C), das amostras de sangue deixado em geladeira por 48 horas antes do congelamento em relação às outras amostras, porém, a recuperação foi de células x107. Quanto à imunofenotipagem de linfócitos T com dupla marcação CD2CD4+ e CD2CD8+, no sangue armazenado em geladeira por 24 horas antes do congelamento, e não foi observada diferença entre antes ou depois de 6 meses de congelamento. Conclui-se que a criopreservação de leucócitos totais de equinos é possível e, embora tenha havido diferença entre os tempos de congelamento, mesmo na amostra menos viável, houve recuperação de uma quantidade de células suficientes para outros ensaios imunológicos.

• Criopreservação linfócitos imunologia equinos imunofenotipagem células mononucleares

Abstract in English:

ABSTRACT.- Catoia J., Bianchi P.K.F.C., Bruno C.E.M., Carniatto C.H.O., Leandro R.M., Poscai A.N., Lima A.R. & Kfoury Junior J.R. 2016. [Phenotyping of the indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) positive lymphocytes in bovine placental cell culture.] Imunofenotipagem dos linfócitos positivos para indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) em cultura de células de placenta bovina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):345-350. Departamento de Cirurgia, Setor de Anatomia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508 270, Brazil. E-mail: jrobertok@usp.br Pregnancy is a physiological state that requires immune adaptation in order to be successfully carried on. During this period, mother and fetus establish an immune tolerance status at the maternal fetal interface. Indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) plays an important role in maternal-fetal tolerance by metabolizing tryptophan, impairs by several pathways, mainly T CD8 cells proliferation. Several cell types are present in the maternal fetal interface and several of them can express IDO. Leucocytes with Th1 produce a cytokine known as interferon &#947; that stimulates the expression of IDO in several cell types. Lymphocytes are divided into sub-populations according to their function and phenotype: T lymphocytes, B lymphocytes and natural killer cells (NK). Hormones also involved in this process where progesterone exerts decisive role on maternal immune response that may change gestational outcome and estrogen is essential for fetal maternal tolerance and maintenance of pregnancy. Therefore, the main objective of this study was to identify lymphocytes in the bovine placental cell culture that are sensitive to progesterone, estrogen and interferon &#947;, IDO expression in various gestational stages using flow cytometry. According to the results in the gestational period from 67.5 to 77.5 days with the addition of interferon &#947; expression IDO was slightly increased in TCD3 lymphocytes, CD4, and differently from the other T cells CD8 displayed an higher expression of the enzyme (4.48±2.12 to 8.65±4.91). In the period from 92.5 to 172. 5 days the CD4 lymphocytes, CD8 and TCD25 showed a significant decrease of IDO expression (p<0.05). At the final stages between 195 and 222, 5 days TCD3 lymphocytes, CD4 and BCD25 increased expression when subjected to interferon &#947; supplementation; however, CD8 T cells and NK cells showed no significant changes. Based on the results presented we can conclude that all cell types were able to express IDO by supplementation with interferon &#947;, and that T CD8 lymphocyte showed an highly significant increase of IDO expression, whereas estrogen increased the expression of IDO only in B lymphocytes (CD25), and progesterone decreased enzyme expression in T lymphocytes (CD3 and CD4) and in NK cells. These results suggest a regulatory mechanism of the immunological system by steroidal hormones during gestation, particularly by modulating IDO expression.

• Placenta indoleamine 2 3 dioxygenase lymphocytes indoleamina 2 3 dioxigenase. linfócitos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Catoia J., Bianchi P.K.F.C., Bruno C.E.M., Carniatto C.H.O., Leandro R.M., Poscai A.N., Lima A.R. & Kfoury Junior J.R. 2016. [Phenotyping of the indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) positive lymphocytes in bovine placental cell culture.] Imunofenotipagem dos linfócitos positivos para indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) em cultura de células de placenta bovina. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):345-350. Departamento de Cirurgia, Setor de Anatomia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508 270, Brazil. E-mail: jrobertok@usp.br A gestação é um estado fisiológico que exige adaptações imunológicas para que transcorra normalmente. Nesse período a mãe e o feto apresentam uma relação imunológica, ou seja, a interface materno fetal. A enzima indoleamina 2,3 dioxigenase (IDO) desempenha um papel importante na tolerância materno fetal, por ser responsável pela metabolização do triptofano, impedindo por diversas vias a proliferação principalmente de linfócitos TCD8. Diversos tipos celulares estão presentes na interface materno fetal e vários deles podem expressar a IDO. Os leucócitos com perfil Th1 produzem uma citocina conhecida: o interferon &#947; que estimula a expressão da IDO em vários tipos celulares. Os linfócitos são divididos em subpopulações de acordo com sua função e fenótipo. Seus tipos incluem linfócitos T, linfócitos B e as células natural killer (NK). Hormônios também atuam nesse processo a progesterona que exerce função determinante sobre a resposta imunológica materna podendo alterar o prognóstico gestacional e o estrógeno essencial para a tolerância materno fetal e manutenção da prenhez. Dessa maneira este trabalho tem por objetivo principal identificar os linfócitos presentes na placenta bovina em cultivo que expressam IDO (linfócitos T, linfócitos B e células NK), frente a estimulação por progesterona, estrógeno e interferon &#947; nas diversas fases gestacionais utilizando a citometria de fluxo. Segundo os resultados no período de 67,5 a 77, 5 dias com a adição de interferon &#947; a expressão da enzima IDO aumentou discretamente nos linfócitos TCD3, TCD4, e diferente dos linfócitos T CD8 apresentaram uma elevada expressão da enzima (4,48 ± 2,12 – 8,65± 4,91). No período de 92,5 a 172, 5 dias os linfócitos TCD4, TCD8 e TCD25 apresentaram uma diminuição da IDO. No período final de 195 a 222,5 dias, os linfócitos TCD3, TCD4 e os BCD25 aumentaram a expressão da IDO quando submetidos ao interferon &#947;, no entanto, os linfócitos T CD8 e as células NK não apresentaram alterações significativas. Com base nos resultados apresentados pode-se concluir que todos os tipos celulares foram capazes de expressar a IDO mediante a suplementação com interferon &#947;, sendo que o linfócito T CD8 apresentou uma diferença bastante significativa quanto ao aumento da IDO, já o estrógeno elevou a expressão da IDO somente nos linfócitos B (CD25) e a progesterona diminuiu a expressão da enzima nos linfócitos T (CD3 e CD4) e nas células NK. Estes resultados sugerem um mecanismo de regulação do sistema imunológico desempenhado pelos hormônios esteroides presentes durante o processo gestacional, particularmente pela modulação da expressão da IDO.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Tchamo C.C.M., Santos I.F.C., Morato F.M.C., Godoy R.F., Garrine C.L.M.P. & Santana A.E. 2014. [Imunophenotyping avaliation of lymphocyte subsets in cord blood and peripheral blood of newborn piglets (Sus scrofa).] Avaliação imunofenotípica de subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico de suínos neonatos (Sus scrofa). Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):385-389. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior, s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: ivansantos7@hotmail.com Considering the importance of umbilical cord blood as a potential source of stem cell and, on the other hand, the use of the domestic swine (Sus scrofa) as a useful model for biomedical research in regenerative medicine and aiming to contribute about the quantification of lymphocyte subsets in umbilical cord blood and peripheral blood of newborn piglets, this study aimed to quantify CD4+, CD5+ and CD8+ cells from umbilical cord blood and peripheral blood from pigs at term blood samples. Were analyzed samples of the umbilical cord blood and peripheral of 48 piglets of Topigs lineage, from healthy mothers, artificially inseminated and natural birth. Blood samples were collected from the umbilical cord at birth, by the umbilical vein, and peripheral blood by venous sinus retro-ophthalmic. The immunological measurements of CD4+, CD5+ and CD8+ were obtained by flow cytometry. The relative average values for the CD4+, CD5+ e CD8+ counts in umbilical cord blood and peripheral blood of newborn piglets were inferior to those reported for peripheral blood in adult pigs, suggesting immunological immaturity. The ratio CD4+:CD8+ in umbilical cord blood (3.2±1.2%) and peripheral blood (3.2±1.7%) showed a predominance of TCD4+ over TCD8+. The percentage of CD4+ and CD8+ cells was 1.37±0.86% and 1.15±0.57%, respectively, in umbilical cord blood and peripheral blood.

• Cytometry lymphocytes immunophenotyping citometria linfócitos imunofenotipagem

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Tchamo C.C.M., Santos I.F.C., Morato F.M.C., Godoy R.F., Garrine C.L.M.P. & Santana A.E. 2014. [Imunophenotyping avaliation of lymphocyte subsets in cord blood and peripheral blood of newborn piglets (Sus scrofa).] Avaliação imunofenotípica de subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico de suínos neonatos (Sus scrofa). Pesquisa Veterinária Brasileira 34(4):385-389. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior, s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: ivansantos7@hotmail.com Considerando a importância do uso do sangue do cordão umbilical como fonte potencial de células tronco hematopoiéticas e o uso do suíno doméstico (Sus scrofa) como modelo para pesquisas biomédicas em medicina regenerativa, e por outro lado, visando dar um contributo sobre a quantificação das subpopulações linfocitárias no sangue do cordão umbilical e periférico, objetivou-se quantificar as células CD4+, CD5+ e CD8+ nas amostras de sangue de suínos neonatos. Analisaram-se as amostras do sangue do cordão umbilical e periférico de 48 leitões de linhagem Topigs, provenientes de porcas hígidas, inseminadas artificialmente e de parto natural. Foram coletadas amostras de sangue do cordão umbilical e periférico no momento do nascimento, por meio de venopunção da veia umbilical e seio venoso retro-oftálmico, respectivamente. As quantificações imunofenotípicas de células CD4+, CD5+ e CD8+ foram obtidas por citometria de fluxo. Os valores médios obtidos para as contagens das células CD4+, CD5+ e CD8+ do sangue do cordão umbilical e periférico apresentaram-se inferiores aos reportados para o sangue periférico de suínos adultos, sugerindo um componente imunológico imaturo. A proporção CD4+:CD8+ obtida no sangue do cordão umbilical (3,2±1,2%) e no sangue periférico (3,2±1,7%) ilustrou a predominância dos linfócitos TCD4+ com relação aos TCD8+. A quantidade relativa de células CD4+ e CD8+ no sangue do cordão umbilical e periférico foi de 1,37±0,86% e 1,15±0,57%, respectivamente.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Moraes J.M., Brito L.A.B., Moura V.M.B.D., Ribeiro C.S., Guimarães V.Y., Andrade D.F., Lobo J.R. & Fioravanti M.C.S. 2009. [Immunophenotyping and quantitative evaluation of circulating lymphocytes of cattle of the Curraleiro breed.] Imunofenotipagem e avaliação quantitativa de linfócitos circulantes de bovinos da raça Curraleiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(4):339-344. Escola de Veterinária, Universidade Federal de Goiás, Campus Samambaia, Cx. Postal 131, Goiânia, GO 74001-970, Brazil. E-mail: mmjulia_vet@yahoo.com.br The aim of this study was to establish an immunological profile by marking and quantification of T and B lymphocytes in Curraleiro breed by immunocytochemistry. A total of 116 cattle was used, males and females of different ages, from two farms situated in the Goiás State, Brazil. The animals were allotted into groups according to age, sex and origin. Blood samples were collected and processed in accordance with immunocytochemistry standard technique using lymphoid markers species-specific, as anti-CD3 (MM1A - BoCD3) and anti-LB (LCTB16A-clone B-B14), for T and B lymphocyte counting, respectively. The data were submitted to descriptive statistics, and to Kruskall Wallis and Mann-Whitney tests. The results showed decreased levels of leukocytes, lymphocytes, T lymphocytes and B lymphocytes along the age advance. Absolute values of leukocytes, lymphocytes and T lymphocytes were higher in males than females. None of the evaluated parameters were affected by differences of the management carried out at the two farms.

• Immunocytochemistry CD3 T lymphocytes B lymphocytes immunological profile

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Moraes J.M., Brito L.A.B., Moura V.M.B.D., Ribeiro C.S., Guimarães V.Y., Andrade D.F., Lobo J.R. & Fioravanti M.C.S. 2009. [Immunophenotyping and quantitative evaluation of circulating lymphocytes of cattle of the Curraleiro breed.] Imunofenotipagem e avaliação quantitativa de linfócitos circulantes de bovinos da raça Curraleiro. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(4):339-344. Escola de Veterinária, Universidade Federal de Goiás, Campus Samambaia, Cx. Postal 131, Goiânia, GO 74001-970, Brazil. E-mail: mmjulia_vet@yahoo.com.br The aim of this study was to establish an immunological profile by marking and quantification of T and B lymphocytes in Curraleiro breed by immunocytochemistry. A total of 116 cattle was used, males and females of different ages, from two farms situated in the Goiás State, Brazil. The animals were allotted into groups according to age, sex and origin. Blood samples were collected and processed in accordance with immunocytochemistry standard technique using lymphoid markers species-specific, as anti-CD3 (MM1A - BoCD3) and anti-LB (LCTB16A-clone B-B14), for T and B lymphocyte counting, respectively. The data were submitted to descriptive statistics, and to Kruskall Wallis and Mann-Whitney tests. The results showed decreased levels of leukocytes, lymphocytes, T lymphocytes and B lymphocytes along the age advance. Absolute values of leukocytes, lymphocytes and T lymphocytes were higher in males than females. None of the evaluated parameters were affected by differences of the management carried out at the two farms.