Resultado da pesquisa (16)
Termo utilizado na pesquisa pathogens
#1 - Streptococcus lutetiensis and Streptococcus equinus as potential emerging bovine mastitis pathogens
Abstract in English:
The current study characterizes the genetic distribution of virulence and antimicrobial resistance of Streptococcus lutetiensis and Streptococcus equinus isolated from cows with clinical mastitis using whole genome sequencing (WGS). Although they are not the protagonist species within the genus Streptococcus, recent studies have isolated these species associated with bovine mastitis. In addition, these species are reported and isolated from humans and other animals. A total of four strains of S. lutetiensis and one of S. equinus were isolated from five cows with identified cases of clinical mastitis at a dairy farm near Ithaca, New York. Nineteen genes associated with antimicrobial resistance and 20 genes associated with virulence were identified in the analyzed strains. All strains presented genes associated with resistance: alr, ddl, gdpD, kasA, murA, lsa(E), msr(D), mef(A), gidB, and LiaF. Resistance genes associated with several different classes of antibiotics have also been reported. Sixteen virulence-associated genes were identified in all strains. Based on our findings, we conclude that the studied species have the potential to cause mastitis in cattle, and further studies are important to elucidate their role.
Abstract in Portuguese:
O presente estudo caracteriza a distribuição genética de virulência e resistência antimicrobiana de Streptococcus lutetiensis e Streptococcus equinus isolados de vacas com mastite clínica usando sequenciamento completo do genoma. Apesar de não serem as espécies protagonistas dentro do gênero Streptococcus, estudos recentes têm isolado essas espécies associadas à mastite bovina. Além disso, essas espécies são relatadas e isoladas de humanos e outros animais. Um total de quatro cepas de S. lutetiensis e uma de S. equinus foram isoladas de cinco vacas com casos identificados de mastite clínica em uma fazenda leiteira perto de Ithaca, Nova York. Dezenove genes associados à resistência antimicrobiana e 20 genes associados à virulência foram identificados nas cepas analisadas. Todas as linhagens apresentaram genes associados à resistência: alr, ddl, gdpD, kasA, murA, lsa(E), msr(D), mef(A), gidB e LiaF. Genes de resistência associados a várias classes diferentes de antibióticos também foram relatados. Dezesseis genes associados à virulência foram identificados em todas as cepas. Com base em nossos achados, concluímos que as espécies estudadas têm potencial para causar mastite em bovinos e mais estudos são importantes para elucidar seu papel.
#2 - Investigation of enterobacteria with zoonotic and multi-resistant potential in exotic parrots kept in a domestic environment
Abstract in English:
This investigation elucidated the presence of potentially zoonotic and antimicrobial-resistant bacteria in domestically reared psittacines. The present study was sanctioned by the Animal Ethics Committee of the State University of Ceará (CEUA-UECE) and bears registration number 03423745/2023. A total of 111 cloacal swab samples were procured from exotic psittacines encompassing six distinct species: the Australian budgerigar (Melopsittacus undulatus), cockatiels (Nymphicus hollandicus), lovebirds (Agapornis sp.), rose-ringed parakeets (Psittacula krameri), red-rumped parrots (Psephotus haematonotus), and rosellas (Platycercus eximius). The process encompassed the isolation and characterization of enterobacteria and ascertaining their resistance profiles. Among the collected specimens, 70.2% (78/111) yielded growth indicative of one or more enterobacterial agents. The collective isolates comprised 110 strains encompassing 13 distinct bacterial species. Foremost among these was Escherichia coli, accounting for a significant percentage of the total isolates at 30% (33/110), followed by Pantoea agglomerans at 27.2% (30/110). The study revealed that 35.4% (39/110) of the isolates exhibited resistance to tobramycin, with tetracycline and fosfomycin showing resistance rates of 34.5% (38/110) and 30.9% (34/110), respectively. Particularly noteworthy was that E. coli showed a heightened propensity for tetracycline resistance at 51.5% (17/33), while resistance rates to tobramycin and gentamicin were 36.6% (12/33) and 15.1% (5/33), respectively. A noteworthy subset of the enterobacterial cohort exhibited multidrug resistance patterns (28.9%, 32/110). Collectively, these outcomes underscore not only an elevated prevalence of enterobacterial strains but also the pervasive phenomenon of antimicrobial resistance across a diverse spectrum of antimicrobial agents.
Abstract in Portuguese:
Este estudo investigou a presença de bactérias potencialmente zoonóticas e resistentes a antimicrobianos em psitacídeos criados em ambiente doméstico. Esse projeto foi aprovado pela Comissão de Ética para o Uso de Animais da Universidade Estadual do Ceará (CEUA-UECE), registrado sob o número 03423745/2023. Foram coletadas 111 amostras de suabes cloacais de psitacídeos exóticos de seis espécies, incluindo, periquitos-australianos (Melopsittacus undulatus), calopsitas (Nymphicus hollandicus), agapornis (Agapornis sp.), periquitos-de-colar (Psittacula krameri), periquitos-dorso-vermelho (Psephotus haematonotus) e roselas (Platycercus eximius). Foi realizado o isolamento e a identificação de enterobactérias e determinado o perfil de resistência. Das amostras coletadas, 70,2% (78/111) apresentaram crescimento para uma ou mais enterobactérias. Foram isoladas 110 cepas pertencentes a 13 espécies bacterianas. Escherichia coli apresentou o maior índice de isolamento, com 30% (33/110). Em segundo lugar Pantoea agglomerans, com um percentual de isolamento de 27,2% (30/110). Observou-se que 35,4% (39/110) das enterobactérias apresentaram resistência à tobramicina, seguidas da tetraciclina com 34,5% (38/110) e da fosfomicina com 30,9% (34/110). E. coli apresentou maior taxa de resistência a tetraciclina com 51,5% (17/33), seguida de 36,6% (12/33) para tobramicina e 15,1% (5/33) para gentamicina. Das enterobactérias analisadas 28,9% (32/110), apresentaram multirresistência. Os resultados indicam uma alta prevalência de enterobactérias, a resistência antimicrobiana foi constatada em diversas classes de antimicrobianos.
#3 - Unveiling Trypanosoma spp. diversity in cattle from the state of Rio de Janeiro: A genetic perspective
Abstract in English:
Cattle trypanosomiasis imposes significant economic burdens on the global livestock industry. The causative agents of this disease belong to the protozoan Trypanosoma genus. This study aims to perform detection (parasitological and molecular) and genetic characterization to analyze Trypanosoma spp. in cattle from 15 municipalities in the state of Rio de Janeiro, focusing on the 18S rDNA and Cathepsin-L (CatL) gene of Trypanosoma vivax and Trypanosoma theileri. A total of 389 blood samples from 15 dairy cattle farms in the state of Rio de Janeiro were collected, and DNA was extracted for subsequent PCR amplification of Trypanosoma spp. 18S rDNA and CatL genes. The resulting amplicons underwent sequencing and alignment for phylogenetic analysis, with comparisons made to GenBank isolates. Concerning parasitological analysis, blood smears presented 4.4% of positive cattle (n=17/389) for T. vivax and did not show any trypomastigote forms of T. theileri. The absolute frequency of Trypanosoma spp. through molecular detection targeting 18S rDNA was 11.6% (45/389). However, when performing species-specific PCRs, the T. vivax frequency, determined through CatL gene PCR, was 12.8%, and the T. theileri frequency was 3.6%. Phylogenetic analysis based on 18S rDNA revealed low diversity among T. vivax sequences, suggesting potential host segregation. This study emphasizes the high frequency of positive samples by PCR when compared to direct parasitological exams. Additionally, T. vivax phylogeny targeting 18S rDNA hints at sequence clustering related to host species. Importantly, this investigation unveils, for the first time in Rio de Janeiro’s cattle, the circulation of T. theileri lineage ThI, encompassing genotypes IIB and IF. This discovery expands our understanding of this parasite’s geographical distribution and genetic diversity.
Abstract in Portuguese:
A tripanossomíase bovina impõe significativos ônus econômicos à indústria pecuária global. Os agentes causadores dessa doença pertencem a protozoários do gênero Trypanosoma. Objetivou-se, com este estudo, realizar detecção (parasitológica e molecular) e caracterização genética de Trypanosoma spp. em bovinos de 15 municipalidades do estado do Rio de Janeiro, com foco na sequência 18S rDNA e no gene Cathepsin-L (CatL) de Trypanosoma vivax e Trypanosoma theileri. Um total de 389 amostras de sangue de 15 fazendas leiteiras no estado do Rio de Janeiro foram coletadas, e o DNA foi extraído para subsequente amplificação por PCR dos genes 18S rDNA e CatL de Trypanosoma spp. Os amplicons resultantes foram submetidos a sequenciamento e alinhamento para análise filogenética, com comparações realizadas com isolados do GenBank. No que se refere à análise parasitológica, os esfregaços de sangue apresentaram 4,4% de bovinos positivos (n=17/389) para T. vivax e não mostraram nenhuma forma tripomastigota de T. theileri. A frequência absoluta de Trypanosoma spp. através da detecção molecular visando 18S rDNA foi de 11,6% (45/389). No entanto, ao realizar PCRs específicos de espécies, a frequência de T. vivax, determinada por PCR do gene CatL foi de 12,8%, e a frequência de T. theileri foi de 3,6%. A análise filogenética com base no 18S rDNA revelou baixa diversidade entre as sequências de T. vivax, sugerindo uma possível segregação de hospedeiros. Este estudo enfatiza a alta frequência de amostra positiva pela PCR quando comparada com a parasitológica direta. Além disso, a filogenia de T. vivax direcionada ao 18S rDNA sugere agrupamento de sequências relacionado à espécie hospedeira. Importante destacar que esta investigação revela, pela primeira vez no gado do Rio de Janeiro, a circulação da linhagem ThI de T. theileri, abrangendo os genótipos IIB e IF. Esta descoberta amplia nosso entendimento sobre a distribuição geográfica e diversidade genética desse parasito.
#4 - Jaundice in cats: Causes and post-mortem findings in 44 cases
Abstract in English:
The aim of this study was to describe the pathological findings and causes of jaundice in 44 cats (Felis catus) over a six-year period. The cats were from two Brazilian metropolitan areas: 34.1% were female, 56.8% were male, and 9.1% had no information regarding their sex. Their ages ranged from 6 months to 13 years. Most of the cats examined were of a mixed breed (40/44), whereas the others were Angora (2/44), Oriental Short Hair (1/44) and Persian (1/44). All animals had mild to marked jaundice, and 39 were diagnosed with mild to marked anemia. The classification of icterus types (pre-hepatic, hepatic and post-hepatic) was based on gross and microscopic findings. Of the 44 animals, 10 were classified as pre-hepatic icterus, 33 with hepatic icterus and seven with post-hepatic icterus. In some cats, two types of icterus were found, of which five were classified as pre-hepatic and hepatic icterus, and one case was hepatic and post-hepatic icterus. According to the gross and microscopic findings, the cause of pre-hepatic icterus was idiopathic hemolytic anemia. The most frequent cause of hepatic icterus was hepatic lipidosis (26/44), followed by perihepatitis and hepatitis compatible with feline infectious peritonitis, lymphoma, glycogenic degeneration, cholangiocarcinoma and metastatic myeloid leukemia. In animals with post-hepatic icterus, the causes included cholangitis due to Platynosomum spp. infection, cholangioma of the common hepatic duct, and chronic cholangitis. Understanding the etiopathogenesis of jaundice requires an accurate clinic-pathological study and concomitant causes of the disease in cats should be considered.
Abstract in Portuguese:
O objetivo deste estudo foi descrever os achados patológicos e as causas da icterícia em 44 gatos (Felis catus), durante um período de seis anos. Os gatos eram provenientes de duas regiões metropolitanas brasileiras; 34,1% eram fêmeas, 56,8% eram machos e 9,1% não tinham informação sobre o sexo. A idade variou de 6 meses a 13 anos. A maioria dos gatos examinados era de raça mista (40/44), enquanto os restantes eram Angorá (2/44), Oriental de pelo curto (1/44) e Persa (1/44). Todos os gatos apresentavam icterícia leve a acentuada e 39 foram diagnosticados com anemia discreta a grave. A classificação dos tipos de icterícia (pré-hepática, hepática e pós-hepática) baseou-se em achados macroscópicos e microscópicos. Dos 44 animais, 10 foram classificados como icterícia pré-hepática, 33 com icterícia hepática e sete com icterícia pós-hepática. Contudo, em alguns gatos, foram encontrados dois tipos de icterícia, cinco dos quais foram classificados como icterícia pré-hepática e hepática e um caso como icterícia hepática e pós-hepática. De acordo com os achados macroscópicos e microscópicos, a causa da icterícia pré-hepática foi anemia hemolítica idiopática. A causa mais frequente de ícterícia hepática foi a lipidose hepática (26/44), seguida de peri-hepatite e hepatite compatível com peritonite infecciosa felina, linfoma, degeneração glicogênica, colangiocarcinoma e leucemia mieloide metastática. Nos gatos com icterícia pós-hepática, as causas incluíram colangite devida a infecção por Platynosomum spp., colangioma do ducto hepático comum e colangite crônica. Atualmente, a compreensão da etiopatogenia da icterícia requer um estudo clínico-patológico preciso e causas concomitantes da doença em gatos devem ser consideradas.
#5 - Occurrence of pathogens transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato ticks in dogs in the semiarid region of Rio Grande do Norte state, Brazil
Abstract in English:
The aim of this study was to determine the occurrence of infection by Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Babesia vogeli, and Hepatozoon canis in dogs from the semiarid region of Rio Grande do Norte state. Also, we evaluated the characteristics that favor the infection by E. canis and the presence of Rhipicephalus sanguineus s.l. ticks. For that, 120 dogs were included, from which blood samples were collected for DNA extraction and molecular diagnosis of these four pathogens. Anamnesis and physical examination were performed on each patient, and all properties were characterized. Chi-square and Fisher’s exact tests were used to verify the association of the studied variables. The most prevalent pathogen in the study was E. canis (13.3%), followed by A. platys (11.7%), H. canis (6%) and B. vogeli (6%). Correspondence analysis performed between E. canis positivity and the variables studied showed the influence of factors such as tick history, non-vaccination and non-use of antiparasitic medications. The main environmental factor observed in the infection by E. canis was the presence of trees and vegetation in the residences. Recognizing these characteristics can help elaborate prevention and control strategies since environmental management activities seek to reduce the interaction between vector and host and, consequently, the exposure to diseases.
Abstract in Portuguese:
O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de infecção por Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Babesia vogeli e Hepatozoon canis em cães da região semiárida do estado do Rio Grande do Norte. Ainda, foram avaliadas as características que favorecem a infecção por E. canis e a presença de carrapatos Rhipicephalus sanguineus s.l. Para tanto, foram incluídos 120 cães, dos quais foram coletadas amostras de sangue para extração de DNA e diagnóstico molecular desses quatro patógenos. Foi realizada anamnese e exame físico de cada paciente e todas as propriedades foram caracterizadas. Os testes Qui-quadrado e exato de Fisher foram utilizados para verificar a associação das diferentes variáveis estudadas. O patógeno de maior prevalência no estudo foi E. canis (13,3%), seguido por A. platys (11,7%), H. canis (6%) e B. vogeli (6%). A análise de correspondência realizada entre a positividade de E. canis e as variáveis estudadas, demonstrou influência de fatores como histórico de carrapatos, ausência de vacinação e ausência de uso de medicações antiparasitárias. Os principais fatores ambientais observados na infecção por E. canis foram a presença de árvores e jardins nas residências. O reconhecimento dessas características pode auxiliar na elaboração de estratégias de prevenção e controle, visto que atividades de manejo ambiental buscam reduzir a interação entre vetor e hospedeiro e, consequentemente, a exposição a doenças.
#6 - Co-infection by tick-borne pathogens and Leishmania spp. in dogs with clinical signs suggestive of leishmaniasis from an endemic area in northeastern Brazil
Abstract in English:
The present study aimed to investigate the occurrence of Leishmania spp., hemotropic Mycoplasma spp., tick-borne pathogens (TBP), and co-infection in dogs with clinical signs suggestive of visceral leishmaniasis (VL). It also aimed to determine the factors associated with infection and to map the distribution of co-infected dogs in an endemic area in the Northeast region of Brazil. Blood samples from 168 dogs were evaluated for serological analysis to Leishmania spp., Anaplasma spp., Ehrlichia spp., Babesia spp., and molecular assays to Leishmania spp., Anaplasma platys, Ehrlichia canis, Babesia spp., and hemotropic Mycoplasma spp. In serological and molecular analysis, 29.8% and 5.9% of dogs were co-infected. In the regression analysis, seropositivity for Ehrlichia spp., Babesia spp., and Leishmania spp. was significantly associated with the presence of petechiae, young dogs, and weight loss. Serology revealed that co-exposure with Babesia spp. and Ehrlichia spp. was associated with fever and thrombocytopenia, and there was an association between seropositivity for Ehrlichia spp. and Babesia spp. in dogs seropositive for Leishmania spp. The presence of hemotropic Mycoplasma spp. DNA was associated with anorexia. Thus, dogs with clinical VL have co-infection with other pathogens, reinforcing the importance of this study for a better understanding of these co-infections in dogs from endemic areas.
Abstract in Portuguese:
O presente estudo objetivou investigar a prevalência de Leishmania spp., Mycoplasma spp. hemotrópico, patógenos transmitidos por carrapatos (PTC), e coinfecção em cães com sinais clínicos sugestivos de leishmaniose visceral (LV), determinar os fatores associados à infecção, e mapear a distribuição de cães coinfectados em uma área endêmica no Nordeste do Brasil. Amostras de sangue de 168 cães foram avaliadas por análises sorológicas para Leishmania spp., Anaplasma spp., Ehrlichia spp., Babesia spp., e ensaio molecular para Leishmania spp., Anaplasma platys, Ehrlichia canis, Babesia spp., e Mycoplasma hemotrópico. Pelas análises sorológicas e moleculares, 29,8% e 5,9% dos cães apresentaram coinfecção, respectivamente. Na análise de regressão, a soropositividade para Ehrlichia spp., Babesia spp., e Leishmania spp. foram significantemente associadas com a presença de petéquias, cães jovens, e perda de peso. O diagnóstico sorológico revelou que a coexposição à Babesia spp. e Ehrlichia spp. está associada com febre e trombocitopenia, havendo associação entre a soropositividade para Ehrlichia spp. e Babesia spp. em cães soropositivos para Leishmania spp. A presença de DNA de Mycoplasma foi associada à anorexia. Desta forma, cães com sinais de LV possuem coinfecção com outros patógenos, reforçando a importância deste estudo para um melhor entendimento dessas coinfecções em cães de áreas endêmicas.
#7 - Phenotypic and molecular characterization of erythromycin resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli strains isolated from swine and broiler chickens
Abstract in English:
Campylobacter spp. is a bacterial agent that causes gastroenteritis in humans and may trigger Guillain-Barré Syndrome (GBS) and is also considered one of the main foodborne diseases in developed countries. Poultry and pigs are considered reservoirs of these microorganisms, as well as raw or undercooked by-products are often incriminated as a source of human infection. Treatment in human cases is with macrolide, such erythromycin, that inhibits the protein synthesis of the microorganism. This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from intestinal content samples of broiler chickens (n=20) and swine (n=30) to characterize the erythromycin resistance profile of the strains and to detect molecular mechanisms involved in this resistance. The minimum inhibitory concentration was determined by agar dilution. The Mismatch Amplification Mutation Assay-Polymerase Chain Reaction (MAMA-PCR) was performed to detect mutations at positions 2074 and 2075 of 23S rRNA region, in addition to PCR test to detect the erm(B) gene. From the intestinal content of broiler chickens, 18 strains of C. jejuni and two strains of C. coli were isolated, whereas, from swine samples, no C. jejuni strain and 14 strains of C. coli were isolated. All C. coli strains were resistant, and three C. jejuni strains from broilers chickens were characterized with intermediate resistance to erythromycin. The MIC of the strains ranged from ≤0.5mg/µL to ≥128mg/µL. All resistant strains had the A2075G mutation, and one strain with intermediate resistance had the A2075G mutation. However, the A2074C mutation and the erm(B) gene were not detected. High resistance levels were detected in C. coli strains isolated from swine. The MAMA-PCR is a practical tool for detecting the erythromycin resistance in Campylobacter strains.
Abstract in Portuguese:
Campylobacter spp. é um agente bacteriano causador de gastroenterite em humanos e associado à síndrome de Guillain–Barré, sendo a campilobacteriose considerada uma das principais enfermidades de origem alimentar. Aves e suínos são importantes reservatórios desses microrganismos e seus produtos derivados crus ou mal cozidos são muitas vezes incriminados como fonte de infecção humana. A primeira escolha para o tratamento em casos humanos são os antimicrobianos da classe dos macrolídeos como à eritromicina. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi isolar Campylobacter jejuni e C. coli a partir de 20 amostras de conteúdo intestinal de frangos de corte e de 30 de suínos ao abate e investigar a resistência à eritromicina das estirpes obtidas e os possíveis mecanismos moleculares envolvidos nesta resistência. A concentração inibitória mínima foi determinada pela diluição em ágar e a técnica MAMA-PCR foi utilizada para detecção de mutações nas posições 2074 e 2075 da região 23s rRNA, foi pesquisado também a presença do gene erm(B) pela PCR. A partir do conteúdo intestinal de frangos de corte foram isoladas 18 estirpes de C. jejuni e duas de C. coli, enquanto de suínos foram obtidas 14 estirpes de C. coli e nenhuma estirpe de C. jejuni. Todas as estirpes de C. coli de suínos foram identificadas como resistentes e três estirpes de C. jejuni de frangos foram caracterizadas com resistência intermediária. A CIM das estirpes variou de ≤0,5mg/µL a ≥128mg/µL. Todas as estirpes resistentes tinham a mutação A2075G e uma cepa com resistência intermediária também apresentou a mutação A2075G. Não foi detectada a mutação A2074C ou a presença do gene erm(B) em nenhuma das estirpes obtidas. Os resultados revelam um alto nível de resistência em estirpes de C. coli isoladas de suínos frente a eritromicina. A técnica MAMA PCR utilizada se constitui em uma ferramenta prática para detecção da resistência à eritromicina em estirpes de C. jejuni e C. coli.
#8 - Diagnosis of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia in hens and laying hens in the western region of Paraná through bacterial isolation and identification in qPCR
Abstract in English:
Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in poultry causing a decrease in productivity. The occurrence of this disease in chickens has already been verified in countries such as Australia, Italy, and the United States, but in Brazil, until now, epidemiological studies about Brachyspira sp. frequency were only carried out on pig farms. The objective of this study was to evaluate the presence of bacteria of the genus Brachyspira sp. through isolation and confirmation of the species Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia using the qPCR technique. Samples from 110 hens aged from 35 to 82 weeks were collected, 40 were from commercial egg farms and 70 were from laying hens matrices. For the first evaluation, bacterial isolation was performed from the feces. Positive samples were submitted to qPCR to identify the three species proposed. Cecum fragments of the birds were collected and fixed in formaldehyde for histological evaluation and counting of goblet cells. Of the 110 samples, 48 characteristic isolates of Brachyspira (43.6%) were obtained and of these in qPCR 13 identified as B. hyodysenteriae (11.8%) and 5 all from the same farm as Brachyspira intermedia (4.5%), 2 samples were positive for both agents (1.8%) and 28 were not characterized by qPCR (25.5%). None histopathological lesions were observed in the chicken cecum and no significant statistical difference was noticed in the count of goblet cells of the positive hens. It can be evidenced by the occurrence of Brachyspira sp. in laying farms and hens in Brazil, with special relevance to Brachyspira intermedia that can be potentially pathogenic for these animals.
Abstract in Portuguese:
Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves acarretando a queda de produtividade. A ocorrência desta enfermidade em galinhas já foi verificada em países como a Austrália, Itália e Estados Unidos, porém no Brasil, até o momento, trabalhos epidemiológicos sobre a frequencia de Brachyspira sp. só foram realizados em granjas de suínos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias do gênero Brachyspira sp. através do isolamento e confirmação das espécies Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando a técnica de qPCR. Foram coletadas amostras de 110 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 40 de granjas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se o isolamento bacteriano a partir das fezes. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação das três espécies propostas. Fragmentos de ceco das aves foram coletados e fixados em formol para avaliação histológica e contagem de células caliciformes. Das 110 amostras foram obtidos 48 isolamentos característicos de Brachyspira (43,6%) e destes na qPCR 13 identificadas como B. hyodysenteriae (11,8%) e 5 sendo todas da mesma granja (4,5%) como B. intermedia, 2 amostras foram positivas para ambos os agentes (1,8%) e 28 não foram caracterizadas através da qPCR (25,5%). Não foram observadas alterações histopatológicas no ceco e diferença estatística significativa na contagem de células caliciformes das aves positivas. Conclui‑se que a Brachyspira sp. é frequente em granjas de poedeiras e matrizes de corte no Brasil, com especial relevância para a B. intermedia que possui potência patogênico para estas aves.
#9 - Rapid identification of bovine mastitis pathogens by MALDI-TOF Mass Spectrometry
Abstract in English:
Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been shown to be an alternative method for identification of bacteria via their protein profile spectra, being able to identify bacteria at the genus, species and even at subspecies level. With the aim of large-scale identification of pathogens causing mastitis by this platform, a total of 305 isolates of bacteria identified from cows with subclinical mastitis were analyzed by conventional microbiological culture (MC) as well as by MALDI-TOF MS coupled with Biotyper data processing. Approximately 89% of the identifications performed by MALDI-TOF MS were consistent with results obtained by MC. From the remaining isolates (11%), 6.3% of isolates were classified as misidentified (discordance for both genus and species level), and 4.7% showed identification agreement at the genus level but not at the species level, being classified as unidentified at species level. The disagreement results were mostly associated with identification of Streptococcus and Enterococcus species probably due to the narrow phenotypic similarity between these two genera. These disagreement results suggest that biochemical assays might be prone to identification errors and, MALDI-TOF MS therefore may be an alternative to overcome incorrect species-specific identification. Standard microbiological methods for bovine mastitis diagnosis are time consuming, laborious and prone to errors for some bacteria genera. In our study, we showed that MALDI-TOF MS coupled with Biotyper may be an alternative method for large-scale identification of bacteria isolated from milk samples compared to classical microbiological routine protocols.
Abstract in Portuguese:
A espectrometria de massas (MALDI-TOF MS) tem mostrado ser um método alternativo para a identificação de bactérias, sendo capaz de identificar as bactérias causadoras de mastite em gênero, espécie ou até mesmo subespécie. Com o objetivo de identificar os patógenos causadores de mastite em grande-escala por esta plataforma, um total de 305 isolados bacterianos oriundos de vacas com mastite subclínica foram analisados pela cultura microbiológica convencional (CM) e pela MALDI-TOF MS acoplada ao software Biotyper. Aproximadamente 89% das identificações realizadas pela MALDI-TOF MS foram consistentes com os resultados obtidos pela CM. Do restante de isolados bacterianos (11%), 6,3% foram classificados como identificação errônea (discordância de gênero e espécie), e 4,7% apresentaram concordância de gênero, mas discordância da espécie. Os resultados que apresentaram divergência estavam mais associados com a identificação das espécies de Streptococcus spp. e Enterococcus spp. devido à similaridade fenotípica entre os dois gêneros. Estes resultados divergentes sugerem que os ensaios bioquímicos podem ser propensos a erros de identificação, por isso a MALDI-TOF MS pode ser considerada um método alternativo para superar os erros de identificação da CM. A cultura microbiológica padrão e os ensaios bioquímicos utilizados na identificação de agentes causadores de mastite são demorados, trabalhosos e propensos a erros quando utilizados na identificação em nível de espécie. No presente estudo, demonstramos que a MALDI-TOF MS acoplada ao software Biotyper pode ser considerada um método alternativo de identificação de bactérias causadoras de mastite em grande-escala quando comparado com a cultura microbiológica convencional.
#10 - Bacterial pathogens of the lower respiratory tract of calves from Brazilian rural settlement herds and their association with clinical signs of bovine respiratory disease
Abstract in English:
Bovine respiratory disease (BRD) is considered the major cause of economic losses in dairy and beef cattle production. The study aimed to detect the most important bacteria related to respiratory disease in tracheobronchial fluid samples of healthy and dairy calves with clinical signs of BRD in Brazilian rural settlements. Hundred and forty-one mongrel dairy calves were randomly selected from 42 family farm dairy herds from Brazilian settlements. Physical examination was performed and calves were classified as healthy (n=100) and BRD (n=41). Tracheobronchial fluid samples were collected. Isolation and molecular detection of Mycoplasma dispar, M. bovis and M. mycoides subsp. mycoides SC besides isolation of other aerobic bacteria were performed. Abnormal lung sounds (crackle/snoring/whistle), mucopurulent/purulent nasal discharge, body temperature >39.5°C and respiratory rate >40 breaths/min were higher in BRD calves compared to healthy calves (P<0.05). Bacillus sp., Staphylococcus intermedius and non-fermentative Gram-negative were the most prevalent bacteria isolated. Non-identified species from Enterobacteriaceae family was higher in BRD calves compared to healthy calves (P<0.05). Mollicutes were isolated in 7.4% of samples and only M. dispar was detected. Mollicutes was associated with purulent/mucopurulent nasal discharge (P=0.017). Pantoea agglomerans was associated to tachypnea (P=0.020), and Streptococcus spp. was associated with hyperthermia. Statistical tendencies were observed to M. dispar and tachypnea (P=0.066), and P. agglomerans and tachycardia (P=0.066). The obtained results describe the microorganisms found in tracheobronchial fluid of calves with BRD in some herds of Brazilian family farming and their relation to clinical signs of BRD.
Abstract in Portuguese:
A doença respiratória dos bovinos (DRB) é considerada a principal causa de perdas econômicas nas produções de leite e carne. O objetivo deste estudo foi detectar as mais importantes bactérias relacionadas a doença respiratória presentes em amostras de lavado traqueobrônquico de bezerros sadios e com sinais clínicos da DRB de assentamentos brasileiros. Cento e quarenta e um bezerros leiteiros sem raça definida foram randomicamente selecionados de 42 rebanhos leiteiros de assentamentos brasileiros. Exame físico foi realizado e os animais foram classificados em sadios (n=100) e com DRB (n=41). Amostras de lavado traqueobrônquico foram coletadas. Foram realizados o isolamento e a detecção molecular de Mycoplasma dispar, M. bovis e M. mycoides subsp. mycoides SC além de isolamento de outras bactérias aeróbias. Ruídos pulmonares anormais (crepitação/ ronco/sibilo), secreção nasal mucopurulenta/purulenta, temperatura corporal >39.5°C e frequência respiratória >40 movimentos respiratórios/min foram observados com maior frequência em bezerros com DRB comparado aos animais sadios (P<0.05). Bacillus sp, Staphylococcus intermedius e bactérias Gram-negativas não fermentadoras foram as bactérias mais prevalentes. Bactérias da família Enterobacteriaceae cuja espécie não fora identificada foram mais frequentes em bezerros com DRB comparado aos bezerros sadios (P<0.05). Mollicutes foram isolados em 7,4% das amostras e somente M. dispar foi detectado. Mollicutes foi associado à secreção nasal purulenta/mucopurulenta (P=0.017). Pantoea agglomerans foi associada a taquipneia (P=0.020), e Streptococcus spp. Foi associado a hipertermia. Tendência estatística foi observada para M. dispar e taquipneia (P=0.066), e P. agglomerans e taquicardia (P=0.066). Os resultados obtidos descrevem os micro-organismos encontrados no lavado traqueobrônquico de bezerros com DRB em rebanhos de agricultura familiar brasileira e sua relação com as manifestações clínicas da DRB.
