PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

The present study reported the mutation C189G in the T gene (Brachyury gene) as the cause of malformation in the tail of the Labrador dog. One litter of Labradors, from a mating between a female with short tail and a male with normal tail admitted at the Veterinary Teaching Hospital of Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Campo Grande, Brazil, was evaluated in this study. Blood samples were collected from the female and her puppies. After DNA extraction, sequencing and PCR-RFLP were carried out. The C189G mutation was identified through both techniques only in dogs with short tail.

• Malformation tail Labrador Retriever dogs mutation C189G T gene genotyping hereditary diseases

Abstract in Portuguese:

No presente trabalho relata-se a mutação C189G no gene T (Brachyury gene) como causa da malformação da cauda em cães da raça Labrador. Uma ninhada de labradores, provenientes do acasalamento entre uma fêmea com a cauda curta e um macho com a cauda normal, encaminhados ao Hospital Veterinário da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Campo Grande, Brasil, foi avaliada nesse estudo. Amostras de sangue da cadela e filhotes foram coletadas. Após extração de DNA, sequenciamento e PCR-RFLP foram realizados. A mutação C189G foi identificada por meio de ambas as técnicas apenas nos cães com a cauda malformada.

• Malformação cauda caninos Labrador Retriever mutação C189G gene T genotipagem doenças hereditárias

Abstract in English:

Cranial cruciate ligament is the main responsible for knee stability by preventing cranial tibial displacement regarding the femur. Deficiency in this ligament (CCLD) may cause subluxation of the tibia and dysfunction of the pelvic member due to overloading. Tibial osteotomies are among the more current surgical techniques for treating CCLD in dogs and they proportionate the dynamic stability by means of modifying bone geometry and the distribution of forces acting on the articulation. The objective of this work is to describe the use of the allogeneic cortical bone graft conserved in glycerin as a spacer on the tibial tuberosity advancement (TTA) for treating the CCLD. In order to do that, 34 dogs submitted to TTA surgery correction were evaluated, being 23 males (67.35%) and 11 females (32.35%). Surgical procedures happened from May 2011 to October 2015. Regarding the surgical procedure after osteotomy of the tibial tuberosity, a disk of allogeneic cortical disk, sawn wedge-hapsed, conserved in glycerin, proportions of 2x1mm was applied as spacer, enabling TTA. Advancements from 3 to 12 mm were executed, depending on the need of the patient. For animals with patella dislocation, trochleoplasty and TTA were executed in order to correct the deviation. The mean ± SD age of animals was 6.67±3.58 and weight was 15.16±12.97 kg. Mongrel dogs, Poodles and Yorkshire terriers were the most affected ones. From the 36 evaluated knees, 11 (30.56%) were associated with some traumatic process and in 25 (69.44%) there was no relation with previous trauma. From those wounds, 20 (55.56%) happened in the right limb and 16 (44.44%) in the left limb and two animals had CCLD bilaterally. Animals had continuous support, discreet drawer movement and negative tibial compression 15 days after surgery. At 30 days, 26 cases (72.22%) had firm support (FS); at 45 days, 24 cases (66 test at 7 and 67%) had FS and eight cases (22.22%) without claudication (WC). During subsequent radiographic evaluations the progressive incorporation of the graft and osteotomy union were observed. In this study, most of the diagnosed CCLD occurred in males diverging from results obtained by other authors that found greater frequency in females. Support without claudication it was observed in most of the cases of implants at 60 days. We concluded that the conserved allogeneic cortical bone graft was able to promote bone union in TTA of dogs with CCLD. None of the animals had signs of contamination, infection of the surgical wound or rejection related with the presence of the graft, demonstrated by the complete graft bone incorporation observed early at 45 days in some animals. The glycerin was a good conservation medium for those fragments intended for grafting because, besides being of low cost, it kept bone fragments free of contamination, reducing antigenicity and preserving the functions of osteoinduction and osteoconduction. The possibility of molding the graft to the animal need is a characteristic favorable to executing the modified technique that could be molded according to the size of the animal, allowing perfect adaptation to the osteotomized local in different breeds. Intercurrences commonly observed in TTA with patellar dislocation, meniscal lesions, tibial crest fracture and displacement were not found in the animals of this study, probably due to the better distribution of forces between the pass screw in TT and the TTA plate confirming that it has good adaptation to the technique conferring to the modified TTA advantages regarding the conventional TTA.

• Allogeny cortical graft glycerin tibial tuberosity dogs cranial cruciate ligament deficiency TTA bone union osteoinduction surgery

Abstract in Portuguese:

O ligamento cruzado cranial é o principal responsável pela estabilidade do joelho, impedindo o deslocamento da tíbia cranial em relação ao fêmur. A deficiência neste ligamento (CCLD) pode causar subluxação da tíbia e disfunção do membro pélvico devido à sobrecarga. As osteotomias tibiais estão entre as técnicas cirúrgicas mais atuais para o tratamento de CCLD em cães e proporcionam a estabilidade dinâmica por meio da modificação da geometria óssea da distribuição das forças que atuam sobre a articulação. O objetivo desse estudo é descrever o uso do enxerto ósseo cortical alogênico conservado em glicerina como espaçador no avanço da tuberosidade tibial (TTA) para o tratamento do CCLD. Para isso, 34 cães submetidos à cirurgia de TTA foram avaliados, sendo 23 machos (67,35%) e 11 fêmeas (32,35%). Os procedimentos curúrgicos aconteceram entre maio de 2011 e outubro de 2015. Com relação ao procedimento cirúrgico após a osteotomia da tuberosidade tibial, um disco alogênico cortical, em forma de cunha serrada, conservado em glicerina com proporções de 2 x 1mm foi aplicado como espaçador possibilitando a TTA. Avanços de 3 a 12mm foram executados, dependendo da necessidade do paciente. Para animais com luxação da patela, realizou-se a trocleoplastia e a TTA para a correção do desvio. A idade média dos animais foi de 6,67±3,58 anos e pesos médios de 15,16±12,97kg. Cães sem raça definida, Poodles e Yorkshire Terriers foram os mais afetados. Dos 36 joelhos avaliados, 11 (30,56%) foram associados a algum processo traumático e em 25 (69,44%) não havia nenhuma relação com um trauma prévio. Dos ferimentos, 20 (55,56%) aconteceram no membro direito e 16 (44,44%) no esquerdo, sendo que dois animais apresentavam CCLD bilateralmente. Os animais tiveram suporte contínuo, discreto movimento de gaveta e compressão tibial negativa 15 dias após a cirurgia. Aos 30 dias, 26 casos tinham suporte firme (FS); aos 45 dias, 24 casos tinham FS e oito casos sem claudicação (WC). Durante avaliações radiográficas subsequentes, observou-se a incorporação progressiva da união do enxerto e da osteotomia. Neste estudo, a maior parte do CCLD diagnosticado ocorreu em machos, divergindo dos resultados obtidos por outros autores que encontraram maior frequência em fêmeas. Suporte sem claudicação foi observado na maioria dos casos de implantes aos 60 dias. Foi concluído que o enxerto ósseo cortical alogênico conservado foi capaz de promover a união óssea na TTA de cães com CCLD. Nenhum dos animais apresentou sinais de contaminação, infecção da ferida cirúrgica ou rejeição relacionada à presença do enxerto, demonstrada pela incorporação completa do enxerto ósseo observada precocemente aos 45 dias em alguns animais. A glicerina foi um bom meio de conservação para os fragmentos destinados à enxertia porque, além do menor custo, manteve os fragmentos ósseos livres de contaminação, reduzindo a antigenicidade e preservando as funções de osteoindução e osteocondução. A possibilidade de moldagem do enxerto à necessidade do animal é uma característica favorável à execução da técnica modificada que pode ser moldada de acordo com o tamanho do animal, possibilitando perfeita adaptação ao local osteotomizado em diferentes raças. Intercorrências comumente observadas na TTA com luxação patelar, lesões meniscais, fratura da crista tibial e deslocamento não foram encontradas nos animais deste estudo, provavelmente devido à melhor distribuição de forças entre a passagem do parafuso no TT e a placa do TTA, confirmando que tem boa adaptação à técnica conferindo às vantagens da TTA modificada em relação à TTA convencional.

• Enxerto cortical alogenia glicerina tuberosidade tibial caninos ligamento cruzado cranial ATT união óssea osteoindução cirurgia

Abstract in English:

The present study determined the frequency of Staphylococcus aureus virulence genes in 2,253 milk samples of cows (n=1000) and goats (n=1253) raised in three different geographical regions of the state Pernambuco, Brazil. The presence of genes of virulence factors associated to adhesion to host cells (fnbA, fnbB, clfA and clfB), toxinosis (sea, seb, sec, sed, seg, seh, sei, tsst, hla and hlb), and capsular polysaccharide (cap5 and cap8) was evaluated by PCR. A total of 123 and 27 S. aureus strains were isolated from cows’ and goats’ milk, respectively. The sec and tsst genes were detected exclusively in goats’ isolates, while the seh gene was only identified in cows’ isolates. The number of toxin genes per strain showed that goats’ isolates are likely more toxic than bovines’ isolates. The cap5 genotype predominated in both host species, especially in strains collected from cows raised in the Agreste region. The cap8 genotype is likely more virulent due to the number of virulence genes per strain. The results of the present study demonstrate that S. aureus may pose a potential threat to human health in Brazil, and, therefore, these results should support actions related to mastitis control programs.

• Staphylococcus aureus virulence genes milk cows goats mastitis molecular typing genotyping staphylococcal enterotoxin capsular polysaccharide cattle bacterioses

Abstract in Portuguese:

O presente estudo determinou a frequência de genes de virulência de Staphylococcus aureus em 2253 amostras de leite, sendo de vacas n=1000 e de cabras n=1253, procedentes das três regiões geográficas do estado de Pernambuco, Brasil. A presença de genes de fatores de virulência associados à adesão às células hospedeiras (fnbA, fnbB, clfA e clfB), toxinosis (sea, seb, sec, sed, seg, seh, sei, tsst, hla e hlb) e polissacarídeo capsular (cap5 e cap8) foram avaliadas por PCR. Um total de 123 e 27 cepas de S. aureus foram isoladas do leite de vacas e cabras, respectivamente. Os genes sec e tsst foram detectados exclusivamente em isolados de cabras, enquanto o gene seh foi identificado apenas em isolados de vaca. O número de genes de toxina por cepa mostrou que os isolados de cabras são potencialmente mais tóxicos do que os isolados obtidos de bovinos. O genótipo cap5 predominou em ambas as espécies hospedeiras, especialmente em cepas coletadas de vacas criadas na região Agreste. O genótipo cap8 é potencialmente mais virulento devido ao número de genes de virulência por isolado. Os resultados do presente estudo demonstram que S. aureus pode representar uma ameaça potencial para a saúde humana no Brasil e, portanto, estes resultados devem subsidiar ações relacionadas aos programas de controle de mastite.

• Genes virulência Staphylococcus aureus leite cabras mastite tipagem molecular genotipagem enterotoxina estafilocócica polissacarídeo capsular bovinos caprinos bacterioses

Abstract in English:

Glycogen storage disease type II (GSD-II) and congenital myasthenic syndrome (CMS) are important autosomal recessive disorders in Brahman cattle. The objective of this study was to investigate the presence of mutations responsible for GSD II (E7, c.1057_1058delTA; and E13, c.1783C>T) and CMS (c.470del20) in purebred Brazilian Brahman cattle and in purebred Brahman bulls that were routinely used in breeding programs in Brazil. A total of 276 purebred Brahman cattle (167 females and 109 males, with ages ranging from 12-24 months) and 35 frozen semen samples taken from purebred Brahman bulls (22 bulls from the USA, 11 Brazilian bulls, one Argentine bull and one Australian bull) were used in this study. Genomic DNA was purified from hair root samples and from semen samples. Purified DNA was used in PCR genotyping to mutations c.1057_1058delTA (E7) and c.1783C>T (E13) in the GAA gene and c.470del20 in the CHRNE gene. The PCR products were purified and sequenced. The genotypic frequencies per polymorphism were estimated separately. Of the 276 Brahman cattle tested, 7.3% were identified as heterozygous for E7. All Brahman cattle studied were homozygous for the wild-type E13 allele. The E7 mutations was identified as heterozygous in 8.6% (3/35) of the commercial semen samples, whereas the E13 mutations was not identified. The c.470del20 mutation was identified as heterozygous in 0.73% of the hair root samples, but this mutation was not present in any semen sample assessed. No study had previously evaluated the prevalence of mutations responsible for GSD II or CMS in Brazilian Brahman cattle. In summary, the E7 and c.470del20 mutations are present in the Brazilian Brahman herd, and control measures should be adopted to prevent an increase in the incidence of GSD-II and CMS in Brahman cattle in Brazil.

• Mutation glycogen storage disease congenital myasthenic syndrome Brazilian Brahman cattle generalised glycogenosis Pompe disease Brazil

Abstract in Portuguese:

A doença de armazenamento de glicogênio tipo II (DAG-II) e a síndrome miastênica congênita (SMC) são importantes doenças autossômicas recessivas no gado Brahman. O objetivo deste estudo foi investigar a presença das mutações responsáveis pela DAG-II (E7, c.1057_1058delTA; e E13, c.1783C>T) e pela SMC (c.470del20) em bovinos da raça Brahman e em touros Brahman que são rotineiramente utilizados em programas de reprodução no Brasil. Um total de 276 amostras de bulbo piloso de bovinos Brahman (167 fêmeas e 109 machos, com idade variando de 12 a 24 meses) e 35 amostras de sêmen congeladas de touros Brahman (22 touros americanos, 11 touros brasileiros, um touro argentino e um touro australiano) foram usados neste estudo. O DNA genômico foi purificado, das amostras de bulbo piloso e de sêmen, e utilizado na genotipagem por PCR das mutações c.1057_1058delTA (E7) e c.1783C>T (E13) no gene GAA e c.470del20 no gene CHRNE. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados. A frequência genotípica para cada polimorfismo foi estimada separadamente. Dos 276 Brahman testados, 7,3% foram identificados como heterozigotos para E7. Todos os Brahman foram homozigotos wild-type para o alelo E13. A mutação E7 foi identificada em homozigose em 8,6% (3/35) das amostras de sêmen comerciais, enquanto que a mutação E13 não foi identificada. A mutação c.470del20 foi identificada em heterozigose em 0,73% das amostras de bulbo piloso, mas esta mutação não estava presente nas amostras de sêmen avaliadas. Nenhum estudo prévio avaliou a prevalência das mutações responsáveis pela DAG-II ou SMC em bovinos Brahman brasileiro. Em suma, as mutações E7 e c.470del20 estão presentes no rebanho Brahman brasileiro, e medidas de controle devem ser adotadas para prevenir o aumento da incidência da DAG-II e SMC em bovinos da raça Brahman no Brasil.

• Mutação glicogênio síndrome miastênica congênita bovinos raça Brahman glicogenose generalizada doença de Pompe Brasil

Abstract in English:

ABSTRACT.- Mendonça A.S., Braga T.F., Melo E.O., Dode M.A.N. & Franco M.M. 2018. Distribution of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine in bovine fetal tissue of the placenta. [Distribuição de 5-metilcitosina e 5-hidroximetilcitosina em placenta fetal bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(10):2012-2018. Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Parque Estação Biológica, Avenida W5 Norte (final), Cx. Postal 02372, Asa Norte, Brasília, DF 70770-917, Brazil. E-mail: mauricio.franco@embrapa.br 5-methylcytosine (5-mC) and 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC) are modified cytosines found in mammals that are involved in the regulation of gene expression. The aim of this study was to characterize the global patterns of 5-mC and 5-hmC of the fetal placenta of Nellore cattle as well as blood and sperm as controls. 5-mC and 5-hmC levels were determined using MethylFlash Methylated/Hydroxymethylated DNA Quantification Kit, respectively. Placenta tissues showed lower levels of 5-mC and 5-hmC compared to sperm. The male cotyledon showed higher levels of 5-hmC than the female. For the first time, the levels of 5-mC and 5-hmC in Bos taurus indicus were characterized, which may contribute to our understanding of the mechanisms of epigenetic regulation in the placenta. The presence of 5-hmC in somatic tissues suggest that 5-hmC has its own biological function and it is not only a byproduct from the oxidation of 5-mC. These results may be of interest in ARTs, especially in cloning in the diagnosis/prognosis of aberrant placentation and the viability of pregnancies.

• Methylation hydroxymethylation fetal tissue placenta epigenetics cattle physiology Metilcitosina hidroximetilcitosina placenta feto bovinos fisiologia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Mendonça A.S., Braga T.F., Melo E.O., Dode M.A.N. & Franco M.M. 2018. Distribution of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine in bovine fetal tissue of the placenta. [Distribuição de 5-metilcitosina e 5-hidroximetilcitosina em placenta fetal bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(10):2012-2018. Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Parque Estação Biológica, Avenida W5 Norte (final), Cx. Postal 02372, Asa Norte, Brasília, DF 70770-917, Brazil. E-mail: mauricio.franco@embrapa.br 5-metilcitosina (5-mC) e 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) são citosinas modificadas encontradas nos mamíferos que estão envolvidas com a regulação da expressão gênica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar os padrões globais de 5-mC e 5-hmC em placenta fetal de animais da raça Nelore, assim como em sangue e espermatozoides, usados como controles. Os níveis de 5-mC e 5-hmC foram determinados usando os kits MethylFlash Methylated/Hydroxymethylated DNA Quantification, respectivamente. Tecidos placentários apresentaram menores níveis de 5-mC e 5-hmC quando comparados com espermatozoides. Cotilédones de machos apresentaram maiores níveis de 5-hmC do que os de fêmeas. Os níveis de 5-mC e 5-hmC em animais Bos taurus indicus foram caracterizados pela primeira vez, o que pode contribuir para o nosso conhecimento sobre a regulação dos mecanimos epigenéticos na placenta. A presença de 5-hmC em tecidos somáticos sugerem que essa base pode ter sua própria função biológica, sendo não somente um sub-produto da oxidação da 5-mC. Esses resultados podem ser de interesse nas Tecnologias de Reprodução Assistida, especialmente na clonagem, no diagnóstico/prognóstico de placentação aberrante e viabilidade da progênie.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Kim F.J.P., Silva A.E.M., Silva R.V.S., Kim P.C.P., Acosta A.C., Silva S.M.B.C., Sena M.J. & Mota R.A. 2018. [Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique.] Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de PCR. Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1731-1735. Departamento de Desenvolvimento Educacional, Curso de Tecnologia em Agroecologia, Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Pernambuco, Campus Barreiros, Fazenda Sapé s/n, Zona Rural, Barreiros, PE 55560-000 Brazil. E-mail: fernando_kim@barreiros.ifpe.edu.br Infections caused by bacteria of the genus Aeromonas are among the most common diseases in fish farming systems worldwide, and this disease occurs in all countries which have Nile tilapia (Oreochromis niloticus) farmed. The present work describes the development of a new multiplex PCR (mPCR) technique that diagnosis the genus Aeromonas and detects aerolysin gene (aerA). Reference strains of several Aeromonas species and other genera were used for standardization of mPCR. Strains of A. hydrophila from “pacaman” fish (Lophiosilurus alexandri) and Aeromonas spp. from Nile tilapia from farming systems were used too. Primers were designed based on the 16S rRNA region and aerA (aerolysin toxin). To verify a better annealing temperature were used gradients between 59°C and 61°C with 40ng of the DNA template. The 16S rRNA gene and the aerA gene amplification products showed 786 and 550 bp, respectively. The mPCR showed better annealing temperature at 57.6°C, and the detection limit for both genes (16S rRNA and aerA) was 10-10g/μL of the DNA. The standardized mPCR is quick, sensitive, and specific for Aeromonas spp. diagnosis and to detect aerolysin gene. This method showed advantages when compared to the conventional diagnostic methods and can be used in Nile tilapia or other fish farming systems. The detection of aerolysin gene is an important tool to determine the potential pathogenicity of Aeromonas spp. isolates.

• Aeromonas gene aerolysin Nile tilapia Oreochromis niloticus PCR technique mPCR virulence factor bacterioses Aeromonas spp. gene de virulência aerolisina tilápias do Nilo Oreochromis niloticus técnica de PCR fator de virulência bacterioses

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Kim F.J.P., Silva A.E.M., Silva R.V.S., Kim P.C.P., Acosta A.C., Silva S.M.B.C., Sena M.J. & Mota R.A. 2018. [Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique.] Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de PCR. Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1731-1735. Departamento de Desenvolvimento Educacional, Curso de Tecnologia em Agroecologia, Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Pernambuco, Campus Barreiros, Fazenda Sapé s/n, Zona Rural, Barreiros, PE 55560-000 Brazil. E-mail: fernando_kim@barreiros.ifpe.edu.br As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/µL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Zani C.C., Marinho P.V.T., Diamante G.A.C., Sueiro F.A.R. & Bahr Arias M.V. 2018. Post mortem evaluation of spinal cord and protruded intervertebral discs in dogs without neurological abnormalities. [Avaliação post mortem da medula espinhal e de discos intervertebrais protrusos em cães sem alterações neurológicas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1793-1799. Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid Km 380, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: vicky@uel.br The aim of this study was to verify the presence of protrusion of the intervertebral disc (IVD) causing compression of the spinal cord and/or roots of cauda equina in 30 dogs above seven years of age with no evidence of previous neurological abnormalities. After the occurrence of death or euthanasia, a laminectomy was performed from C2 to the sacral vertebra to verify the presence of IVD protrusions. The protruded IVD were macroscopically graded according to the Thompson scale, and the corresponding spinal cord segment was histologically analyzed for nervous tissue compression. Of the 30 dogs, twelve (40%) presented disc protrusion, and of these 12 dogs, seven (58%) presented more than one protruded disc. Disc protrusion was observed in 3.2% (25/780) of all IVD evaluated. Of the six chondrodystrophic dogs, five (83%) presented disc protrusion. Of the 24 nonchondrodystrophic dogs, seven (29%) presented IVD protrusion. The site that showed the highest frequency of protrusion was L4-L5 (6/25) followed by the L6-L7 region (3/25) and C6-C7 (3/25). Only two of the medullary segments evaluated showed histological changes, with presence of focal lymphocytic infiltration and multifocal mild hemorrhage in the gray matter. Under the conditions of this study, 40% of dogs older than seven years old showed IVD protrusions without showing neurological signs, with no abnormality of the nervous tissue in 92% of the evaluated segments. Thus, the protrusion of the IVD in some dogs, can only be a finding of no clinical relevance.

• Post mortem spinal cord intervertebral disc degeneration spinal cord dogs pathology medula espinhal degeneração do disco intervertebral medula espinhal cães patologia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Zani C.C., Marinho P.V.T., Diamante G.A.C., Sueiro F.A.R. & Bahr Arias M.V. 2018. Post mortem evaluation of spinal cord and protruded intervertebral discs in dogs without neurological abnormalities. [Avaliação post mortem da medula espinhal e de discos intervertebrais protrusos em cães sem alterações neurológicas.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1793-1799. Departamento de Clínicas Veterinárias, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid Km 380, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: vicky@uel.br O objetivo do presente estudo foi verificar a presença de protrusão do disco intervertebral (DIV) causando compressão da medula espinhal e/ou raízes da cauda equina em cadáveres de cães, sem histórico de alterações neurológicas. Para isso, após a ocorrência de óbito ou realização de eutanásia em 30 cães com mais de sete anos de idade, sem histórico de alterações neurológicas, foi realizada a laminectomia entre C2 até a vértebra sacral para verificar a presença de protrusões do DIV. Os DIV protrusos foram graduados macroscopicamente quanto à degeneração segundo a escala de Thompson, e o segmentos medular correspondente à localização da compressão foi analisado microscopicamente em busca de lesões compressivas ao tecido nervoso. Quarenta por cento dos cães (12/30) apresentaram protrusão do DIV, e destes, 58% (7/12) apresentavam mais de um DIV protruso. A protrusão estava presente em 3,2% (25/780) de todos os DIV avaliados. Cães de raças condrodistróficas apresentaram protrusões em 83% dos casos (5/6) e raças não condrodistróficas em 29% (7/24). O local que apresentou maior frequência de protrusão foi L4-L5 (6/25), seguido da região L6-L7 (3/25) e C6-C7 (3/25). Apenas dois segmentos medulares avaliados na histopatologia apresentaram alterações, com presença de infiltrado linfoplasmocitário focal e hemorragia discreta multifocal na substância cinzenta. Nas condições do presente estudo, 40% dos cães com mais de sete anos de idade apresentaram protrusões do DIV sem que houvesse sinais neurológicos, com normalidade do tecido nervoso em 92% dos segmentos avaliados. Assim, a protrusão do DIV, em alguns cães, pode ser apenas um achado sem relevância clínica.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pires I.C., Freire N.B., Fernandes A.W.C., Souza R.F.S., Silva Jr F.A.G., Oliveira H.P. & Costa M.M. 2018. [Influence of polypyrrole and salinity levels on biofilm formation in Aeromonas spp.]. Influência do polipirrol e dos níveis de salinidade na formação de biofilme em Aeromonas spp. Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1528-1536. Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia BR-407 Km 12, Lote 543, Projeto de Irrigação Nilo Coelho, C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: isabellecpires@hotmail.com Bacteria of the genus Aeromonas are highly disseminated pathogens in the aquatic environment, responsible for great economic losses in the pisciculture of several countries. They are opportunistic microorganisms and their pathogenicity is linked to some virulence factors, such as biofilm formation. Saline stress is one of the factors that favor the formation of these colonies and, consequently, the increase of infections. These infections, when associated with biofilm, are even more resistant to antimicrobials. In this context, polypyrrole stands out as an antimicrobial alternative because it has several therapeutic attributes and does not present toxicity to organisms. Thus, the objective of this study was to evaluate the susceptibility profile and the biofilm formation capacity of Aeromonas spp. associated with different levels of salinity and polypyrrole. The antibacterial activity of the isolates was determined and motility assays were performed with bacteria bearing the fla gene. The ability of sodium chloride and polypyrrole to interfere with biofilm formation has also been demonstrated. The results were evidenced with scanning electron microscopy. Concentrations of 2 and 3% of NaCl inhibited bacterial motility. In the biofilm formation, 83% of the bacterial isolates induced production at the concentration of 0.25%. Polypyrrole caused the death of all the isolates tested at the concentration of 125μg/mL. In addition, this compound decreased bacterial motility at concentrations of 0.25 to 3%, and no biofilm was produced. These results show that the different levels of NaCl influence in the formation of the biofilm favoring the persistence of the infection. This study also highlighted the potential of polypyrrole as a bactericidal agent, being an effective alternative to antimicrobial drugs for the treatment of infections caused by Aeromonas spp.

• Biofilm Aeromonas spp. gene fla motility pisciculture aquiculture polymer resistance bacterioses motilidade piscicultura aquicultura polímero resistência.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pires I.C., Freire N.B., Fernandes A.W.C., Souza R.F.S., Silva Jr F.A.G., Oliveira H.P. & Costa M.M. 2018. [Influence of polypyrrole and salinity levels on biofilm formation in Aeromonas spp.]. Influência do polipirrol e dos níveis de salinidade na formação de biofilme em Aeromonas spp. Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1528-1536. Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Rodovia BR-407 Km 12, Lote 543, Projeto de Irrigação Nilo Coelho, C1, Petrolina, PE 56300-000, Brazil. E-mail: isabellecpires@hotmail.com Bactérias do gênero Aeromonas são patógenos altamente disseminados no ambiente aquático, responsáveis por grandes perdas econômicas na piscicultura de diversos países. São micro-organismos oportunistas e sua patogenicidade está ligada a alguns fatores de virulência, como a formação de biofilme. O estresse salino é um dos fatores que favorecem a formação dessas colônias e, consequentemente, o aumento de infecções. Essas infecções quando estão associadas ao biofilme são ainda mais resistentes aos antimicrobianos. Nesse contexto, o polipirrol destaca-se como uma alternativa antimicrobiana por possuir vários atributos terapêuticos e não apresentar toxicidade aos organismos. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de susceptibilidade e a capacidade de formação de biofilme dos isolados de Aeromonas spp. associados aos diferentes níveis de salinidade e polipirrol. Determinou-se a atividade antibacteriana dos isolados e ensaios de motilidade foram realizados com bactérias que carreavam o gene fla. Também verificou-se a capacidade do cloreto de sódio e polipirrol em interferir na formação do biofilme. Os resultados foram evidenciados com a microscopia eletrônica de varredura. As concentrações de 2 e 3% de NaCl inibiram a motilidade bacteriana. Na formação do biofilme, 83% dos isolados bacterianos induziram a produção na concentração de 0,25%. O polipirrol causou a morte de todos os isolados testados na concentração de 125µg/mL. Além disso, esse composto diminuiu a motilidade bacteriana nas concentrações de 0,25 a 3%, sendo que em relação à produção de biofilme, não houve interferência. Esses resultados evidenciam que os diferentes níveis de NaCl influenciam na formação do biofilme favorecendo a persistência da infecção. Este estudo também realçou a potencialidade do polipirrol como agente bactericida, sendo uma alternativa eficaz às drogas antimicrobianas para o tratamento das infecções causadas por Aeromonas spp.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Fernandes M.H.V., Finger P.F., Cunha R.C., Vargas G.D., Fischer G., Lima M. & Hübner S.O. 2018. Antigenic and immunogenic properties of the canine distemper virus nucleocapsid protein expressed in Escherichia coli employing codon optimized synthetic gene. [Propriedades antigênicas e imunogênicas da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina expressa em Escherichia coli empregando gene sintético com codons otimizados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1615-1621. Departamento de Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão, Avenida Eliseu Maciel s/n, Jardim América, Capão do Leão, RS 96900-010, Brazil. E-mail: sohubner@yahoo.com.br Despite common occurrence and importance of canine distemper disease the majority of tests currently available for diagnosis are hampered by either low sensitivity or specificity. In this study it was evaluated antigenic and immunogenic characteristics of a conserved region of nucleocapsid protein of canine distemper virus (rCDV NP) expressed in Escherichia coli employing a codon optimized synthetic gene. The expression of rCDVNP in Star strain (mean  300µg/mL, purified) was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis by using His-Tag monoclonal antibodies. Western blot and ELISA, employing positive and negative control dog sera, demonstrated the rCDVNP antigenicity. The rCDVNP was inoculated in hens and immunoglobulin Y (IgY) was purified from the egg yolk. The mean yield of IgY was 28.55mg/mL. IgY reacted with the recombinant protein as demonstrated by Western blot and ELISA assays. In summary, our findings demonstrated that rCDVNP is antigenic since CDV positive dog sera recognized the protein in vitro. Additionally, the rCDVNP proved to be immunogenic in hens being possible to isolate a high concentration of specific IgY antibodies from the egg yolk. Taken together, these results indicate that the rCDVNP along with the specific IgY could be useful tools for development of the canine distemper immunodiagnostic assays.

• Dogs antigenic immunogenic canine distemper virus nucleocapsid protein Escherichia coli codon synthetic gene expression CDV NP IgY viroses Cães antigenia imunogenia proteína do nucleocapsídeo cinomose canina gene sintético códon expressão.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Fernandes M.H.V., Finger P.F., Cunha R.C., Vargas G.D., Fischer G., Lima M. & Hübner S.O. 2018. Antigenic and immunogenic properties of the canine distemper virus nucleocapsid protein expressed in Escherichia coli employing codon optimized synthetic gene. [Propriedades antigênicas e imunogênicas da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina expressa em Escherichia coli empregando gene sintético com codons otimizados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1615-1621. Departamento de Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão, Avenida Eliseu Maciel s/n, Jardim América, Capão do Leão, RS 96900-010, Brazil. E-mail: sohubner@yahoo.com.br Apesar da ocorrência comum e importância da cinomose canina, a maioria dos testes atualmente disponíveis para diagnóstico são prejudicados pela baixa sensibilidade ou especificidade. Neste estudo foram avaliadas características antigênicas e imunogênicas de uma região conservada da proteína do nucleocapsídeo do virus da cinomose canina (rCDV NP) expressa em Escherichia coli empregando um gene sintético e codons otimizados. A expressão na cepa Star (média de 300µg/mL, purificada) foi confirmada por SDS-PAGE e Western blot utilizando anticorpos monoclonais anti-His-Tag. A antigenicidade da rCDVNP foi demonstrada por western blot e ELISA empregando soros de cães positivos e negativos. A rCDVNP foi inoculada em galinhas e imunoglobulina Y (gY) foi obtida e purificada a partir da gema. A produção média de IgY foi 28.55mg/mL. Anticorpos IgY reagiram com a proteína recombinante, quando analisados por Western blot e ELISA. Em resumo, nossos achados demonstram que a rCDVNP produzida é antigênica, uma vez que os anticorpos de soro de cães positivos para CDV reconheceram a proteína in vitro. Além disso, a rCDVNP foi imunogênica em galinhas, sendo possível isolar anticorpos IgY específicos a partir da gema do ovo em altas concentrações. Tomados em conjunto, estes resultados indicam que a rCDVNP juntamente com a IgY específica podem ser ferramentas úteis para elaborar ensaios de imunodiagnóstico de cinomose canina.

Abstract in English:

Sida carpinifolia is a plant responsible for poisoning several species of animals. This paper describes Hypomyelinogenesis in fetuses and neonates of cattle that consumed S. carpinifolia. Neonates manifested ataxia and muscle tremors. Two bovine newborns and four fetuses were necropsied and showed no significant gross changes. Histopathologic findings included vacuolation of pancreatic acinar cells, thyroid follicular cells, hepatocytes, cells of renal tubules and neurons of the fetus and the white matter of the telencephalic frontal lobe of the neonates and also revealed axonal spheroids in the brain of the fetuses and neonates. The lectin-histochemical evaluation shoved staining for the lectins Con-A, WGA and s-WGA. The Luxol Fast Blue staining revealed a marked decrease of myelin in the brain of all the fetuses and a moderate decrease in the neonates. Histologic and lectin-histochemic findings indicate that the consumption of S. carpinifolia by pregnant bovine females can cause hypomyelinogenesis in fetuses and neonates.

• Poisonous plants hypomyelinogenesis Sida carpinifolia Malvaceae calves cattle swainsonine alfa-manosidosis lysosomal storage disease plant poisoning toxicoses

Abstract in Portuguese:

Sida carpinifolia é uma planta responsável por intoxicar várias espécies animais. Este artigo descreve hipomielinogênese em fetos e neonatos de bovinos que consumiram S. carpinifolia. Os neonatos manifestaram ataxia e tremores musculares. Dois neonatos e quatro fetos bovinos foram necropsiados e não havia alterações macroscópicas significativas. Os achados histopatológicos incluíram vacuolização de células acinares do pâncreas, células foliculares da tireoide, hepatócitos, células renais tubulares e neurônios nos fetos. Nos neonatos havia vacuolização na substância branca do lobo frontal telencefálico, além de esferoides axonais no encéfalo dos fetos e dos recém-nascidos. A avaliação lectino-histoquímica demonstrou marcação para as lectinas Con-A, WGA e s-WGA. A coloração de Luxol Fast Blue revelou diminuição acentuada da mielina no telencéfalo de todos os fetos e diminuição moderada nos neonatos. Os achados histológicos e lectina-histoquímicos indicam que o consumo de S. carpinifolia por fêmeas bovinas gestantes pode causar hipomielinogênese em fetos e neonatos.

• Plantas tóxicas Hipomielinogênese Sida carpinifolia Malvaceae bezerros bovinos swainsonina alfa-manosidose doença do acúmulo lisossomal intoxicação por plantas toxicoses