PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Albinism is a genetic disease characterized by deficient melanin production making affected animals more susceptible to skin problems, negatively influencing production systems of the same. In buffalo, a nonsense mutation (c.1431G>A) in the tyrosinase gene was already described, which is responsible for the oculocutaneous albinism buffalo phenotype. However, prevalence studies have never been performed for this anomaly in Brazil. Therefore, the objective of this study was to investigate this mutation in buffalo herd in Brazil. Of the 315 buffalo tested with no albinism phenotype evident, 11 (3.5%) were heterozygous for the mutation and none were mutated homozygous, showing the existence of the albinism gene in buffalo production herds and proving the importance of prevalence studies for hereditary diseases in order to prevent the dissemination of these same genes and their negative productivity consequences.

• Molecular detection albinism gene buffalo herds Bubalus bubalis mutation tyrosinase prevalence genetics

Abstract in Portuguese:

O Albinismo é uma doença genética caracterizada pela deficiência na produção de melanina, o que torna os animais afetados mais susceptíveis a problemas cutâneos e influencia negativamente a criação destes animais. A mutação nonsense (c.1431G>A) no gene da tyrosinase já foi descrita como responsável pelo albinismo oculocutâneo em búfalos, entretanto estudos prévios sobre a prevalência dessa mutação ainda não foram realizados no Brasil. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a presença desta mutação em uma população de búfalos brasileiros. Foram genotipados 315 búfalos clinicamente normais, ou seja, sem o fenótipo albino evidente. Desses, 11 (3,5%) eram heterozigotos para a mutação (N/TYR) e os demais eram homozigotos selvagens (N/N). Este resultado demonstra que o alelo mutado para o albinismo em búfalo está presente no rebanho brasileiro e aponta a importância de estudos de prevalência de enfermidades hereditárias com o objetivo de prevenir a disseminação desses alelos mutados, minimizando os prejuízos.

• Detecção molecular gene do albinismo rebanhos búfalos Bubalus bubalis mutação tirosinase prevalência genética

Abstract in English:

The Newcastle disease, caused by avian avulavirus type 1 strains (APMV-1) is an important avian disease involved into high rates of mortality and economic losses. Several outbreaks have been reported over the last 30 years in Columbiformes in different parts of the world, caused by a adapted variant strain of AAvV-1, called pigeon paramyxovirus type 1 (PPMV-1). A high mortality associated with an outbreak was analyzed in free-living pigeons (Columba livia) in a public square in Porto Alegre in Southern Brazil. A total of 24 pigeons moribund or freshly dead, within five weeks interval were submitted to necropsy, histopathological, immunohistochemical (anti-Newcastle), and RT-PCR followed by sequencing of the amplification products analysis. They presented neurological signs, non-suppurative encephalitis and encephalomyelitis, and mononuclear inflammatory infiltrate in different organs. Immunohistochemical analysis in nine pigeons tissue showed that anti-Newcastle was expressed in brain, kidney, liver and pancreas. The RT-PCR test for the M protein of Newcastle disease virus was positive in six pigeons. The differential diagnosis of Influenza, West Nile, Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in all pigeons presented negative results. The sequence of amino acids in the cleavage site region of the F protein was 112RRQKRF117 classifying the strain as virulent. The phylogenetic analysis classified this virus strain into Class II and VI genotype.

• Molecular findings avulavírus type 1 Columba livia pigeons PPMV-1 Newcastle disease encephalomyelitis columbiformes immunohistochemistry pathology

Abstract in Portuguese:

A doença de Newcastle, causada por cepas de avulavirus aviário tipo 1 (AAvV-1), é uma doença de aves importante por causar altos índices de mortalidade e perdas econômicas. Vários surtos têm sido relatados ao longo de 30 anos em aves da ordem Columbiformes, em diferentes partes do mundo, causados por uma cepa variante específica de AAvV-1, denominada Pigeon paramyxovirus tipo 1 (PPMV-1). Foi analisado um surto de mortalidade em pombos domésticos (Columba livia), provenientes de uma praça pública em Porto Alegre, no Sul do Brasil. Vinte e quatro aves moribundas ou mortas foram submetidas, no intervalo de cinco semanas, ao exame de necropsia, exame histopatológico, imuno-histoquímico anti-Newcastle, RT PCR e sequenciamento. Apresentaram sinais neurológicos, encefalite e encefalomielite não supurativas, além de infiltrado inflamatório mononuclear em diversos órgãos. Nove aves demonstraram exame imuno histoquímico positivo em órgãos como cérebro, rim, fígado e pâncreas. Seis aves foram positivas no exame de RT-PCR para a proteína M do vírus da Doença de Newcastle. Nos exames de diagnósticos diferenciais de Influenza, West Nile, Mycoplasma gallisepticum e Mycoplasma synoviae, todas as aves testadas foram negativas. A sequência dos aminoácidos na região do sítio de clivagem da proteína foi 112RRQKRF117, classificando a cepa como virulenta. De acordo com a análise filogenética o vírus identificado foi classificado como pertencente à classe II e ao genótipo VI.

• Avulavirus aviário tipo 1 Columba livia pombos PPMV-1 Doença de Newcastle encefalomielite Columbiformes patologia

Abstract in English:

The present study determined the frequency of Staphylococcus aureus virulence genes in 2,253 milk samples of cows (n=1000) and goats (n=1253) raised in three different geographical regions of the state Pernambuco, Brazil. The presence of genes of virulence factors associated to adhesion to host cells (fnbA, fnbB, clfA and clfB), toxinosis (sea, seb, sec, sed, seg, seh, sei, tsst, hla and hlb), and capsular polysaccharide (cap5 and cap8) was evaluated by PCR. A total of 123 and 27 S. aureus strains were isolated from cows’ and goats’ milk, respectively. The sec and tsst genes were detected exclusively in goats’ isolates, while the seh gene was only identified in cows’ isolates. The number of toxin genes per strain showed that goats’ isolates are likely more toxic than bovines’ isolates. The cap5 genotype predominated in both host species, especially in strains collected from cows raised in the Agreste region. The cap8 genotype is likely more virulent due to the number of virulence genes per strain. The results of the present study demonstrate that S. aureus may pose a potential threat to human health in Brazil, and, therefore, these results should support actions related to mastitis control programs.

• Staphylococcus aureus virulence genes milk cows goats mastitis molecular typing genotyping staphylococcal enterotoxin capsular polysaccharide cattle bacterioses

Abstract in Portuguese:

O presente estudo determinou a frequência de genes de virulência de Staphylococcus aureus em 2253 amostras de leite, sendo de vacas n=1000 e de cabras n=1253, procedentes das três regiões geográficas do estado de Pernambuco, Brasil. A presença de genes de fatores de virulência associados à adesão às células hospedeiras (fnbA, fnbB, clfA e clfB), toxinosis (sea, seb, sec, sed, seg, seh, sei, tsst, hla e hlb) e polissacarídeo capsular (cap5 e cap8) foram avaliadas por PCR. Um total de 123 e 27 cepas de S. aureus foram isoladas do leite de vacas e cabras, respectivamente. Os genes sec e tsst foram detectados exclusivamente em isolados de cabras, enquanto o gene seh foi identificado apenas em isolados de vaca. O número de genes de toxina por cepa mostrou que os isolados de cabras são potencialmente mais tóxicos do que os isolados obtidos de bovinos. O genótipo cap5 predominou em ambas as espécies hospedeiras, especialmente em cepas coletadas de vacas criadas na região Agreste. O genótipo cap8 é potencialmente mais virulento devido ao número de genes de virulência por isolado. Os resultados do presente estudo demonstram que S. aureus pode representar uma ameaça potencial para a saúde humana no Brasil e, portanto, estes resultados devem subsidiar ações relacionadas aos programas de controle de mastite.

• Genes virulência Staphylococcus aureus leite cabras mastite tipagem molecular genotipagem enterotoxina estafilocócica polissacarídeo capsular bovinos caprinos bacterioses

Abstract in English:

This study aimed to verify the occurrence of Leishmania spp. and Leishmania (Leishmania) infantum in horses from a visceral leishmaniasis endemic area in Brazil. DNA samples from blood and conjunctival swab (CS) were tested by PCR and Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Although none of the horses was clinically sick, animals infected by Leishmania spp. were found and some could be characterized as infected by L. (L.) infantum. From 40 horses, 100% of the animals were positive by blood PCR, 90% (36/40) by CS PCR, and 2.5% (01/40) in serodiagnosis, by IFAT. Six from these 40 horses were L. (L.) infantum positive by blood PCR. Direct sequencing and analysis of amplicons resulted in a sequence to evolutionary analysis. Results indicate the presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum infecting healthy horses in Brazil. The presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum DNA in asymptomatic horses suggests that they can be important reservoirs of these parasites, a highly relevant finding for the epidemiological surveillance of the diseases they cause.

• Serology Leishmania spp. horses endemic area canine visceral leishmaniasis Brazil Leishmania infantum PCR IFAT evolutionary analysis parasitoses

Abstract in Portuguese:

O estudo objetivou verificar a ocorrência de Leishmania spp. e Leishmania (Leishmania) infantum em cavalos de uma região endêmica para leishmaniose visceral do Brasil. Amostras de DNA de sangue e suabe conjuntival (SC) foram testadas pela PCR e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Embora nenhum cavalo estivesse clinicamente doente, animais infectados por Leishmania spp. e L. (L.) infantum foram encontrados em Ilha Solteira/SP. Dos 40 cavalos, 100% (40/40) foram positivos pela PCR de sangue, 90% (36/40) pela PCR de SC, e 2,5% (01/40) no sorodiagnóstico, pela RIFI. Seis desses 40 cavalos foram positivos para L. (L.) infantum pela PCR de sangue. O sequenciamento direto e a análise dos amplicons resultaram em uma sequência para análise evolutiva. Os resultados indicam a presença de Leishmania spp. e L. (L.) infantum infectando cavalos saudáveis no Brasil. A presença de DNA de Leishmania spp. and L. (L.) infantum em cavalos saudáveis sugere que eles podem ser importantes reservatórios desses parasitas, um achado altamente relevante para a vigilância epidemiológica das doenças que causam.

• Sorologia Leishmania spp. cavalos endemia leishmaniose Leishmania infantum PCR IFAT análise evolutiva parasitoses

Abstract in English:

Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) are considered one of the major causes of human diarrhea in developing countries. Some studies have pointed wild birds as important reservoirs for these pathogens. However, scarce species from the Psittaciformes order have been investigated. This study aimed to evaluate the presence of DEC strains in Psittaciformes from illegal wildlife trade. A total of 78 E. coli strains isolated from cloacal swab samples of 167 Psittaciformes in the Ceará State, Brazil, were evaluated regarding the presence of the following DEC virulence genes by polymerase chain reaction (PCR): eaeA and bfpA genes (Enteropathogenic E. coli – EPEC); stx1 and stx2 (Shiga toxin-producing E. coli - STEC); estA and eltB (Enterotoxigenic E. coli - ETEC); ipaH (Enteroinvasive E. coli - EIEC); aatA and aaiC (Enteroaggregative E. coli - EAEC). Positive strains for eaeA and bfpA genes were considered typical EPEC, while strain positive exclusively for the eaeA gene were classified as atypical EPEC. The eaeA gene was identified in 20 E. coli strains and bfpA in 22 isolates. In addition, 11 and 9 belonged to tEPEC and aEPEC, respectively. No strain was positive for stx1 or stx2. A total of 47 (60.3%) strains and a total of 136 birds (81.4%) were negative for the remaining DEC pathotypes investigated. In conclusion, psittacine from illegal wildlife trade in Ceará State, Brazil, presented a relevant prevalence of typical and atypical EPEC, potentially playing a role as reservoirs of DEC strains in the environment. Thus, proper control measures must be adopted to block the spread of these pathogens.

• EPEC Escherichia coli Psittaciformes wildlife traffic birds bacterioses

Abstract in Portuguese:

Escherichia coli diarreiogênicas (DEC) são consideradas uma das causas mais importantes de diarreia em países em desenvolvimento. Alguns estudos têm apontado aves silvestres como importantes reservatórios destes patógenos, entretanto, poucas espécies da ordem Psittaciformes têm sido investigada. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de cepas de E. coli diarreiogênicas em Psittaciformes do tráfico de animais silvestres. Um total de 78 amostras de E. coli isoladas de suabes cloacais provenientes de 167 de Psittaciformes do Ceará, Brasil, foram avaliadas quanto a presença dos seguintes genes de virulência DEC por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR): eaeA e bfpA (E. coli Enteropatogênica - EPEC); stx1 e stx2 (E. coli produtora de Shiga - STEC); estA e eltB (E. coli Enterotoxigênica – ETEC); ipaH (E. coli Enteroinvasiva - EIEC); aatA e aaiC (E. coli Enteroagregativa - EAEC). As cepas positivas para os genes eaeA e bfpA foram consideradas EPEC típicas, enquanto que as positivas exclusivamente para o gene eaeA foram classificadas como EPEC atípicas. O gene eaeA foi identificado em 20 cepas de E. coli e o gene bfpA em 22 dos isolados. Adicionalmente, 11 e 9 cepas foram classificadas como EPEC típicas e atípicas, respectivamente. Nenhuma cepa foi positiva para os genes stx1 e stx2. Um total de 47 cepas (60,3%) e um total de 136 aves (81,4%) foram negativas para os demais patotipos DEC pesquisados. Em conclusão, psitacídeos provenientes do tráfico de aves silvestres do estado do Ceará, Brasil, apresentaram relevante prevalência de EPEC típicas e atípicas, potencialmente participando como reservatórios de cepas DEC no ambiente. Portanto, medidas de controle devem ser adotadas para inibir a disseminação destes patógenos.

• EPEC Escherichia coli Psittaciformes tráfico de animais silvestres aves bacterioses

Abstract in English:

Arcobacter is an emerging zoonotic pathogen, and the major transmission routes to humans are the handling or consumption of contaminated raw/undercooked food products of animal origin, water and seafood. The isolation and identification of Arcobacter species are not routine in clinical laboratories; therefore, its true incidence in human infections may be underestimated. The present study aimed to isolate and characterize Arcobacter from carcasses and fecal samples collected at swine slaughterhouses and from meat markets in São Paulo State, Brazil. The isolates were identified using multiplex-PCR to differentiate the species and analyzed by single-enzyme amplified fragment length polymorphism (SE-AFLP). Arcobacter spp. were isolated from 73.0% of swine carcasses, 4% of fecal samples and 10% of pork samples. A. butzleri was the most prevalent species identified, followed by A. cryaerophilus. Interestingly, the carcasses presented higher frequency of A. butzleri isolation, whereas only A. cryaerophilus was isolated from fecal samples. SE-AFLP enabled the characterization of A. butzleri and A. cryaerophilus into 51 and 63 profiles, respectively. The great genetic heterogeneity observed for both species corroborates previous reports. This study confirms the necessity for a standard isolation protocol and the improvement of molecular tools to further elucidate Arcobacter epidemiology.

• Arcobacter butzleri Arcobacter cryaerophilus swine slaughterhouse AFLP bacterioses

Abstract in Portuguese:

Arcobacter é um patógeno zoonótico emergente e as principais formas de transmissão para humanos são a manipulação e o consumo de água ou alimentos contaminados crus ou mal cozidos. O isolamento e a identificação das espécies de Arcobacter não fazem parte da rotina dos laboratórios clínicos; dessa forma, a real incidência da infecção em humanos é subestimada. O presente estudo teve o objetivo de isolar e caracterizar Arcobacter de carcaças e amostras de fezes coletadas em dois abatedouros de suínos e de carne suína de dois açougues no Estado de São Paulo, Brasil. As estirpes foram identificadas utilizando multiplex-PCR para diferenciar as espécies e foram analisadas por polimorfismo no comprimento de fragmentos amplificados (SE-AFLP). Arcobacter spp. foi isolado de 73% das carcaças, 4% das amostras de fezes e de 10% das amostras de carne suína avaliadas. A. butzleri foi a espécie mais prevalente, seguida por A. cryaerophilus. As carcaças apresentaram a maior taxa de isolamento de A. butzleri enquanto que apenas A. cryaerophilus foi isolado das amostras de fezes. SE-AFLP possibilitou a caracterização de A. butzleri e A. cryaerophilus em 51 e 63 perfis de bandas, respectivamente. A grande heterogeneidade genética observada para ambas as espécies corrobora estudos previous. Estes resultados confirmam a necessidade de protocolos de isolamento padronizados e o aperfeiçoamento das ferramentas moleculares para aprofundar os conhecimetos sobre epidemiologia das infecções pelo gênero Arcobacter.

• Arcobacter butzleri Arcobacter cryaerophilus suíno abatedouro AFLP carne suína bacterioses

Abstract in English:

The sarcocystosis is a worldwide spread disease and can affect birds, reptiles and many mammals, including man. The aim of this study was to detect the presence of Sarcocystis spp. and characterize the species found in 375 samples of meat products (filet mignon, ground beef and colonial salami). For this, we carried out the detection of the parasite by PCR for the amplification of the partial 18S rRNA gene and molecular characterization using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) with restriction enzymes Bcl I, Alu I and Rsa I. The occurrence of Sarcocystis spp. was 17% (64/375) of all samples. Among the meat products evaluated, the filet mignon samples were positive in 5.6% (7/125), the ground beef in 12.8% (16/125) and the colonial salami in 32.8% (41/125). Of the positive samples, Sarcocystis hirsuta and Sarcocystis hominis were detected, with prevalence of 93.7% (60/64) and 6.3% (4/64), respectively. Considering the relevance of sarcocystosis in public health, the occurrence of S. hominis found may be a risk factor to human contamination. However, the presence of DNA of this parasite does not necessarily mean potential of infection to humans, because good practices in the manufacturing processes can reduce the viability of the cysts.

• Sarcocystis spp. meat 18S rRNA food security meat products restriction enzyme sarcocystosis parasitoses

Abstract in Portuguese:

A sarcocistose é uma doença distribuída mundialmente, podendo acometer aves, répteis e diversos mamíferos, incluindo o homem. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença de Sarcocystis spp. e caracterizar as espécies encontradas em 375 amostras de produtos cárneos (filé mignon bovino, carne moída bovina e salame colonial). Para isso, foi realizada a detecção do parasita através da técnica de PCR para amplificação parcial do gene 18S rRNA e sua caracterização molecular utilizando o polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (RFLP) com as enzimas de restrição Bcl I, Rsa I e Alu I. A ocorrência de Sarcocystis spp. foi de 17% (64/375) do total de amostras testadas pelo PCR. Entre os produtos cárneos avaliados, 5,6% (7/125) das amostras de filé mignon, 12,8% (16/125) de carne moída e 32,8% (41/125) de embutido colonial, foram positivas para presença do DNA do Sarcocystis spp. Entre estas amostras positivas, as espécies caracterizadas foram Sarcocystis hirsuta e Sarcocystis hominis com prevalências de 93,7% (60/64) e 6,3% (4/64), respectivamente. Considerando à relevância da sarcocistose na área da saúde pública, a ocorrência de S. hominis encontrado neste estudo, pode ser um fator de risco para a contaminação humana. Porém, a presença do DNA deste protozoário não significa necessariamente potencial de infecção aos humanos, pois cuidados nos processos de fabricação podem reduzir a viabilidade dos cistos.

• Sarcocystis spp. carne 18S rRNA segurança alimentar produtos cárneos restrição enzimática sarcocistose parasitoses

Abstract in English:

Vector-borne diseases have been emerging and reemerging all over the world, causing a challenge to veterinary and human medicine. Among these diseases are those caused by agents of the order Rickettsiales, obligatory intracellular Gram-negative bacteria, with ability to infect several animals and humans. Rickettsiales of the species Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. residing in cytoplasmic vacuoles of leukocytes and platelets. Rickettsiales of the species Rickettsia spp. freely infect cytoplasm or nucleus of host cells. The aim of the present study was to investigate the natural infection with Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rickettsia spp. in captive wild felids at the Federal District and Goiás, Brazil. In addition, it was also aimed to relate possible changes in hemogram with the presence of these agents. Blood samples from 34 animals were analyzed by PCR to detect the presence of DNA from these agents. The DNA of Ehrlichia canis was detected in 5.8% (2/34) of samples. A. platys was detected in 64.7% (22/34), A. phagocytophilum was detected in 5.8% (2/34). The DNA of Rickettsia spp. was not detected in any sample. Two felides presented co-infection with E. canis and A. platys, and two presented co-infection with A. platys and A. phagocytophilum. There were no significant differences in hematological data from positive and negative samples. The data suggest that captive wild felids can serve as potential reservoirs for Ehrlichia spp. and Anaplasma spp., despite hematological abnormalities were not observed.

• Molecular investigation Ehrlichia canis Anaplasma platys Anaplasma phagocytophilum captivity wild felids Anaplasma spp. diagnose polymerase chain reaction cats parasitoses

Abstract in Portuguese:

Doenças transmitidas por vetores estão emergindo e reemergindo em todo o mundo, representando um desafio na medicina humana e veterinária. Entre essas doenças estão aquelas causadas pelos agentes da ordem das Rickettsiales, que são bactérias Gram-negativas intracelulares obrigatórias, com capacidade de infectar vários animais e seres humanos. As Rickettsiales das espécies Ehrlichia spp. e Anaplasma spp. são observadas em vacúolos citoplasmáticos de leucócitos e plaquetas. As Rickettsiales da espécie Rickettsia spp. infectam livremente citoplasma ou núcleo de células hospedeiras. O objetivo do presente estudo foi investigar a infecção natural por Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rickettsia spp. em felídeos selvagens cativos no Distrito Federal e Goiás, Brasil. Além disso, também objetivou-se relacionar possíveis alterações hematológicas decorrentes da presença desses agentes. Amostras de sangue de 34 animais foram analisadas por meio da PCR para detecção de presença de DNA desses agentes. O DNA de Ehrlichia canis foi detectado em 5,8% (2/34) das amostras, A. platys foi detectado 64,7% (22/34), A. phagocytophilum foi detectado em 5,8% (2/34). O DNA de Rickettsia spp. não foi detectado em nenhuma amostra. Dois felídeos apresentaram coinfecção por E. canis e A. platys e dois apresentaram coinfecção por A. platys e A. phagocytophilum. Não houve diferenças significativas nos dados hematológicos das amostras positivas e negativas. Os dados sugerem que os felídeos selvagens cativos podem servir como potenciais reservatórios para Ehrlichia spp. e Anaplasma spp., a despeito de não ocasionarem alterações hematológicas.

• Investigação molecular Ehrlichia canis Anaplasma platys Anaplasma phagocytophilum Rickettsia spp. felídeos selvagens cativeiro Anaplasma spp. diagnóstico PCR felinos parasitoses

Abstract in English:

ABSTRACT.- Nogueira R.M.S., Silva A.B., Sato T.P., Sá J.C., Santos A.C.G., Amorim Filho E.F., Vale T.L. & Gazêta G.S. 2017. Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1416-1422. Departamento de Patologia, Universidade Estadual do Maranhão, São Luis, MA 65055-970, Brazil. E-mail: grita62@hotmail.com Equine piroplasmosis is a tick-borne disease caused by the intraeytrhocytic protozoans Babesia caballi and Theileria equi. It has been reported as a main equine parasitic disease. In addition, Anaplasma phagocytophilum, the causative agent of granulocytic ehrlichiosis, causes a seasonal disease in horses. Both diseases, can be detrimental to animal health. In this sense, blood samples and ticks were collected from 97 horses raised in the microregion of Baixada Maranhense, Maranhão State, Brazil. Serum samples were subjected to Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) and blood samples and ticks to Polymerase Chain Reaction (PCR) to evaluate the infection by Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum. The overall seroprevalence was 38.14%, 18.55% and 11.34% for T. equi, B. caballi and A. phagocytophilum, respectively. The results of PCR from blood samples showed 13.40% and 3.09% positive samples to T. equi and B. caballi, respectively. A total of 170 tick specimens were collected and identified as Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. It was detected 2.35% (4/170) and 0.59% (1/170) positive tick samples by PCR for T. equi and B. caballi, respectively. All samples were negative to A. phagocytophilum. No statically difference (p>0.05) was observed when gender, age, use of ectoparasiticide and tick presence were analyzed. A BLASTn analysis of the sequenced samples indicated 97 to 100% similarity with T. equi 18S rRNA gene sequences in GenBank and 98 to 100% with B. caballi. Genetic analysis classified the obtained sequences as T. equi and B. caballi cluster, respectively. It can be concluded that these pathogens occur and are circulating in the studied area.

• Vector-borne Theileria equi Babesia caballi Anaplasma phagocytophilum ticks doença transmitida por vetores carrapato

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Nogueira R.M.S., Silva A.B., Sato T.P., Sá J.C., Santos A.C.G., Amorim Filho E.F., Vale T.L. & Gazêta G.S. 2017. Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil. [Detecção molecular e serológica de Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum em equinos e carrapatos no Maranhão.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1416-1422. Departamento de Patologia, Universidade Estadual do Maranhão, São Luis, MA 65055-970, Brazil. E-mail: grita62@hotmail.com A piroplasmose equina é uma doença transmitida por carrapatos causada pelos protozoários intraeritrocitários Babesia caballi e Theileria equi. É relatada como uma doença parasitária comum em equinos. Além disso, Anaplasma phagocytophilum, o agente causal da ehrlichiose granulocítica, causa uma doença sazonal em equinos. Ambas as doenças, podem ser prejudiciais para a saúde animal. Nesse sentido, amostras de sangue e carrapatos foram coletadas de 97 cavalos criados na microrregião da Baixada Maranhense, estado do Maranhão, Brasil. As amostras de soro foram submetidas ao Teste de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e amostras de sangue e os carrapatos a Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) para avaliar a infecção por Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum. A prevalência foi de 38,14%, 18,55% e 11,34% para T. equi, B. caballi e A. phagocytophilum, respectivamente. Os resultados da PCR para as amostras de sangue demonstraram 13,40% e 3,09% de positividade para T. equi e B. caballi, respectivamente. Um total de 170 specimens de carrapatos foi coletado e foram identificados Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Obteve-se 2,35% (4/170) e 0,59% (1/170) positivos por PCR para T. equi e B. caballi, respectivamente. Todas as amostras foram negativas para A. phagocytophilum. Não houve diferença estatística significativa (p>0.05) em relação ao sexo, idade, uso de ectoparasiticida e presença de carrapatos. A análise BLASTn das amostras sequenciadas para gene 18S rRNA indicaram 97 a 100% de similaridade com T. equi e 98-100% com B. caballi no GenBank. Análises genéticas classificaram as sequencias obtidas no mesmo clado que T. equi e B. caballi, respectivamente. Podemos concluir que estes patógenos estão circulando na área de estudo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pereira J.D.B., Cerqueira V.D., Bezerra Júnior P.S., Oliveira Bezerra D.K., Araújo F.R., Dias A.C.L., Araújo C.P. & Riet-Correa G. 2017. [Histopathological and molecular diagnosis of lesions suggestive of tuberculosis in buffaloes slaughtered in the municipalities of Macapá and Santana, Amapá state, Brazil.] Diagnóstico histopatológico e molecular de lesões sugestivas de tuberculose em búfalos abatidos nos municípios de Macapá e Santana, estado do Amapá. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(11):1198-1204. Universidade Federal do Pará, Rua Augusto Corrêa 1, Bairro Guamá, Castanhal, PA 66075-110, Brazil. E-mail: gabrielariet@pq.cnpq.br This study aimed to evaluate suggestive lesions of tuberculosis in buffaloes slaughtered in official slaughterhouses in the State of Amapá, Brazil, in order to confirm the diagnosis of tuberculosis by histopathological and molecular evaluation. Tissue samples of 20 buffaloes showing lesions suggestive of tuberculosis, from the municipalities of Macapá and Santana, were collected. The samples were divided into two parts: one was fixed in 10% buffered formalin and routinely processed for histopathological evaluation, stained by hematoxylin-eosin and Ziehl-Neelsen; and the other was used for Nested-PCRs for Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and for Mycobacterium bovis. Gross lesions suggestive of tuberculosis were observed in the lungs, bronchial, mediastinic, retropharyngeal and submandibular lymph nodes, liver and pleura. Histopathologically, all samples showed lesions suggestive of tuberculosis, characterized by granulomas composed of large amount of infiltration of epithelioid cells, Langhans cells and lymphocytes, bordering a necrotic core, calcified or not, surrounded by a fibrous connective tissue capsule. Acid-fast bacilli were observed in the tissues of 3/20 (15%) buffaloes. With regards to the molecular detection, 13/20 (65%) buffaloes showed positive tissue samples: 6 were positive both in the MTC and M. bovis Nested-PCRs, one was positive only in the MTC Nested-PCR, and 6 were positive only in the M. bovis Nested-PCR. The results of this study demonstrate the importance of diagnosing TB in buffaloes in the region and point to the requirement to implement effective measures to control and eradicate the disease.

• Tuberculosis buffaloes Mycobacterium bovis Mycobacterium tuberculosis Nested-PCR tuberculose búfalos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pereira J.D.B., Cerqueira V.D., Bezerra Júnior P.S., Oliveira Bezerra D.K., Araújo F.R., Dias A.C.L., Araújo C.P. & Riet-Correa G. 2017. [Histopathological and molecular diagnosis of lesions suggestive of tuberculosis in buffaloes slaughtered in the municipalities of Macapá and Santana, Amapá state, Brazil.] Diagnóstico histopatológico e molecular de lesões sugestivas de tuberculose em búfalos abatidos nos municípios de Macapá e Santana, estado do Amapá. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(11):1198-1204. Universidade Federal do Pará, Rua Augusto Corrêa 1, Bairro Guamá, Castanhal, PA 66075-110, Brazil. E-mail: gabrielariet@pq.cnpq.br Este estudo teve como objetivo avaliar lesões sugestivas de tuberculose em búfalos abatidos em matadouros oficiais no Estado do Amapá, Brasil, a fim de confirmar o diagnóstico de tuberculose por avaliação histopatológica e molecular. As amostras de tecido de 20 búfalos que apresentavam lesões sugestivas de tuberculose, dos municípios de Macapá e Santana, foram coletadas. As amostras foram divididas em duas partes: uma delas foi fixada em formalina a 10% tamponada e rotineiramente processadas para avaliação histopatológica, coradas pela hematoxilina-eosina e Ziehl-Neelsen; e o outra parte foi usado para Nested-PCR para o complexo de Mycobacterium tuberculosis (CMT) e para Mycobacterium bovis. As lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose foram observadas nos pulmões, linfonodos brônquicos, mediastínicos, retrofaríngeos e submandibulares, fígado e pleura. Histopatologicamente, todas as amostras apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, caracterizadas por granulomas compostos por grande quantidade de infiltração de células epitelióides, células de Langerhans e linfócitos, margeando um centro necrótico, calcificado ou não, rodeado por cápsula de tecido conjuntivo fibroso. Bacilos álcool-ácido resistentes foram observados nos tecidos de 3/20 (15%) búfalos. Com relação à detecção molecular, 13/20 (65%) bubalinos apresentaram amostras de tecidos positivos: 6 foram positivos nas Nested-PCRs para CMT e M. bovis, um foi positivo apenas na Nested-PCR para CMT, e 6 foram positivos apenas na Nested-PCR para M. bovis. Os resultados deste estudo demonstram a importância de diagnosticar a tuberculose em búfalos na região e apontam para a necessidade de implementar medidas eficazes para controlar e erradicar a enfermidade.