Resultado da pesquisa (146)

Termo utilizado na pesquisa Diagnosis

#11 - Indirect ELISA as a complementary diagnostic method of bovine tuberculosis

Abstract in English:

Bovine tuberculosis is an economic and health problem, requiring precise diagnostic methods for its control and eradication. The aim of this study was to evaluate the performance of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test for the diagnosis of bovine tuberculosis. A total of 1,644 cattle from eight dairy herds were evaluated using the comparative cervical tuberculin test (CCTT). Three of the herds had no recent tuberculosis infection, and the other five had shown positive results in a previous tuberculin test. For the serological diagnosis of tuberculosis, a commercial ELISA antibody test kit for Mycobacterium bovis was used. Serum samples from 846 cattle from the eight herds were evaluated using ELISA for M. bovis. Animals that were positive based on either CCTT or ELISA for M. bovis or both were sent to slaughter. Samples of their lungs, livers, and lymph nodes were collected and stored under refrigeration for microbiological culture and subsequent confirmation by polymerase chain reaction. Samples from the same tissues were also fixed with 10% formaldehyde in bottles for histopathological examination and stained with hematoxylin and eosin (HE). Of the 1,644 cattle, 61 were considered positive and 65 inconclusive based on CCTT. Retesting of the inconclusive samples identified an additional 19 positive cases, totaling 80 (4.8%) CCTT-positive animals from five herds. ELISA for M. bovis identified 4.2% (36/846) positive cattle, of which 35 were considered negative and one inconclusive based on CCTT. Of the 36 positive cases identified by ELISA for M. bovis, 27 were euthanized, 11% (3/27) showed suggestive lesions of tuberculosis on macroscopic examination, and two were confirmed by histological, microbiological, and PCR methods. The weak association of ELISA for M. bovis with the results obtained by macroscopic, histological, and microbiological isolation indicates the fragility of ELISA performance in field conditions. Therefore, it is suggested that its use as a complementary method for herd sanitation be based on the local epidemiological situation.

Abstract in Portuguese:

A tuberculose bovina é um problema econômico mundial e de saúde, que requer métodos de diagnóstico precisos para controle e erradicação. Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho de um teste comercial de ELISA no diagnóstico da tuberculose bovina. Foram avaliados pelo teste cervical comparativo (TCC) 1644 bovinos, provenientes de oito rebanhos de exploração leiteira, sendo três deles sem histórico recente da doença, e outros cinco com resultados positivos no último exame de tuberculinização. Para o diagnóstico sorológico da tuberculose utilizou-se um kit comercial de ELISA Mycobacterium bovis antibody test (ELISA M. bovis). Amostras de soro sanguíneo de 846 bovinos provenientes dos mesmos rebanhos foram também avaliadas no ELISA M. bovis. Os bovinos positivos no TCC e/ou ELISA M. bovis foram encaminhados para o abate sanitário. Dos positivos no ELISA para M. bovis foi realizado o exame macroscópico das carcaças e classificação das mesmas em: com presença ou ausência de lesões. Amostras de pulmão, fígado, e linfonodos, foram colhidas em duplicata para realização dos exames de cultivo microbiológico com posterior confirmação por PCR, e exame histopatológico com coloração de hematoxilina e eosina (HE). Dos 1,644 bovinos, 61 foram considerados positivos e 65 inconclusivos no TCC. O reteste dos inconclusivos identificou mais 19 positivos. No total, 80 (4,8%) bovinos positivos no TCC, provenientes de 5 rebanhos foram encaminhados para abate. O ELISA para M. bovis identificou 4,2% (36/846) de bovinos positivos, sendo 36 considerados negativos e um inconclusivo no exame de tuberculinização. Dos positivos no ELISA para M. bovis, 27 foram eutanasiados, e no exame macroscópico das carcaças 11% (3/27) dos animais apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, e em apenas dois houve confirmação da doença pelos métodos histológico, microbiológico e PCR. A baixa associação dos resultados obtidos no ELISA para M. bovis com os exames macroscópico, histológico e isolamento microbiológico apontam para a fragilidade do desempenho do ELISA para o diagnóstico de tuberculose. Sugere-se assim que seu uso como método complementar para saneamento de rebanhos, seja adotado com cautela e considere a situação epidemiológica local.


#12 - Diagnosis and phylogenetic analysis of bovine viral diarrhea virus in cattle (Bos taurus) and buffaloes (Bubalus bubalis) from the Amazon region and Southeast Brazil

Abstract in English:

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a highly infectious pathogen that affects bovines worldwide leading to great economic impact. Although Brazil has the largest commercial cattle population throughout the world and an increasing buffalo breeding industry, the country has no control or eradication program for BVDV. In this perspective, the aim of this study was to evaluate the occurrence of BVDV in cattle and buffaloes from two Brazilian states. Four different ELISA tests were performed and confirmed by virus neutralization testing (VNT). The presence of BVDV antibodies in the serum or plasma from 77 cattle from six herds (ELISA-1 and ELISA-4) and from 89 buffaloes from three herds (ELISA-1 through ELISA-4) was detected. Extraction of viral RNA was performed from the serum or plasma samples for the detection of BVDV by RT-PCR analysis. Amplified nucleotide sequences were used to construct a phylogenetic tree. In cattle, ELISA-1 detected 49.4% of seropositive animals, while ELISA-4 detected 37.7%. In buffaloes, ELISA-1 failed to detect any seropositive animals, while ELISA-2 and ELISA-3 detected 20.2% of seropositive animals, and ELISA-4 detected 21.3%. Eight of the nine herds tested had seropositive animals. The rate of PCR positive animals was 6.5% in cattle and 9% in buffaloes. Subtype 1d was found in cattle, and subtypes 1d and 1f were found in buffaloes. This is the first-time subtype 1f has been reported in Brazil. The absence of a control and eradication program seems to be favoring the spread of BVDV in the Brazilian herds. In addition, the improvement of diagnostic strategies for BVDV in buffaloes are required.

Abstract in Portuguese:

Diarreia viral bovina (BVDV) é um patógeno altamente infeccioso que afeta bovinos em todo o mundo elevando o impacto econômico. Apesar de o Brasil possuir a maior população bovina comercial em todo o mundo e uma indústria de criação bubalina em ascendência, o país não tem programa de controle e erradicação para BVDV. Nessa perspectiva, o objetivo deste estudo é avaliar a ocorrência do BVDV em bovinos e bubalinos de dois estados brasileiros. Quatro testes de ELISA foram realizados e confirmados por teste de vírus neutralização (VNT). A presença de anticorpos contra BVDV no soro ou plasma de 77 bovinos de seis rebanhos (ELISA-1 e ELISA-4) e de 89 búfalos de três rebanhos (ELISA-1 ao ELISA-4) foi detectada. Extração de RNA viral foi realizada em amostras de soro ou plasma para detecção de BVDV por análise de RT-PCR. Sequências de nucleotídeos amplificadas foram utilizadas para construção de uma árvore filogenética. Em bovinos, o ELISA-1 detectou 49.4% dos animais soropositivos, enquanto ELISA-4 detectou 37.7%. Em búfalos, o ELISA-1 falhou em detectar animais soropositivos, enquanto o ELISA-2 e o ELISA-3 detectaram 20.2% dos animais soropositivos e o ELISA-4 detectou 21.3%. Oito de nove rebanhos continham animais soropositivos. A frequência de animais PCR positivos foi de 6.5% em bovinos e 9% em búfalos. Os subtipos 1d foi encontrado em bovinos e os subtipos 1d e 1f foram encontrados em búfalos. Este é o primeiro relato da presença do subtipo 1f no Brasil. A ausência de um programa de controle e erradicação parece favorecer a disseminação de BVDV nos rebanhos brasileiros. Além disso, a melhora de estratégias de diagnóstico para BVDV em búfalos é necessária.


#13 - Hepatic changes in Gallus gallus domesticus in Brazil

Abstract in English:

The occurrence and the frequency of hepatic changes in chickens, including broiler (BC), layer (LC) and backyard chickens (BYC) were investigated. The retrospective and prospective study (2006-2021) was conducted with a total of 300 cases of liver disorders. Industrial poultry (BC and LC) were frequently affected (88%) and noninfectious changes were the most diagnosed (69%). Considering etiology or conditions, the hepatic changes were classified as follows: degenerative changes (42%), bacterial (28%), metabolic (15%), toxic (8%), viral (3%), neoplastic (2%), protozoal diseases (1.5%) and circulatory disorders (0.5%). Regarding the type of bird, degenerative, toxic changes and viral hepatitis were more frequent in BC. Circulatory and metabolic disorders, as well as bacterial hepatitis, were more frequently diagnosed in LC. Neoplastic and protozoal hepatitis occurred more frequently in BYC. The macroscopic examination in association with histopathology enabled the diagnosis of the hepatic changes in 59% of the cases. Considering bacterial hepatitis in commercial poultry, the etiological diagnosis is highly important, in view of the risk for public health, despite the obvious importance due to the productivity losses and condemnation at processing.

Abstract in Portuguese:

A ocorrência e a frequência de alterações hepáticas em aves, incluindo frangos de corte (FC), galinhas poedeiras (GP) e aves de subsistência (AS) foram investigadas. O estudo retrospectivo e prospectivo (2006-2021) foi realizado com um total de 300 casos de alterações hepáticas. Aves industriais (FC e GP) foram frequentemente acometidas (88%) e as alterações não infecciosas foram as mais comumente diagnosticadas (69%). Quanto à etiologia ou condição, as alterações hepáticas foram classificadas da seguinte forma: alterações degenerativas (42%), bacterianas (28%), metabólicas (15%), tóxicas (8%), virais (3%), neoplásicas (2%), bem como doenças por protozoários (1,5%) e distúrbios circulatórios (0,5%). Em relação ao tipo de ave, alterações degenerativas, tóxicas e hepatites virais foram mais frequentes nos FC. Distúrbios circulatórios e metabólicos, assim como hepatites bacterianas, foram diagnosticados com maior frequência nas GP. Neoplasias e hepatite por protozoário ocorreram com maior frequência em AS. O exame macroscópico associado à histopatologia possibilitou o diagnóstico da alteração hepática em 59% dos casos. Considerando a hepatite bacteriana em aves comerciais, o diagnóstico etiológico é de grande importância, em vista do risco para a saúde pública, apesar da óbvia importância devido às perdas de produtividade e condenação no processamento.


#14 - Guidelines for the diagnosis and differential diagnosis of snakebite envenoming of ruminants in Brazil

Abstract in English:

In Brazil, snakebites are often cited as a cause of mortality in ruminants, but there are discrepancies in the literature regarding its actual prevalence, either by lack of diagnosis or by mistakes in the differential diagnosis. Among the factors that hinder the diagnosis are included the inconsistencies to distinguish between accidents caused by Bothrops and Crotalus, responsible for over 90% of the cases. For the diagnosis of accidents involving Lachesis muta, both the neurotropic and the proteolytic/hemolytic effects must be considered, similar to what is described in Crotalus scutulatus. This article describes the main clinical, pathological, and laboratory findings observed in envenoming by the aforementioned snakes and suggests procedures for establishing the diagnosis and differential diagnosis starting from a logical sequence, based on epidemiological evidence, clinical, laboratory, and pathological findings.

Abstract in Portuguese:

No Brasil, acidentes ofídicos são frequentemente citados como causa de mortalidade em ruminantes, mas existem discrepâncias em relação a sua atual prevalência, seja por falta de diagnóstico ou por erros no diagnóstico diferencial. Entre os fatores que dificultam o diagnóstico estão as inconsistências para distinguir entre os acidentes causados por Bothrops e Crotalus, responsáveis por mais de 90% dos casos. Para o diagnóstico de envenenamentos por Lachesis muta, devem ser considerados os efeitos neurotrópico e proteolítico/hemolíticos concomitantes, a exemplo do que ocorre com algumas cascavéis norte-americanas (Crotalus scutulatus, entre elas). Este artigo descreve os principais achados clinicopatológicos e laboratoriais observados em casos de envenenamento pelas serpentes citadas e sugere um roteiro simplificado para o estabelecimento do diagnóstico e diagnóstico diferencial, a partir de uma sequência lógica, baseada em evidências epidemiológicas e achados clínicos, laboratoriais e patológicos.


#15 - Molecular diagnosis of avian viruses in grassland passerines and captive yellow cardinals Gubernatrix cristata in Brazil

Abstract in English:

Avian influenza viruses (AIVs), Newcastle disease virus (NDV), West Nile virus (WNV), adenovirus (AV) and herpesvirus (HV) play an important role in the health of human and animal populations. However, knowledge of the prevalence of these viruses in wild birds is restricted to some groups (e.g. shorebirds) or regions worldwide. Information on grassland birds of South America, which is essential for their conservation, is scarce. The objectives of the present study were to evaluate occurrences of AIV, NDV, WNV, AV and HV for the first time in a bird community of a unique protected area in southern Brazil, which is home for the critically endangered yellow cardinal (Gubernatrix cristata), and captive yellow cardinals from fauna maintainers of the Brazilian Captive Program of the Yellow Cardinal. Passerine species of wild life were caught, identified and samples (swabs) were collected from the oropharynx and cloaca of 64 passerines of 26 species (including 3 yellow cardinals) and 30 yellow cardinals of captive, for molecular diagnosis. The samples were subjected to RNA and DNA extraction and the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) for AIV, NDV and WNV and nested PCR for AV and HV. One yellow cardinal of captive presented a positive result for AV, this result is important for planning, managing natural attributes and making decisions in relation to integrated conservation of threatened species. This is the first report of AV in yellow cardinal and epidemiological investigation of viruses in wild passerines of the Pampa biome, in Rio Grande do Sul, Brazil.

Abstract in Portuguese:

Os vírus da gripe aviária (VGA), vírus da doença de Newcastle (VDN), vírus do Nilo Ocidental (VNO), adenovírus (AV) e herpesvírus (HV) desempenham um papel importante na saúde das populações humana e animal. No entanto, o conhecimento da prevalência desses vírus em aves selvagens é restrito a alguns grupos (por exemplo, aves limícolas) ou regiões em todo o mundo. As informações sobre as aves campestres da América do Sul, essenciais para a sua conservação, são escassas. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ocorrência de VGA, VDN, VNO, AV e HV pela primeira vez em uma comunidade de aves de uma área única protegida no Sul do Brasil, que abriga o cardeal-amarelo (Gubernatrix cristata) criticamente ameaçado de extinção e em cardeais-amarelos de cativeiro dos mantenedores de fauna do Programa Brasileiro de Cativeiro do Cardeal-amarelo. Espécies de passeriformes silvestres foram capturadas, identificadas e amostras (swabs) foram coletadas da orofaringe e cloaca de 64 passeriformes de 26 espécies (incluindo 3 cardeais-amarelos) e 30 cardeais-amarelos de cativeiro, para diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas à extração de RNA e DNA e à reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) para VGA, VDN e VNO e nested PCR para AV e HV. Um cardeal-amarelo de cativeiro apresentou resultado positivo para AV, este resultado é importante para o planejamento, manejo dos atributos naturais e tomada de decisões em relação à conservação integrada de espécies ameaçadas. Este é o primeiro relato de AV em cardeal-amarelo e de investigação epidemiológica de vírus em passeriformes silvestres do bioma Pampa, no Rio Grande do Sul, Brasil.


#16 - Cloning and expression of Neospora caninum rhoptry 2 and its potential as an immunobiological for neosporosis control

Abstract in English:

The protozoan Neospora caninum is known worldwide as one of the main causes of abortion in cattle. During infection, rhoptry proteins present in the apical complex of the parasite play important roles in adhesion and parasitophorous vacuole formation. The use of N. caninum ROP2 in experimental vaccines has shown promising protective results. In our study we performed cloning and expression in Escherichia coli of an antigenic portion of N. caninum ROP2. The recombinant protein (rROP2) was obtained in insoluble form, and the purified protein showed a size of approximately 18kDa. Even being a small truncate NcROP2 region, it was possible to conserve the antigenic epitopes which were recognized by bovine serum naturally infected with N. caninum. Vaccination with rROP2 on aluminum hydroxide adjuvant induced high levels of rROP2-specific IgG antibodies capable of recognizing native protein in tachyzoite lysates. In conclusion, our approaches were effective in obtaining the rROP2 protein, which induced specific mouse immune response and was also recognized by sera from N. caninum naturally infected cattle. These results suggest that it is a promising antigen for the development of neosporosis subunit vaccines as well as a suitable antigen for use in immunodiagnosis.

Abstract in Portuguese:

O protozoário Neospora caninum é conhecido mundialmente como uma das principais causas de aborto em bovinos. Durante a infecção, as proteínas rhoptry presentes no complexo apical do parasita desempenham papel importante na adesão e formação de vacúolos parasitóforos. O uso de ROP2 de N. caninum em vacinas experimentais tem mostrado resultados de proteção promissores. Em nosso estudo, realizamos a clonagem e expressão em Escherichia coli de uma porção antigênica de N. caninum ROP2. A proteína recombinante (rROP2) foi obtida na forma insolúvel, e a proteína purificada apresentou tamanho aproximado de 18kDa. Mesmo sendo uma pequena região truncada de NcROP2, foi possível conservar os epítopos antigênicos que foram reconhecidos pelo soro de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. A vacinação com rROP2 adsorvida no adjuvante de hidróxido de alumínio induziu altos níveis de anticorpos IgG anti-rROP2, capazes de reconhecer a proteína nativa em lisados ​​de taquizoítos. Em conclusão, nossas abordagens foram eficazes na obtenção da proteína rROP2, que induziu resposta imune específica em camundongos e também foi reconhecida por soros de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. Estes resultados sugerem que rROP2 é um antígeno promissor para o desenvolvimento de vacinas de subunidades de neosporose, bem como um antígeno adequado para uso em imunodiagnóstico.


#17 - Ultrasound with laparoscopy for the diagnosis of abdominal disorders in cattle

Abstract in English:

This study aimed to evaluate laparoscopy with abdominal ultrasound exams to establish accurate diagnosis and prognosis. The experimental design was a prospective clinical study. Nine adult crossbred bovines suffering from abdominal disorders were admitted to the cattle clinic for clinical examinations. Abdominal ultrasound was carried out, and complete blood counts were performed. Subsequently, exploratory laparoscopy was performed. After surgery (exploratory laparoscopy on the right or left side), animals with a severe prognosis or untreatable clinical condition were euthanised and necropsied. During laparoscopy, circumscribed reticuloperitonitis could not be detected, nor could other abnormalities in the cranioventral region of the abdomen previously observed on ultrasound and confirmed during necropsy. However, alterations due to peritoneal damage, such as adhesions, were observed dorsally in addition to alterations in macroscopic aspects of the peritoneal fluid. Exploratory standing laparoscopy through the paralumbar fossae may constitute a supplementary procedure for diagnosing abdominal disorders in cattle, but it is not suitable in cases of diseases characterised by focal lesions concentrated in the cranioventral region of the abdomen. When associated with clinical, laboratory, and ultrasound examinations, this technique may improve the accurate diagnosis and prognosis of abdominal disorders in cattle.

Abstract in Portuguese:

Este estudo teve como objetivo avaliar a laparoscopia com exames de ultrassom abdominal para estabelecer um diagnóstico e prognóstico precisos. O desenho experimental foi um estudo clínico prospectivo. Nove bovinos adultos mestiços com distúrbios abdominais foram utilizados. Os bovinos admitidos na Clínica de Bovinos foram submetidos a exame clínico, adicionalmente foram realizadas hemograma e ultrassonografia abdominal. Posteriormente, foi realizada laparoscopia exploratória. Após a cirurgia (laparoscopia exploratória no lado direito ou esquerdo), nove animais com manifestações clínicas graves e intratáveis foram sacrificados e necropsiados. Durante a laparoscopia, não foi possível detectar reticuloperitonite circunscrita, bem como outras anormalidades na região crânio-ventral do abdome, previamente observadas na ultrassonografia e confirmadas durante a necropsia. No entanto, alterações devido a dano peritoneal, como aderências, foram observadas dorsalmente. É possível que a laparoscopia exploratória em apoio quadrupedal através da fossa paralombar constitua um procedimento complementar para o diagnóstico de distúrbios abdominais em bovinos, embora não seja adequado em casos de doenças caracterizadas por lesões focais concentradas na região cranioventral do abdome. Quando associada a exames clínicos, laboratoriais e de ultrassom, essa técnica pode melhorar o diagnóstico e prognóstico preciso dos distúrbios abdominais em bovinos.


#18 - Causes of death in sheep in Rio Grande do Sul, Brazil: analysis of 523 cases (2004-2019)

Abstract in English:

The increase in the commercialization of sheep products requires an equivalent improvement in flock health and rapid disease identification. Data regarding the cause of death in sheep were reviewed from the database of the “Setor de Patologia Veterinária” from the “Universidade Federal do Rio Grande do Sul”, from January 2004 and December 2019. Epidemiological features, such as breed, sex, and age, in addition to the clinical and pathological features, were analyzed. During this period, tissues from 523 sheep were evaluated, in which a conclusive diagnosis was obtained in 457 (87%) of the cases. The majority of sheep were from the metropolitan mesoregion of Porto Alegre. The most common breed was Texel 171/523 (33%). From all the conclusive diagnoses, 158/457 (35%) corresponded to infectious non-parasitic diseases, 117/457 (26%) were caused by toxic etiology, 95/457 (21%) were infectious parasitic diseases, 42/457 (9%) were included in the nutritional and metabolic category, 38/457 (8%) were in the “others” category, and 7/457 (1.5%) were congenital defects. The age of sheep included in this study ranged from 1 day to 7 years. Among cases with conclusive diagnosis, the main cause of death was haemonchosis with 83/457 (18%) of cases, followed by pneumonia 29/457 (6%), Baccharis sp. poisoning 25/457 (5%), and bluetongue 22/457 (5%).

Abstract in Portuguese:

O aumento da comercialização de produtos ovinos requer um aumento equivalente na sanidade do rebanho e uma rápida identificação de doenças. Os dados sobre as causas de morte em ovinos foram revisados no banco de dados do Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre janeiro de 2004 e dezembro de 2019. Aspectos epidemiológicos, como raça, sexo e idade, além das características clínicas e patológicas, foram compilados. Nesse período, foram avaliados tecidos de 523 ovinos, em que o diagnóstico conclusivo foi obtido em 457 (87%) dos casos. A grande maioria dos ovinos era da mesorregião metropolitana de Porto Alegre. A raça mais comum foi Texel 171/523 (33%). De todos os diagnósticos conclusivos, 158/457 (35%) corresponderam a doenças infecciosas não-parasitárias, 117/457 (26%) foram causadas por doenças tóxicas, 95/457 (21%) doenças infecciosas parasitárias, 42/457 (9%) foram incluídos na categoria nutricional e metabólica, 38/457 (8%) foram classificadas na categoria “outros”, e 7/457 (1,5%) eram defeitos congênitos. A faixa etária das ovelhas incluídas neste estudo foi de um dia a sete anos de idade. Entre os casos com diagnóstico conclusivo, a principal causa de óbito foi hemoncose com 83/457 (18%) dos casos, seguida de pneumonia 29/457 (6%), intoxicação por Baccharis sp. 25/457 (5%), e infecção pelo vírus da língua azul 22/457 (5%).


#19 - Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle

Abstract in English:

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal’s clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.

Abstract in Portuguese:

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.


#20 - About the necessity of including HoBi-like pestiviruses in bovine respiratory and reproductive viral vaccines

Abstract in English:

HoBi-like pestiviruses (HoBiPeV) constitute a novel group of bovine pestiviruses, genetically and antigenically related to bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1) and BVDV-2. Recent data shows that HoBiPeV are endemic among Brazilian cattle, yet bovine reproductive/respiratory vaccines contain only BVDV-1 and BVDV-2 strains. The present study investigated the neutralizing antibody response against these pestiviruses induced by two commercial vaccines (VA = attenuated, VI = inactivated) and by three experimental, replicative, vaccine formulations (VAC1 = monovalent, BVDV-1; VAC2 = bivalent, BVDV-1 + BVDV-2; VAC3 = trivalent, BVDV-1 + BVDV-2 and HoBiPeV). Seronegative beef calves were immunized once (replicative vaccines) or twice (inactivated vaccine) and serum samples were tested by virus-neutralization (VN) 30 days after vaccination (dpv) (replicative vaccines) or 30 days after the second dose (VI). We considered a threshold VN titer of ≥60 indicative of protection against clinical disease. At 30 dpv, VA induced protective titers against BVDV-2 in 7/7 animals (GMT=289.8) and against BVDV-1 and HoBiPeV in 5/7 animals (GMTs=97.5 and 80, respectively). VI induced protective titers against BVDV-1 in 1/7 animal (GMT=16.4), 2/7 animals against BVDV-2 (GMT=53.8) and in none of the calves against HoBiPeV (GMT=12.2). When a pool of sera of each vaccine group was tested against individual Brazilian isolates, VA induced protective titers against 3/7 BVDV-1 isolates, to 9/10 (BVDV-2) and 1/8 (HoBiPeV); VI induced protective titers against 1/7 (BVDV-1), 1/10 (BVDV-2) and none (0/8) HoBiPeV isolates. The experimental vaccine VAC1 induced protective titers against BVDV-1 in 9/9 animals (GMT=320) but in no animal against BVDV-2 or HoBiPeV (GMT<10). VAC2 induced protective titers to BVDV-1 and BVDV-2 in 9/9 animals (GMTs=160 and 640, respectively), and against HoBiPeV in 7/9 animals (GMT=108.5). Finally, VAC3 induced protective titers in all animals against BVDV-1 (GMT=234.3), BVDV-2 (294.9) and HoBiPeV (201.1). Testing the pool of sera against pestivirus isolates, VAC1 induced titers ≥ 60 against 4/7 BVDV-1 but to none BVDV-2/HoBiPeV isolate; VAC2 induced protective titers against 4/7 BVDV-1; 10/10 BVDV-2 and 2/8 HoBiPeV; VAC3 induced protective titers against all BVDV-1, BVDV-2 and HoBiPeV isolates. These results indicate that vaccines composed by BVDV-1+BVDV-2, especially those containing inactivated virus, may not induce serological response against a variety of HoBiPeV isolates. Thus, the need of inclusion of HoBiPeV in vaccine formulations should be considered.

Abstract in Portuguese:

Os pestivírus HoBi-like (HoBiPeV) compõe um grupo novo de pestivírus de bovinos, genética e antigenicamente relacionados com os vírus da diarreia viral bovina 1 e 2 (BVDV-1, BVDV2). Dados recentes indicam que os HoBiPeV são endêmicos na população bovina do Brasil, mas as vacinas respiratórias e reprodutivas bovinas contêm apenas cepas de BVDV-1 e BVDV-2. O presente estudo investigou a atividade neutralizante contra estes pestivírus induzidas por duas vacinas comerciais (VA = atenuada, VI = inativada) e por três vacinas experimentais replicativas (VAC1 = monovalente, BVDV-1; VAC2 = bivalente, BVDV-1 + BVDV-2; VAC3 = trivalente, BVDV-1 + BVDV-2 e HoBiPeV). Bezerros soronegativos foram imunizados uma vez (vacinas replicativas) ou duas (vacina inativada) e amostras de soro foram testadas por vírus-neutralização (VN) 30 dias após a vacinação (dpv) (vacinas replicativas) ou 30 dias após a segunda dose (VI). Títulos neutralizantes ≥60 foram considerados indicativos de proteção contra doença clínica. Nesta data, a VA induziu títulos protetivos contra o BVDV-2 em 7/7 animais (GMT=289,8) e contra BVDV-1 e HoBiPeV em 5/7 animals (GMTs=97,5 e 80, respectivamente). VI induziu títulos protetores contra BVDV-1 em 1/7 animal (GMT=16,4), em 2/7 animais contra BVDV-2 (GMT=53,8) e em nenhum contra HoBiPeV (GMT=12,2). Quando um pool de soro de cada grupo vacinal foi testado frente a isolados Brasileiros, a VA induziu títulos protetores contra 3/7 isolados de BVDV-1, 9/10 (BVDV-2) e 1/8 (HoBiPeV); VI induziu títulos protetores em 1/7 contra BVDV-1, 1/10 (BVDV-2) e em nenhum (0/8) contra isolados de HoBiPeV. A VAC1 induziu títulos protetores contra BVDV-1 em 9/9 animais (GMT=320) mas em nenhum animal contra BVDV-2 ou HoBiPeV (GMT<10). VAC2 induziu títulos protetores contra BVDV-1e BVDV-2 em 9/9 animais (GMTs=160 e 640, respectivamente),e contra HoBiPeV em 7/9 animais (GMT=108,5). Finalmente, VAC3 induziu títulos protetores em todos os animais contra BVDV-1 (GMT=234,3), BVDV-2 (294,9) e HoBiPeV (201,1). No teste de pool de soro contra isolados de pestivírus, VAC1 induziu títulos ≥60 contra 4/7 BVDV-1 mas contra nenhum isolado de BVDV-2/HoBiPeV; VAC2 induziu títulos protetores contra 4/7 BVDV-1; 10/10 BVDV-2 e 2/8 HoBiPeV; VAC3 induziu títulos protetores contra todos BVDV-1, BVDV-2 e HoBiPeV. Esses resultados indicam que vacinas contendo apenas BVDV-1 BVDV-2, especialmente aquelas inativadas, podem não conferir resposta sorológica protetora contra vários isolados de HoBiPeV. Portanto, a necessidade de se incluir cepas de HoBiPeV nas vacinas deve ser considerada.


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